国家自然科学基金(30960283)
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
- 相关作者：朱洪云索朗斯珠董海龙吴庆侠旦巴次仁更多>>
- 相关机构：西藏农牧学院华中农业大学中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部“211”工程国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 藏鸡NDV的分离鉴定及F基因的遗传进化分析被引量：2
- 2012年
- 【目的】探讨藏鸡NDV的毒力和F基因的遗传进化特征。【方法】从采集的藏鸡病料中分离鉴定NDV,通过测定鸡胚平均致死时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致死指数(ICPI)来确定分离株的毒力。采用RT-PCR方法克隆藏鸡NDV分离株F基因,测序后进行序列分析,并进行进化分析。【结果】共分离鉴定出F5、FX10、F20、F74、F75、F17、F72、FH2等8株NDV,其中F17、F72、FH2为强毒株,其余5株为弱毒株。8株病毒F基因ORF均为1 662bp,编码553个氨基酸,强毒株ORF编码产物含有12个半胱氨酸残基,弱毒株有13个半胱氨酸残基,比强毒株在27位(强毒株C27变为R27)多了1个半胱氨酸残基;有6个潜在的糖基化位点。分离的8株NDV与Gen-Bank中发表的20株NDV参考毒株比较结果表明,F蛋白氨基酸序列变异位点较多,主要集中在8-30,97-124,45,385-386,402-403,479-494,509-520位氨基酸处,强毒株AA替代较集中,而弱毒株保守区较多且AA替代较分散。分离NDV株之间F基因编码区核苷酸序列同源性为83.5%～99.9%,其中强毒株之间同源性为95.2%～99.4%,弱毒株之间同源性为99.4%～99.9%。分离NDV株之间F基因编码的氨基酸同源性为87.5%～99.5%,其中强毒株之间同源性为95.3%～98.2%,弱毒株之间同源性为98.6%～99.5%。进化分析显示,3株强毒株均为基因Ⅶ型,5株弱毒株均为基因Ⅱ型。【结论】分离了8株藏鸡NDV,其中3株为强毒株,属于基因Ⅶ型;5株为弱毒株,属于基因Ⅱ型。
- 朱洪云旦巴次仁
- 关键词：藏鸡新城疫病毒F基因
- 藏鸡新城疫病毒分离株灭活油乳疫苗的研究被引量：1
- 2017年
- 为了探索新城疫病毒(NDV)西藏分离株的免疫效果,以便控制当地NDV的流行,保障禽类健康,试验采用灭活油乳疫苗的制作方法,对藏鸡新城疫病毒(NDV)弱毒株FX10进行了灭活油乳疫苗的研制,并将其免疫效果与商品灭活疫苗进行了比较。结果表明:自制灭活油乳疫苗的各项指标均达到疫苗要求,并能达到商品灭活疫苗的免疫效果。说明NDV弱毒株FX10可作为疫苗候选株。
- 朱洪云旦巴次仁
- 关键词：藏鸡免疫保护
- ECM对体外培养小鼠子宫内膜细胞生长形态及MHCⅡ表达的影响
- 2014年
- 为了探讨细胞外基质(extracellular matrix,ECM)对体外培养的小鼠子宫内膜细胞生长形态以及抗原递呈作用中MHCⅡ表达的影响,对小鼠子宫内膜细胞进行分离鉴定,分别在添加了ECM的细胞培养板上和未添加ECM的细胞培养板同时对小鼠子宫内膜上皮细胞和基质细胞进行培养,观察生长形态,并采用免疫组化法,分别检测1、3、5dMHCⅡ表达水平,进行图像分析比较。结果表明,生长形态有明显差异,且添加ECM的细胞培养板上2种细胞生长速度明显比未添加ECM的培养板上的细胞生长速度慢;免疫组化结果,未添加ECM培养板中上皮细胞和基质细胞在1、3dMHCⅡ表达均为阳性,且表达水平都逐渐降低,在第5天时,2种细胞MHCⅡ表达均为阴性,而添加了ECM的细胞培养板上2种细胞由于生长速度缓慢,第5天MHCⅡ仍有表达。因此,在ECM的参与下,体外培养的小鼠子宫内膜细胞的生长形态发生了改变、生长速度有所延缓,同时延长了MHCⅡ的表达。。
