国家高技术研究发展计划(2012AA022204)
- 作品数：16 被引量：37H指数：5
- 相关作者：刘彦杨毅宋勇峰王海燕徐西兵更多>>
- 相关机构：四川大学四川贝安迪生物基因工程有限公司河南科技大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金四川省科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 脂肪酶的发展概况及在制革中的应用被引量：8
- 2014年
- 探讨了脂肪酶的来源、性能并主要介绍了脂肪酶在制革上的重要应用以及在食品、医药、造纸等领域的应用,展望了脂肪酶的未来发展前景。
- 王玉增刘彦
- 关键词：脂肪酶脱脂制革
- 一新中温碱性蛋白酶基因的克隆及原核表达（英文）被引量：5
- 2013年
- 【目的】从环境中分离筛选产蛋白酶、降解蛋白质的菌株,寻找使用价值较高的碱性蛋白酶。【方法】通过酪蛋白平板法分离筛选产蛋白酶菌株,经生理生化方法及16S rDNA基因序列鉴定菌株;利用简并引物及基因组步移克隆蛋白酶完整开放阅读框;蛋白酶前体蛋白及成熟肽序列在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中进行重组表达;纯化活性蛋白酶后,利用化学合成多肽底物(succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide)检测酶活性质及其催化活力。【结果】分离到的菌株L010被鉴定命名为芽胞杆菌(Bacillus sp.)L010;蛋白酶开放阅读框包含了1149个碱基,编码382个氨基酸,氨基酸序列按其功能分为N端的30个氨基酸残基组成的信号肽,77个氨基酸残基构成的前导肽,C端275个氨基酸残基组成的成熟肽;此蛋白属于丝氨酸蛋白酶家族中枯草杆菌蛋白酶类(Subtilisins)成员,并命名为SprD;SprD的前体蛋白在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中重组表达时,在前导肽辅助下自加工为活性蛋白酶;SprD呈现出较高的催化活力,其反应最适条件为温度70℃,pH 9-10。【结论】SprD在碱性(pH 7.0-10.0)、中高温(25℃-60℃)条件下的稳定性及较高的催化能力使其具有一定的研究和潜在利用价值。
- 李丹黄非夏梦芸蒋彦杨毅
- 脂肪酶ZG在制革工艺中的应用研究被引量：1
- 2017年
- 无毒、无害、少污染的酶法脱脂是近年来制革清洁生产技术的重要研究方向之一。通过脂肪酶ZG和脂肪酶G20的猪皮脱脂能力对比试验发现:脂肪酶ZG的脱脂效果比脂肪酶G20略差,但表现出较好的脱脂性能,成革抗张强度和收缩温度均已达到服装革的国家标准。对脂肪酶中的蛋白酶活力测定研究发现:和脂肪酶G20一样,脂肪酶ZG中的蛋白酶活力几乎为零,表明用于生皮脱脂是比较安全的。猪皮的脱脂试验表明:脂肪酶ZG的脱脂率高于非离子型脱脂剂YF的13.65%,尤其在主浸水和软化中的脱脂效果较好。脂肪酶ZG应用于绵羊皮的脱脂试验,发现两步法脱脂率较一步法高7.2%。脂肪酶ZG的山羊皮脱脂试验表明:用一步法脱脂1.5h为宜。
- 宋勇峰刘晓文徐祥进叶永彬洪文卿刘彦
- 一种新型酸性酶的性能及在皮革软化中的应用被引量：5
- 2015年
- 对一种新开发出的酸性蛋白酶H(简称酸性酶H)的酶学性能及其在皮革软化中的应用进行了研究。试验结果表明:该酶在50℃,pH值3时酶活力较高。37℃时酶释放活力的最佳时间为60min内。当Cr^(3+)浓度超过2%、NaCl浓度大于1%时,酶活力呈明显下降趋势。应用试验结果表明:酸性酶H用量为0.8%、温度37℃、浸酸软化裸皮90min后,绵羊皮的柔软度及弹性增加。组织学研究表明:经酸性酶H软化后的粒面层纤维呈现蓬松状且空隙增多,粒面层结构完整。网状层纤维束分散明显,纤维间隙增大。猪蓝湿革经0.8%酸性酶H、温度45℃软化后,厚度减少和面积增加显著,折痕减轻明显,粒面完好。因此酸性酶H经过进一步改良之后,有望在制革生产中得以应用。
- 朱玲刘彦
- 关键词：酸性酶蓝湿革
- xyl-d二型乙醇脱氢酶(SADH)G198R突变体的研究被引量：1
- 2015年
- 本研究通过设计简并引物及文献参考,PCR克隆得到嗜热厌氧菌菌株xyl-d的SADH,并利用定点诱变技术将该酶的198位苷氨酸(Gly)突变为精氨酸(Arg).将野生型和突变基因连接到原核表达载体pET28a,IPTG诱导表达,再经镍柱纯化,然后比较了两个蛋白分别以NAD/NADH,NADP/NADPH为辅因子、异丙醇或异丁醛为底物、55℃条件下的酶活.发现突变后蛋白的总体催化活性相对于野生型有所下降,其中突变蛋白对NAD/NADH的亲和性分别下降了约8倍和6倍,而且对NADPH的亲和性下降也非常明显,但对NADP的亲和性变化却不大.
