国家高技术研究发展计划(2008AA10Z115)
- 作品数：10 被引量：77H指数：4
- 相关作者：潘映红张朝晖徐世昌高洪波范龙泉更多>>
- 相关机构：中国农业科学院作物科学研究所中国农业科学院植物保护研究所四川师范大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 质谱非标记定量分析小麦抗条锈病近等基因系蛋白质变化被引量：5
- 2014年
- 利用基于液相色谱串联Orbitrap质谱(Q Exactive)的非标定量(Label-free)技术,对小麦抗病单基因近等基因系Taichung29*6/Yr10和背景品种Taichung29叶片的蛋白质表达进行了比较分析。经MASCOT软件搜库,在两个样品中共同鉴定到2 257个蛋白,其中有准确定量信息的蛋白共1 549个,含量变化大于2倍的差异蛋白有102个。对102个差异表达蛋白进行了Gene Ontology(GO)功能注释和分析,发现他们多数定位于细胞基质和核糖体等细胞器,具备结合、催化等功能,主要参与代谢、细胞过程、应激等生物学进程,其中超氧化物歧化酶、甲硫氨酰氨肽酶、溶酶体-β-葡萄糖苷酶和铁蛋白等可能与小麦抗病单基因近等基因系Taichung 29*6/Yr10的抗病性有一定相关性。
- 黄宇冯晶饶力群徐世昌潘映红
- 关键词：小麦条锈病蛋白质组学
- 一种简易高效的小麦叶片胞间液蛋白提取方法的建立被引量：2
- 2011年
- 植物细胞间液中的蛋白在植物生长发育和抗病抗逆反应及其信号传导过程中发挥着重要作用,是植物学研究的新热点。由于细胞间液含量低,容易因组织细胞损伤性受到胞内成分污染,高纯度的细胞间液蛋白的提取相对困难,参考相关文献报道,建立了一种简易高效的小麦叶片细胞间液蛋白的提取方法。选取小麦品种"铭贤169"幼苗叶片为材料,用50mmol/LNaAc缓冲液充分浸润,负压处理20 min后,30×g离心5 min除去叶片表面缓冲液,随后2 000×g离心15 min,收集小麦叶片胞间液。将获得的小麦叶片胞间液冷冻干燥后,进行SDS-PAGE分离分析。电泳胶图上显示出细胞间液提取物与叶片组织提取物的蛋白质组成有极显著差异,使用MALD-TOF/TOF MS技术分析SDS胶上的细胞间液蛋白条带,共鉴定到9种非高丰度或假定的蛋白,其中有两种是已报道过的植物细胞间液蛋白。试验结果表明,本方法简易高效,适用于小麦蛋白质组学研究中高纯度的细胞间液蛋白的提取。
- 白婷张朝晖严伟徐世昌潘映红
- 关键词：细胞间液小麦叶片蛋白质蛋白质组学
- 小麦叶片类囊体膜蛋白复合体的分离和分析技术研究
- 2011年
- 膜蛋白复合体在生命活动中执行着重要的生物化学功能,具有重要的研究意义,但由于其低表达和高度疏水的特点,完整状态和低丰度的膜蛋白复合体的分离分析仍是一大挑战。首先,采用蓝绿温和胶非变性电泳作为第一维分离技术,大量分离制备叶绿体类囊体膜蛋白复合物;其次,采用电洗脱方法差异富集第一维电泳分离到的各种蛋白复合体;最后,采用SDS-PAGE作为第二维分离技术,分析差异富集的不同种蛋白复合体的亚基构成。研究结果表明,利用这种分离分析模式,能有效地富集膜蛋白复合体尤其是低丰度膜蛋白复合体,明显提高第二维分离分析的分辨率和蛋白覆盖率。
- 向小聪孟庆石鲍锦库潘映红
- 关键词：电洗脱SDS-PAGE低丰度
- 蛋白质胶内酶切技术研究进展被引量：1
- 2015年
- 胶内酶切是蛋白质组研究中衔接电泳分离和质谱鉴定的重要环节,对最终的蛋白质定性和定量分析结果有显著的影响。该技术自1992年初步建立以来,一直处于不断完善中,出现了种类繁多的改进方案。为了更有效地利用胶内酶切技术,从凝胶脱色、杂质去除、蛋白酶切、肽段提取4个方面归纳整理了近年来蛋白质胶内酶切技术的主要研究进展。
- 姜超张学文潘映红
- 关键词：质谱分析电泳分离
- 蛋白质组学在转基因生物检测和研究中的应用前景被引量：7
- 2010年
- 现有的常规转基因生物检测和研究方法不能满足快速、准确、灵敏和完整分析转基因生物的需求,极有必要借助蛋白质组学实现这一目标。概略地介绍了当前常用的转基因生物分析技术,并着重分析与讨论了一些重要的蛋白质组学技术在转基因生物检测和研究中的应用前景。
- 潘映红
- 关键词：转基因生物蛋白质组学
- 蛋白质复合体非变性凝胶电泳技术及其应用新进展被引量：4
- 2010年
