天津市应用基础与前沿技术研究计划重点项目(07JCZDJC07300)
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
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- U5 snRNP在前体mRNA剪接加工中的作用
- 2008年
- 前体mRNA的剪接是基因表达过程中的关键一步,发生在基因的转录之后与蛋白合成之前。在由前体mRNA剪接加工而形成成熟mRNA时,需要将转录本中的内含子切除,因为它会干扰基因的表达。前体mRNA的剪接发生在细胞核中,是在一个大的RNA与蛋白质的复合体即剪接体的催化下完成的。复合体中含有U1、U2、U5,二聚体形式的U4/U6小核RNA(snRNA)和一些小核核糖核蛋白(snRNP)。U5snRNP特异蛋白包括hPrp8,hSnu114(aGTPase),hBrr2(aDExH/Dboxhelicase)和Prp28等。Prp8构成剪接体的催化核心,hSnu114可避免剪接复合体过早的活化。因此,U5snRNP在剪接体聚集过程和前体mRNA的剪接反应中发挥重要作用。
- 李晓冬杨洁
- 关键词：前体MRNA剪接
- pEGFP-C2-人类p100蛋白SN和TD片段质粒构建
- 2007年
- 目的:分别构建含有人类p100蛋白SN片段和TD片段基因的真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C2-p100-SN和pEGFP-C2-p100-TD。方法:利用EcoRI和BamHI限制性内切酶对已构建好的质粒PSG5-p100-SN和PSG5-p100-TD进行双酶切以获得目的片段p100-SN和p100-TD基因片段,回收纯化后连接到质粒pEGFP-C2上。结果:通过对重组质粒进行菌落PCR鉴定以及酶切鉴定均能从PCR产物和酶切产物中观察到p100-SN和p100-TD片段。结论:成功构建了可以在真核细胞内表达绿色荧光蛋白和目的蛋白的融合蛋白的重组质粒pEGFP-C2-p100-SN和pEGFP-C2-p100-TD,可为有关人类p100蛋白功能及作用机制研究奠定基础。
- 步天栩葛林洪敬欣姚智杨洁
- 关键词：绿色荧光蛋白质粒
- pEGFP-CI-G3BP转染Hela细胞及其在细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:了解G3BP蛋白在细胞中的表达及定位。方法:利用脂质体lipofectamine2000将提取的质粒pEGFP-CI-G3BP转染进入Hela细胞,培养24h后荧光倒置显微镜观察绿色荧光的表达情况及其在细胞中的定位。结果:pEGFP-CI-G3BP质粒被成功转入Hela细胞内,转染后绿色荧光可高效表达,分布在细胞胞浆中。结论:脂质体法是一种高效的转染pEGFP-CI-G3BP的方法,表达的G3BP蛋白定位于细胞的胞浆部分。
- 葛林步天栩何津岩邵洁东莉洁方建飞李晓冬孙晓明杨洁
- 关键词：HELA细胞脂质体载体蛋白质类转染
- 医学免疫学研究中激光共聚焦显微镜的应用被引量：7
- 2008年
- 激光扫描共聚焦显微镜（laser scanning confocal microscope．LSCM）在普通光学显微镜的基础上对成像原理作了改进，加装了激光扫描装置，同时利用计算机的图像处理技术，把光学成像的分辨率提高了30％～40％，是光学显微镜发展历史上的重大突破。与传统的光学显微镜相比，它能产生真正具有三维清晰度的图像，由于采用了点光源代替场光源，使探测点与照叽点共轭，有效抑制了同一聚焦平面上的杂散荧光，抑制了来自非焦平面上的荧光，使探向分辨力比普通光学显微镜明显升高．并具有深度识别力即纵向分辨力．对细胞可行无损伤的光学切片。
- 张馨予李晓眠杨洁
- 关键词：免疫细胞免疫分子激光共聚焦显微镜CA^2+凋亡
- 基因转录与pre-mRNA剪接的偶联蛋白被引量：1
- 2008年
- 真核基因的表达是一个复杂的过程,包括转录、pre-mRNA剪接、翻译等步骤。其中转录和pre-mRNA的剪接是基因表达中的两个重要环节,它们都要通过复杂的蛋白复合物来执行功能。目前研究发现这两个过程并不是绝对独立的,而是偶联在一起同时进行的。多种蛋白的偶联作用将二者联系在一起。RNA聚合酶Ⅱ、SKIP、SMN以及新近发现的人类P100蛋白不仅参与基因转录调节,同时它们在剪接加工中也具有相应的作用。
- 步天栩杨洁姚智
- 关键词：转录剪接RNA聚合酶
- 人类P100蛋白表达抑制稳定株的建立及其对HeLa细胞周期的影响被引量：2
- 2008年
- 目的构建针对人类P100(hP100)基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)质粒,转染后筛选P100表达抑制的稳定细胞株并鉴定其表达情况;同时检测其对细胞周期的影响。方法设计针对hP100基因的siRNA序列,构建pGenesil-shRNA-hP100质粒(smallhairpinRNA,shRNA,小发夹RNA),经测序鉴定后转染入宫颈癌细胞HeLa;经G418筛选出稳定株;Western印迹检测稳定株之抑制率。流式细胞术检测hP100蛋白表达抑制对细胞周期的影响。结果成功构建了针对hP100的siRNA质粒,并用之筛选出hP100蛋白表达抑制的稳定株,瞬时转染及稳定株hP100表达明显降低。流式细胞术显示抑制hP100蛋白表达使G1期细胞比例增加,S期和G2/M期细胞比例降低。结论RNAi(RNA interference,RNA干扰)可持续稳定地抑制人类P100蛋白的表达,人类P100蛋白表达抑制对细胞周期有调节作用。
- 何津岩葛林邵洁赵钢东莉洁方建飞姚智杨洁
- 关键词：RNA干扰细胞周期
