“十五”国家科技攻关计划(2004BA519A23)
- 作品数：3 被引量：12H指数：2
- 相关作者：王秀荣陈化兰包红梅刘丽玲田国彬更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学黑龙江民族职业学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项中俄国际合作项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 4种禽病毒抗体可视化蛋白芯片的制备及应用被引量：8
- 2009年
- 【目的】研制可同时鉴别检测AI、ND、IB、IBD等4种禽病血清抗体的可视化蛋白芯片。【方法】用超速离心法和蔗糖密度梯度法分别纯化了4种病毒蛋白抗原,调整到合适浓度后点于醛基修饰的片基上,制备蛋白芯片;分别用4种禽病阳性血清杂交,再与金标二抗杂交,银染显色后读取结果,建立4种禽病的可视化蛋白芯片工作平台;进一步对此芯片的特异性以及灰度值与抗体浓度的相关性进行了研究;最后对18个现地血清样品进行了初步应用检测。【结果】结果显示经过条件优化后,芯片检测探针可特异性的相应的抗体进行杂交,呈现较强的杂交信号,且无交叉杂交。信号灰度值在抗体浓度为50～300μg·ml-1范围内成线性关系。用芯片和其它传统抗体检测方法同时检测18份现地样品,结果发现可视化蛋白芯片具有很好的特异性,并且灵敏性明显高于传统检测手段。【结论】研究表明该方法可用于同步鉴别4种禽病抗体,是一种有效的抗体检测新方法。
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- 关键词：可视化蛋白芯片禽病
- 检测H1-15禽流感病毒亚型的DNA芯片初步研究
- 本文对流感病毒14个血凝素亚型的基因芯片检测技术进行了初步研究。通过RT-PCR克隆禽流感病毒血凝素基因片段,获得重组质粒。从重组质粒扩增大约500 bp的DNA片段,浓缩后点到氨基化玻璃载体上,制成芯片。待检病毒样品用...
- 王秀荣于康震刘丽玲乔传玲石锐孙凯孔宪刚陈化兰
- 关键词：禽流感病毒基因芯片
- 文献传递
- AIV血凝素亚型同步检测基因芯片技术研究被引量：2
- 2006年
- 对流感病毒14个血凝素亚型的基因芯片检测技术进行了初步研究。通过RT-PCR克隆禽流感病毒血凝素基因片段,获得重组质粒。从重组质粒扩增大约500bp的DNA片段,浓缩后点到氨基化玻璃载体上,制成芯片。待检病毒样品用TRIzolLS提取RNA,反转录过程中用Cy5标记样品cDNAs。将标记样品与芯片杂交,扫描芯片上待检样品与芯片上捕捉探针的结合位点,杂交信号与预期设想一致。结果显示,DNA芯片技术可以提供一种有效的AIV血凝素亚型鉴别诊断方法。
- 王秀荣刘丽玲包红梅乔传玲王煜孙凯孔宪刚陈化兰
- 关键词：禽流感病毒基因芯片
- 禽流感H5亚型病毒血凝素基因的表达和抗原性分析被引量：2
- 2007年
- 参考已发表的Guangdong/96/1(H5N1)基因序列设计引物,用鸡胚扩增中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室保存的病毒,收集尿囊液,提取病毒RNA,经RT-PCR扩增HA基因,将PCR产物平端克隆到pMD18-T中,经酶切、PCR及测序鉴定后,定向亚克隆到pET-30a表达载体中。重组子经酶切和测序鉴定为正确后,用IPTG诱导表达,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和薄层扫描分析重组蛋白的表达情况。重组蛋白r5HA经Ni-NTA His.Bind Resins纯化,并复性,用Western Blotting分析重组蛋白的抗原性。结果表明:表达产物大小约为65 ku,主要存在于包涵体中,表达量约占总蛋白的30%;同时,表达的重组蛋白具有较好的抗原性和特异性,可以用作检测H5亚型禽流感病毒抗血清的捕获抗原。
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- 关键词：禽流感病毒H5亚型血凝素抗原性分析
