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多次循环离子交换色谱纯化Cry1Ab蛋白及其肽质量谱图的分析被引量：1: 2007年; 采用Q-Sepharose FF离子交换柱对初步纯化的Cry1Ab杀虫蛋白样品进行了多次循环精细纯化,洗脱模式为离子强度台阶梯度,流动相为Tris-HCl缓冲液加NaCl,盐浓度从0.1 mol.L-1变化到1.0 mol.L-1.结果表明,Cry1Ab蛋白在NaCl浓度为0.4 mol.L-1时从柱上被洗脱,并与杂蛋白很好地分离.色谱分离机制符合顶替色谱机制.经3次循环分离后可获得高纯度的Cry1Ab蛋白.用SDS-PAGE分析了蛋白的纯度及表观分子量,电泳胶上分离的蛋白进行原位酶切后,用基质辅助激光解析-飞行时间质谱对纯化蛋白进行肽质量谱的分析,Mascot数据库搜索结果确证了该纯化蛋白酶解肽段80%符合已知的Cry1Ab蛋白特征肽段.; 栾明明邬建敏叶庆富; 关键词：离子交换色谱

重金属污染环境的植物修复及其分子机制被引量：44: 2003年; 重金属污染物的排放和扩散造成了日益严重的环境污染。如何消除环境中的重金属污染物已成为国际性难题。近年来 ,植物修复技术的出现和快速发展为我们展示了一条新的有效途径 :即利用植物对重金属化合物的吸收、富集和转化能力去除土壤和水体中残存的重金属污染物。文章简要介绍了重金属污染物与植物修复的关系和植物修复的生理机制 ,重点总结了重金属污染环境的植物修复在分子生物学方面所取得的研究进展 ,包括有机汞裂解酶基因merB、汞离子还原酶基因merA和金属硫蛋白基因MT等的生物学功能及其在植物修复上的应用 ,展望了植物修复研究工作的发展方向 ,并针对汞污染提出了一套修复方案。; 史宇何玉科; 关键词：基因调控重金属植物修复污染物

大米草对有机汞的耐性、吸收及转化被引量：43: 2004年; 大米草对营养液中氯化甲基汞(McHgCl)毒性的临界浓度为15 μmol/L,是烟草的3倍。氯化甲基汞处理后,植株体内有机汞总量在增加,而营养液中有机汞总量在减少,无机汞总量则明显增加。这些结果表明,大米草可以吸收有机汞,将有机汞部分地转化为无机汞,并且无机汞较多地积累在植株的地下部,同时有一部分通过扩散或分泌进入营养液中。大米草对汞的积累作用和把有机汞转化为无机汞的转化作用在环境污染的植物修复方面有重要的利用价值。; 田吉林诸海焘杨玉爱何玉科; 关键词：大米草有机汞植物修复

佛手多糖的化学组成及体外抗氧化活性研究被引量：33: 2005年; 佛手经热水提取和乙醇沉淀,得佛手多糖粗品(BP).BP经Servag法除蛋白,用DEAE离子交换柱梯度洗脱分离得到BP 1和BP 2两个组分,经凝胶色谱和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检验为均一组分.用凝胶渗透色谱法测得BP 1和BP 2的重均分子量分别为17 773和65 589.薄层色谱和高效液相色谱分析表明,BP 1和BP 2均由鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖和木糖组成.采用化学发光法在多种化学模拟体系中研究了佛手多糖清除活性氧的作用,观察了佛手多糖对HO.导致DNA链损伤的抑制作用.结果表明,佛手多糖能有效地清除O2-.和HO.等活性氧,对DNA链具有良好的保护作用.; 朱晓燕邬建敏贾之慎; 关键词：多糖佛手抗氧化活性自由基

酶联免疫分析法探测Cry1Ab蛋白在不同介质中的构象变化被引量：3: 2005年; 采用酶联免疫分析(ELISA)方法,根据构象变化后的蛋白与抗体结合能力下降从而导致ELISA测定值降低的原理,探测了转cry1Ab基因水稻表达的Cry1Ab蛋白在不同溶液介质中的热致构象变化行为,以及不同有机溶剂及溶液pH值对该蛋白构象变化的影响程度.实验表明,CrylAb蛋白在不同条件下的构象变化程度可以灵敏地通过ELISA方法检测.在不同的介质中,Cry1Ab蛋白的热致构象变化程度不同.在Na2SO4介质中,该蛋白具有较高的热稳定性;SDS的存在,可以促进该蛋白的构象变化.常温下,25%(V/V)的有机溶剂乙腈、异丙醇、甲醇、乙醇均能使该蛋白的构象发生转变,其中以乙腈最为显著.醇类溶剂对Cry1Ab蛋白的构象影响程度随疏水性增大而增大;溶液pH值也对该蛋白的构象变化产生影响.pH在 8～10之间,该蛋白构象能保持稳定;酸或过碱性的溶液均能使蛋白构象偏离原始状态,从而引起ELISA测定值的降低.另外,腐殖酸能在一定时间内保持Cry1Ab蛋白构象的稳定性.; 邬建敏奚凤娜叶庆富刘维屏; 关键词：酶联免疫分析法介质温度构象变化苏云金杆菌

Silica-supported Macroporous Chitosan Bead for Affinity Purification of Trypsin Inhibitor: 2005年; Macroporous cross-linking chitosan layer coated on silica gel (CTS-SiO2) was prepared by phase inversion and polyethylene glycol (PEG) molecular imprinting methods. Formation of macroporous surface was investigated by scanning electron microscopy (SEM) and BET analysis. The prepared bead was activated by reacting with 1,2-ethylene diglycidyl ether for introducing epoxy groups, and trypsin could be efficiently immobilized on the bead as a biospecific ligand. The bead bearing trypsin was employed to purify trypsin inhibitor (TIs) from egg white as affinity adsorbent.; Feng Na XIJian Min WUMing Ming LUAN; 关键词：硅石净化工艺胰岛素

溶胶凝胶膜包埋的胰蛋白酶用于高通量蛋白质肽谱分析被引量：5: 2006年; 采用溶胶凝胶包埋法在96孔板中固定胰蛋白酶,制备高通量的酶解反应器。考察了四乙氧基硅烷(TEOS)与甲基三甲氧基硅烷(MTMS)的不同比例对凝胶膜的成胶速度、机械强度、透明度、固定酶的活性及稳定性的影响。以牛血清白蛋白(BSA)为目标蛋白,比较了溶胶凝胶固定化酶与溶液态酶的稳定性和催化活性,用HPLC对BSA的酶解产物进行了肽谱分析,比较了二者的酶解效率。结果表明,TEOS与MTMS比例为1∶1时,凝胶膜有很好的成胶速度、机械强度、透明度;包埋态酶有很高的活性和稳定性。HPLC对肽段的分析结果表明,固定化酶的酶解效率优于溶液态酶。; 栾明明邬建敏; 关键词：溶胶凝胶固定化胰蛋白酶

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国家自然科学基金(20277031)