- 董海龙吴庆侠朱洪云
- 关键词：子宫内膜细胞细胞外基质
- hTERT永生化山羊子宫内膜基质细胞系的建立及其致瘤性被引量：3
- 2014年
- 为了检测转染人端粒酶逆转录酶催化亚单位(human telomerase reverse transcrip tase,hTERT)后建立的山羊永生化子宫内膜基质细胞(endometrium stromal cells,ESCs)是否存在潜在致瘤性。将hTERT导入2代山羊ESCs中建立永生化山羊ESCs(hTERT-ESCs),利用免疫细胞化学方法鉴定细胞并检测hTERT导入后细胞端粒酶活性的表达;分别取2代山羊ESCs和55代hTERT-ESCs,使用含不同浓度血清的培养液培养,利用MTT法检测其血清依赖性;软琼脂克隆形成试验检测hTERT-ESCs在半固体培养基中的克隆形成能力,同时测定hTERT-ESCs的生长曲线。结果显示:转染后获得的阳性克隆细胞及其传代细胞呈长梭形和三角形,与原代细胞形态一致,波形蛋白检测阳性,角蛋白检测阴性;免疫细胞化学方法显示hTERT阳性;hTERT-ESCs在含不同血清培养基中生长速度不同,具有血清依赖性;软琼脂克隆试验显示2代山羊ESCs和55代hTERT-ESCs均不能在软琼脂中生长;hTERTESCs具有正常体细胞生长曲线。证明hTERT-ESCs基本保持了正常山羊ESCs的生物学特性,不具有致瘤性。
- 董海龙吴庆侠朱洪云
- 关键词：山羊致瘤性
- 藏鸡新城疫病毒的分离与初步鉴定
- 2011年
- 新城疫（Newcastle disease）是由新城疫病毒（New castle disease virus,NDV）引起的侵害禽类的一种急性、高度接触性传染病,被国际兽疫局列为A类疫病[1]。该病曾经对我国和世界养鸡业造成巨大危害[2]。强制免疫对我国新城疫的控制起到了决定性作用,但伴随养禽业规模的扩大,
- 索朗斯珠何天文贡嘎田飞鹏格桑卓玛
- 关键词：鸡新城疫病毒CASTLEVIRUS强制免疫
- 一例藏鸡新城疫病毒的分离鉴定与致病指数试验
- 2011年
- 取疑似新城疫病毒(NDV)感染的病料进行9日龄鸡胚接种,结果分离到一株病毒。该病毒具有血凝性,血凝活性能被新城疫阳性血清所抑制。减蛋综合征(EDS)阳性血清,传染性支气管炎阳性血清、禽流感H5、H9单因子血清进行血凝抑制(HI)交叉试验发现,该病毒不能抑制血凝活性,动物回归试验出现与新城疫病毒感染鸡相一致的症状,可确认该病为新城疫病毒感染。根据NDV毒力测定标准,MDT>90 h,ICPI为0.38,IVPI值为0,可判定为新城疫弱毒株。
- 朱洪云旦巴次仁索朗斯珠
- 关键词：新城疫病毒
- 新城疫病毒西藏分离株的生物学特性鉴定及遗传进化分析被引量：2
- 2012年
- 从西藏病死藏鸡中分离到具有血凝活性的病毒、经血凝抑制试验、电镜观察、PCR扩增和测序鉴定为新城疫病病毒(NDV),通过动物致病性试验证明该病毒对鸡具有致病性;分离毒株毒力测定结果显示,MDT为120h,EID50为10-8.44、IVPI为0.5、ICPI为0.6,均符合NDV弱毒株特征。血凝解脱及血凝素热稳定性试验显示:各分离株的血凝解脱时间短,血凝素热稳定性较差,符合NDV弱毒株的特征。F基因的序列测定遗传进化分析表明,西藏分离毒株之间的核苷酸序列具有99%的同源性,与疫苗株LaSota的同源性为90%;与国内标准强毒株F48E8同源性为81%。推导其氨基酸序列分析表明,各分离株的F蛋白的裂解位点氨基酸112 G-K-Q-G-R-L117,具有NDV弱毒株特征,与毒力测定结果相符。本研究首次报道了NDV西藏分离毒株遗传进化情况和生物学特性情况,为进一步研究高海拔、缺氧环境下NDV生物学特性变化研究奠定了基础。
- 索朗斯珠李永涛郭学波邹忠艾尼瓦尔金梅林
- 关键词：生物学特性F基因遗传进化
