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豚鼠气单胞菌CB101中几丁质酶的纯化、鉴定及其基因克隆被引量：5: 2007年; 豚鼠气单胞菌CB101在胶体几丁质诱导下产生多种分子量不同的几丁质酶,其中分子量最大的一个几丁质酶Chi1(约91.5kDa)的编码基因已经被克隆.本文报道从CB101发酵液经硫酸铵盐析,DEAE-纤维素柱层析和MonoQ离子交换柱层析,分离纯化出其中的一个分子量约为60KDa的几丁质酶.N端测序的结果表明该酶是Chi1剪缺掉N末端信号肽部分、C末端A区和两个几丁结合区的产物.构建了CB101基因组的cosm id文库,从中筛选到9个产几丁质酶的克隆子,克隆子分析表明它们包含的几丁质酶基因都是chi1.蛋白分离、纯化和基因克隆的实验都暗示CB101的几丁质酶系统只包含一个几丁质酶基因.; 庄群川王风平; 关键词：几丁质酶离子交换层析分离纯化

豚鼠气单胞菌CB101中几丁质酶基因的克隆及其异源表达的全酶蛋白和酶片段的功能研究被引量：5: 2002年; 豚鼠气单胞菌 CB101(Aeromonas caviae)能产生多种分子量不同的几丁质酶,根据已知几了质酶基因DNA保守序列,利用人工合成的PCR引物和CB101总DNA,扩增出一个约2.6kb的片段并克隆到pBluescriptⅡ KS载体上。序列分析表明,这是目前已克隆的最大的微生物几丁质酶基因之一,编码865个氨基酸,蛋白质分子质量为91.5ku,包括N-末端信号肽序列,PKD(Poly-cystic kidney disease,多囊肾)结构域,催化区,C-末端REJ(Receptor for Egg Jelly,卵胶膜受体)区域和两个几下结合区,该酶同时具有几丁质外切和内切功能,降解胶体几丁质成几丁二糖、三糖和N-乙酰葡萄糖胺,去除其C末端302个氨基酸后,位于N末端的PKD结构域和催化区同样具有较强活性,但其胶体几丁质降解产物为几丁二、三、四糖,进一步的实验证实全酶的最低分子量底物为几丁三糖,而去除C端的酶片段的最低分子量废物为几丁四糖。; 周樱王风平肖湘; 关键词：几丁质酶基因空间结构基因克隆

豚鼠气单胞菌CB101的GlcNAc利用系统及调控蛋白NagC对chiI转录的调控: 2008年; L8和L10是豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)CB101的两株转座子突变株,突变位置发生在nagA基因,可以组成型表达几丁质酶.我们构建了基因文库,利用Southern杂交从中筛选到一个克隆子包含了三个基因:nagB、nagA和nagC.序列分析显示nagBAC的转录方向相同,而且基因的间隔仅有几个碱基.根据已有报道我们推测NagC是几丁质酶的转录调控蛋白,转座子插入nagA破坏了下游的调控蛋白基因nagC的转录和表达,从而几丁质酶成为组成型表达.我们通过构建NagC缺失突变株、凝胶阻滞迁移以及对NagC氨基酸序列的分析初步证明了NagC属于ROK(repressors,opening reading frames,and kinases)家族的调控蛋白,是chiI的转录阻遏因子.; 盖英宝李强王峰王风平; 关键词：转座子调控蛋白

高效几丁质降解菌CB101的分离、鉴定及其几丁质酶系的研究被引量：38: 2003年; 1 引言几丁质是海洋中居首位的多糖物质,它是虾、蟹壳的主要成分,同时广泛存在于昆虫外骨骼及真菌的细胞壁中.许多生物包括植物、细菌、真菌和一些无脊椎动物与脊椎动物都能够产生几丁质酶降解几丁质,其中细菌利用几丁质酶降解几丁质作为生活所需碳源和氮源.从生态角度来看,几丁质酶在自然界几丁质循环过程中扮演了重要角色,作为对环境的适应。; 肖湘周樱王风平; 关键词：几丁质酶 PH值

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国家自然科学基金(40076035)