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人fgl2凝血酶原酶cDNA的克隆、序列分析及真核表达载体的构建: 2010年; 目的:克隆人fgl2凝血酶原酶cDNA,分析其序列组成,构建真核表达载体。方法:从外周血单个核细胞中提取总RNA后,应用RT-PCR方法扩增fgl2凝血酶原酶cDNA,目的基因与pcDNA3真核表达载体连接,经酶切和测序鉴定,应用软件分析其序列。结果:克隆了人fgl2凝血酶原酶cDNA全长序列,所扩增的cD-NA序列与genebank中发布的序列一致,构建的pcDNA3-fgl2真核表达载体与所设计的完全一致。结论:成功地克隆了人fgl2凝血酶原酶cDNA,构建了其真核表达载体,为研究其生物学功能奠定了基础。; 李学军夏凌辉宋善俊孙碧红李永敢; 关键词：基因克隆真核表达

人fgl2凝血酶原酶FRED结构域的原核表达、纯化及其凝血活性的鉴定被引量：5: 2009年; 目的建立人fgl2凝血酶原酶纤维蛋白原相关结构域(fibrinogen-related domain,FRED)的原核表达系统,并鉴定表达蛋白的凝血活性。方法应用RT-PCR从外周血单个核细胞扩增fgl2凝血酶原酶FRED基因,克隆到原核表达载体pET22b(+),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达,重组蛋白经SDS-PAGE电泳和免疫印迹鉴定并用His-Tag柱纯化,以促凝活性(procoagulant activity,PCA)检测鉴定其凝血功能。结果扩增了人fgl2凝血酶原酶FRED基因,成功构建了重组pET-FRED原核表达质粒,表达的融合蛋白具有直接促凝血活性。结论建立了人fgl2凝血酶原酶FRED的高效原核表达系统,FRED可能为fgl2凝血酶原酶促凝血的活性区域。; 李学军宋善俊李永敢阳文捷许力魏华萍; 关键词：原核表达促凝活性

hfgl2凝血酶原酶基因5′端调控序列的克隆及生物信息学分析: 2012年; 目的扩增人纤维蛋白原样蛋白2(hfgl2)凝血酶原酶基因5′端调控序列,构建荧光素酶报告基因表达载体,对hfgl2基因5′侧翼启动子序列进行生物信息学分析,预测可能的调控区域及顺式作用元件。方法用聚合酶链反应(PCR)法从人外周血单个核细胞基因组DNA中扩增hfgl2凝血酶原酶基因5′端调控序列,PCR产物酶切后克隆至pGL3-Basic载体,重组质粒行酶切及测序鉴定,使用在线分析软件对5′端调控序列中的转录因子结合位点及启动子序列进行预测。结果扩增了长度为1 567bp的hfgl2凝血酶原酶基因5′端序列,酶切及测序鉴定证实构建的pGL3-hfgl2质粒插入片段正确无误,分析显示该基因序列共含有138个、31种顺式作用元件。结论构建hfgl2基因近端启动子转录调控序列荧光素酶报告基因的表达载体为研究hfgl2的转录调控奠定了基础。; 李学军张灏李永敢孙碧红; 关键词：转录启动子质粒转录调控顺式作用元件

人fgl2凝血酶原酶基因的真核表达及其凝血功能研究被引量：3: 2011年; 目的将人fgl2凝血酶原酶基因进行真核表达,了解表达蛋白的分布特点,初步研究其凝血活性。方法将pcDNA3-fgl2重组质粒转化大肠埃希菌,利用脂质体转染至HL-60细胞;RT-PCR法检测其fgl2凝血酶原酶mRNA的表达,间接免疫荧光法标记fgl2凝血酶原酶蛋白,应用激光共聚焦显微镜观察其分布,流式细胞仪检测fgl2凝血酶原酶蛋白在细胞膜的表达;并通过检测转染细胞的促凝活性(PCA)分析其凝血功能。结果 pcDNA3-fgl2真核表达质粒在HL-60细胞中进行了瞬时表达,转染细胞可见明显的fgl2凝血酶原酶mRNA条带。激光共聚焦显微镜观察到转染细胞胞质中可见明显的绿色荧光,流式细胞仪在转染细胞胞膜上未检测到明显的蛋白表达。转染pcDNA3-fgl2重组质粒细胞的PCA明显增高且依赖于凝血酶原。结论成功地将fgl2凝血酶原酶基因在HL-60细胞中进行了瞬时表达;fgl2凝血酶原酶主要在胞质中表达,细胞膜上无分布并可能分泌到细胞外;凝血功能分析显示fgl2凝血酶原酶具有直接激活凝血酶原的功能。; 李学军宋善俊魏文宁李永敢孙碧红; 关键词：真核表达促凝活性激光共聚焦显微镜

凝血因子fgl2凝血酶原酶研究现状: 2007年; fgl2凝血酶原酶是一种直接激活凝血酶原的凝血因子。反式因子通过与小鼠fgl2凝血酶原酶基因启动子中正性调控结构域结合而对其表达进行调控,人fgl2凝血酶原酶基因的表达调控可能之相似。作为一种免疫-凝血的中介物,fgl2凝血酶原酶在病毒引起的肝损伤、自发性流产及移植排斥反应等病理过程中发挥重要的作用。; 李学军; 关键词：基因表达血栓形成

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广西壮族自治区自然科学基金(0447025)