- 韩俊刘志斌马诗淳杨毅
- 拟南芥E3连接酶AT2G02960在大肠杆菌中的功能分析被引量：1
- 2016年
- 本研究以一个含有C4HC3锌指的RING结构域蛋白基因AT2G02960(简称ATPRF1)为研究对象,Western Blot检测ATPRF1能够大幅度提高σ^(32)表达水平并稳定σ^(32),提高大肠杆菌的热耐受性,细菌双杂交及免疫共沉淀实验表明ATPRF1与σ^(32)及DnaK存在相互作用,促进DnaK表达,体外泛素实验验证ATPRF1将σ^(32)泛素化,相互作用位点为RING-finger结构域.证明ATPRF1参与DnaK/J/E分子伴侣体系,提升大肠杆菌的热耐受性并能将σ^(32)多泛素化.
- 胡屹玲徐西兵梁可陈鹏李旭锋杨毅
- 关键词：DNAK免疫共沉淀
- 拟南芥BAH1与大肠杆菌热胁迫耐受的关系分析
- 2017年
- 拟南芥BAH1含有保守的C3H4型RING结构域,与DnaJ锌指结构类似.利用原核表达纯化的BAH1进行体外泛素化实验证明了BAH1具有E3连接酶活性.然后通过表型回复实验发现BAH1融合J-domain结构域后(JdBAH1)和DnaJ一样能明显弥补danJ突变株MF634的热敏表型,在43℃存活;而转入突变锌指结构的JdBAH1C231S,C234S,C276S,C279S(JdBAH1△Zn1/2)菌株在43℃高温条件下不能存活,说明BAH1在大肠杆菌内具有类似DnaJ锌指结构的功能.因此,BAH1在E.coli中的功能有可能与DnaJ相似,通过锌指结构参与了DnaK/DnaJ伴侣系统发挥功能.
- 梁可徐西兵牛毓龙杨毅
- 关键词：锌指DNAJE3泛素连接酶
- 短小芽孢杆菌遗传操作系统的建立及应用被引量：6
- 2017年
- 短小芽孢杆菌SCU11产生的胞外碱性蛋白酶具有良好的生皮脱毛效果,在生物制革领域有很大的应用前景.但该菌株的遗传转化系统尚未建立起来,限制了菌株的遗传改造和基因功能研究等方面的工作.本研究采用高渗透压电转化法,实现了对短小芽孢杆菌的电转化;在Ebuffer配方为甘露醇1M,山梨醇0.5M,甜菜碱7.5%,甘油10%,电场强度24KV/cm条件下,转化效率为3.5×10~3 CFU/μg DNA.构建了E.coli-Bacillus穿梭载体pUCETs,建立了短小芽孢杆菌基因敲除体系,利用该系统成功敲除了基因组中的peptidaseC40基因.本研究所建立的电转化系统及基因导入/敲除体系,为短小芽孢杆菌基因组编辑奠定了基础.
- 王超贺婷婷宋婷张长斌王海燕
- 关键词：短小芽孢杆菌基因敲除
- 角蛋白酶、糖化酶与淀粉酶的协同脱毛工艺研究
- 2019年
- 不同条件下的酶活力测定结果表明:角蛋白酶AK最适pH值为9。糖化酶BR和淀粉酶AM的最适pH值分别为7.8、7.0,它们均有蛋白酶活力,最适pH值均为8.0。淀粉酶AM中存在胶原水解酶,其最适pH值为7.5,但pH值9.0以上会受到强烈抑制。1398蛋白酶最适pH值为6.5,pH值在6～7蛋白酶活力较高,30℃以下其胶原水解酶活力较低。脱毛试验结果表明:角蛋白酶AK、糖化酶BR和淀粉酶AM预处理皮有助于缩短脱毛时间。研究表明:脱毛温度为30℃,pH值在6～7(脱毛过程中不调节pH值),脱毛130 min后脱毛率可达90%以上,裸皮粒面清晰。酶脱毛初步工艺参数为温度30℃,液比1,pH值6～7,转鼓转速5 r/min。角蛋白酶AK 0.05%,转30 min;糖化酶BR 1%,淀粉酶AM 0.25%,转40 min;1398蛋白酶0.8%,转60 min,然后浸灰。
- 宋勇峰杨艳锋叶永彬刘彦
- 关键词：脱毛
- 短小芽孢杆菌胞外蛋白质组双向电泳分析及碱性胁迫下胞外差异蛋白鉴定被引量：6
- 2014年
- 短小芽孢杆菌Bacillus pumillus SCU11是本实验室从富含蛋白质的生活垃圾中分离并诱变得到的具有高碱性蛋白酶活性的菌株,其分泌的碱性蛋白酶具有很好的生皮脱毛效果,在生物制革工业具有良好的应用前景.短小芽孢杆菌胞外蛋白质多达数百种,为了解其组成情况,采用LB培养基培养短小芽孢杆菌SCU11,以三氯乙酸/丙酮法沉淀发酵上清液中的蛋白质,通过双向电泳分析,建立了具有较高分辨率的短小芽孢杆菌胞外蛋白的双向电泳图谱.在此基础上,分析了碱胁迫条件下短小芽孢杆菌胞外蛋白质的双向电泳图谱,利用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)鉴定了10个差异蛋白点,其中有5种为胞外分泌蛋白,包含2种胞外蛋白酶.本研究结果表明与呼吸作用及运动相关的蛋白可能参与了短小芽孢杆菌碱胁迫的应答反应.
- 于士强桂俊鸿王海燕
- 关键词：短小芽孢杆菌双向电泳差异蛋白
