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乙型脑炎病毒反向遗传系统的构建: 乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)属黄病毒科黄病毒属,是一种重要的蚊传人兽共患病病原。近年来,我国出现基因I型(genotype I,GI)JEV,并逐渐成为主要流行基因型。本...; 郑浩郑旭晨郭亦非童武童光志

乙型脑炎病毒基因组cDNA克隆在宿主菌中不稳定因子的初步研究被引量：1: 2014年; 为了探求乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）基因组cDNA克隆在宿主菌中不稳定遗传的影响因子，本研究以猪源JEV HEN0701株基因组片段1-2913 bp为研究对象，分析基因组原核启动子和相关毒力基因在不稳定遗传中的作用。在5＇端，分析片段中潜在的原核启动子序列，通过PCR扩增得到不同长度的cDNA片段；在3＇端，通过内切酶酶切截断基因组prM蛋白或E蛋白编码区，获得3＇末端不同的cDNA片段。将各片段克隆入pCR-BluntII-TOPO载体，转化大肠杆菌，于37℃条件下培养。结果显示，片段73-2913 bp、97-2913 bp、355-2913 bp及1-933 bp、1-1275 bp能够在转化菌中稳定遗传；含有其他片段39-2913 bp、54-2913 bp及1-1800 bp、1-1971 bp的重组细菌不能在37℃条件下生长；片段1-1600 bp虽然能够在转化菌中传代，但是出现不规律突变。以上结果表明：软件所预测各原核启动子片段中，基因组73-118 bp区域与cDNA克隆稳定性有关，且上游的54 bp至73 bp的序列对该区域启动子存在影响；在JEV基因组1275 bp至1600 bp之间可能存在毒性蛋白编码序列。; 郑旭晨郑浩郭亦非刘飞梁超童武单同领于海童光志; 关键词：乙型脑炎病毒

乙型脑炎病毒反向遗传系统的构建: <正>乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)属黄病毒科黄病毒属,是一种重要的蚊传人兽共患病病原。近年来,我国出现基因I型(genotype I,GI)JEV,并逐渐成为主要流行基因...; 郑浩郑旭晨郭亦非童武童光志; 文献传递

乙型脑炎病毒致弱株的筛选及其生长特性被引量：1: 2013年; 本文将乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因I型HEN0701株在BHK-21细胞上传代,并通过空斑纯化和接种小鼠来筛选弱毒株。通过空斑试验和一步生长曲线,比较弱毒株和其亲本强毒株的生长特性。结果显示,JEV HEN0701株经过在BHK-21细胞上传代100代和10轮空斑纯化,挑选获得6株克隆株。将6株克隆株经脑内和皮下接种小鼠,筛选获得一株致弱株10S3。与HEN0701相比,10S3的空斑形态比较一致;而生长曲线显示,HEN0701在BHK-21上生长速度比10S3快。; 郑浩郑旭晨郭亦非童武刘飞张青占单同领童光志; 关键词：乙型脑炎病毒致弱

宿主菌株及培养温度对乙型脑炎病毒cDNA克隆稳定性的影响被引量：2: 2013年; 本研究旨在探讨宿主菌株及培养温度对JEV cDNA克隆在宿主菌中稳定性的影响。选取猪源乙型脑炎病毒基因Ⅰ型HEN0701株和基因Ⅲ型SH0601株为研究对象,分别将两毒株基因组克隆中不稳定的质粒转化不同大肠杆菌菌株,并改变转化菌的培养温度,将不同条件下培养的质粒进行序列分析。试验结果表明,不同宿主菌株对重组质粒不稳定性的影响不显著;低温培养可以克服克隆序列的不稳定。对获得的突变质粒的分析结果显示,基因组5'端的3个起始密码子和E蛋白可能与质粒的不稳定性相关。; 郑旭晨郑浩童武单同领郭亦非童光志; 关键词：乙型脑炎病毒培养温度

猪源乙型脑炎病毒HEN0701株全基因组的分子特征被引量：5: 2011年; 将乙型脑炎病毒HEN0701株基因组RNA分4段进行RT-PCR扩增,并克隆入pCRⅡ-Blunt-TOPO载体中,测定全长cDNA序列。以MapDraw软件分析了乙型脑炎病毒HEN0701株的基因组结构,并将病毒基因组分成2个非编码区和10个基因,比较了HEN0701株和11株乙型脑炎病毒在全基因组和各基因的核苷酸及推导氨基酸的同源性。以MEGA5软件绘制HEN0701株和11株病毒C、E、NS3、NS5基因的进化树。结果显示,HEN0701株全基因组为10 965 nt,包含一长10 299 nt的开放阅读框。在核苷酸水平,HEN0701株与GⅠ分离株的全基因组和各基因的同源性均高,而与GⅢ分离株则较低;而在氨基酸水平,HEN0701株与GⅠ分离株在多聚蛋白和各病毒蛋白的同源性和HEN0701株与GⅢ分离株的相近。进化分析显示,不同基因进化树的拓扑结构相近,12株病毒的C、E、NS3、NS5基因进化方向相同,GⅠ分离株和GⅢ分离株间C基因进化距离最近。; 郑浩孙春清袁世山; 关键词：乙型脑炎病毒全基因组

乙型脑炎病毒NS1'蛋白编码框的扩展对病毒毒力的影响: 2014年; 通过分析乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因组中核糖体移码序列,在对NS2A基因实施同义突变基础上,设计2组引物,通过PCR突变方法,依次删除移码后NS1'基因开放阅读框的终止密码子,并将突变片段替换JEV感染性克隆pJEHEN中相应片段,获得了2株突变全长克隆。经体外转录合成RNA,再以RNA转染细胞,拯救出两株突变病毒vJET1和vJET2。通过RT-PCR扩增突变病毒中含突变位点的基因组片段,测序证实了vJET1基因组3690位核苷酸存在由T向A的突变,vJET2基因组3690位和3819位核苷酸均存在由T向A的突变。将vJET1和vJET2感染Vero细胞后,Western blot检测显示,两株突变病毒表达的NS1'蛋白均出现延长现象。生长曲线显示,与亲本病毒vTHen相比,突变病毒增殖速度均出现下降。动物实验显示,与vTHen相比,vJET1和vJET2对小鼠的神经毒力与神经侵袭力也出现下降。上述结果表明,NS1'编码框的延伸降低病毒在体外培养细胞上的增值速度,也减弱了病毒对小鼠的毒力。; 郭亦非郑浩郑旭晨童武刘飞梁超单同领于海童光志; 关键词：乙型脑炎病毒突变毒力

乙型脑炎病毒NS1'蛋白移码序列的鉴定: 2012年; 本文通过对猪乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因组中移码序列分析,设计合成三条引物,通过PCR扩增出假定的NS1'移码片段,并将移码片段三倍重复克隆入pET-28a表达载体中。重组质粒转化E.coli BL-21后,经IPTG诱导在37℃下实现目的片段的可溶性表达。纯化表达产物,并免疫小鼠制备了多抗血清,以多抗血清为一抗,对JEV感染的Vero细胞进行免疫荧光分析,结果发现抗移码片段表达蛋白的血清可识别JEV蛋白。以JEV感染Vero细胞,提取感染细胞总蛋白,分别以NS1单抗和以上制备的多抗血清为一抗,进行Western blot分析。结果显示,NS1单抗为一抗,可染出48 kDa的NS1条带和56 kDa的NS1'条带;而以多抗血清为一抗,仅染出56 kDa的条带。上述结果显示,多抗血清识别的NS1'蛋白为NS1'移码后片段表达的蛋白。; 郑浩童光志; 关键词：乙型脑炎病毒

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