- 非变性凝胶电泳技术是研究蛋白质复合体的强有力工具。重点介绍了蓝绿温和非变性凝胶电泳(BN-PAGE)技术的原理和特点,比较了由BN-PAGE衍生的蓝色温和琼脂糖凝胶电泳、清澈温和非变性凝胶电泳(CN-PAGE)和高分辨清澈温和非变性凝胶电泳(HrCN-PAGE)技术的差异和适用范围,并概括地介绍了这些技术在植物蛋白质复合体研究中应用的新进展。
- 孟庆石张光祥潘映红
- 不同培养载体对小麦条锈菌夏孢子人工萌发的影响被引量：3
- 2012年
- 为探索适合小麦条锈菌寄主体外萌发的载体,并建立基于不同研究目的的小麦条锈菌夏孢子人工萌发技术,采用超声波水雾培养法,以小麦条锈菌生理小种CYR32为供试材料,探讨了不同培养载体对小麦条锈菌夏孢子萌发特性的影响。在最适温度和湿度条件下,以4种不同材料为培养载体,小麦条锈菌夏孢子的萌发率、芽管生长率和外观显示情况有显著差异。在尼龙纱网上的夏孢子萌发速度和芽管伸长速度最快,12h内萌发率最高可达93.40%,芽管最长可达446.71μm;亲水滤膜上夏孢子的萌发率和芽管长仅次于纱网;亲水塑料膜和PVDF膜上夏孢子的萌发率均高于普通亲水载玻片,而芽管长度低于普通亲水载玻片。采用侧光照明时,在亲水滤膜和PVDF膜上极易清晰观测到夏孢子及其芽管内的黄色颗粒物。在亲水塑料膜上,还可观察到夏孢子萌发12h后,芽管尾部膨大形成类似附着胞的结构。结果显示,超声波水雾可使条锈菌夏孢子处于水分饱和的环境,而纱网纤维组成的小格具有很好的保水结露功能,能使夏孢子萌发快,萌发效率高,芽管生长快;另一方面,使用其他培养载体还可满足观测条锈菌夏孢子内黄色颗粒物向芽管内转移和芽管尾部形成类似附着胞结构的目的。
- 范龙泉高洪波潘映红
- 关键词：小麦条锈菌夏孢子芽管
- 赤霉素对盐胁迫抑制水稻种子萌发的缓解作用的蛋白质组分析被引量：45
- 2009年
- 用粳稻日本晴(Oryzasativa L. cv. Nipponbare),研究了盐胁迫对水稻种子萌发的抑制作用和赤霉酸(GA3)对盐胁迫的缓解作用;分别以H2O(对照),5gL-1 NaCl(处理I),5gL-1 NaCl+100μmolL-1 GA3(处理Ⅱ)培养水稻种苗48h,提取芽中的蛋白质,利用双向电泳(2-DE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术分析了水稻蛋白质组的变化。结果表明,在盐胁迫条件下,日本晴种子的萌发显著受到抑制,而GA3能显著缓解这种抑制作用;用ImageMaster软件分析2-DE凝胶,发现有4个蛋白质斑点表现出显著的变化,在盐胁迫下斑点S1、S2和S3表达下调而斑点S4消失,在GA3与盐共处理时,这4个蛋白质点的表达均有不同程度的恢复;经MALDI-TOF MS分析,其中2个蛋白质斑点(S1,S3)分别被鉴定为isoflavone reductase-like蛋白与葡萄糖磷酸变位酶,这些蛋白可能与GA3提高水稻耐盐性途径相关。
- 温福平张檀张朝晖潘映红
- 关键词：水稻赤霉素盐胁迫蛋白质组
- 抗条锈病小麦品系Taichuang29＊6/Yr5接种条锈菌CY32后的蛋白质组学分析被引量：9
- 2009年
- 【目的】了解抗条锈小麦受条锈菌侵染后的蛋白表达变化情况,采用比较蛋白质组学技术鉴定接种条锈菌小种CY32后的抗条锈小麦品系Taichuang29*6/Yr5和同时期未接种对照之间的差异蛋白。【方法】提取接种48h和同期未接种小麦的叶片蛋白,进行双向电泳分离和分析,选取差异显著的蛋白点进行MALDI-TOF质谱分析及数据库搜索鉴定。【结果】发现13个体积百分比变化大于1.5倍,符合t检验(P<0.05)的显著差异蛋白点,通过MALDI-TOFMS获得了这些差异蛋白点的肽指纹图谱,经数据库搜索,共鉴定出11个蛋白,包括Pathogenesis-related homeodomain protein,beta-glucosidase,glutathione transferase等。【结论】经蛋白质功能分析,推测小麦叶片中这些差异蛋白可能与条锈菌小种CY32的侵染有关。
- 马成徐世昌徐琴张朝晖潘映红
- 关键词：小麦抗条锈二维凝胶电泳肽质量指纹图谱
- 甜瓜幼苗根系总蛋白提取方法的筛选及其电泳条件的建立被引量：2
- 2012年
- 以‘西域1号’甜瓜苗期根系为材料,分别采用改进的TCA/丙酮沉淀法、Tris/酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法及SDS/酚提取法提取总蛋白,进行SDS电泳和双向电泳分离,扫描后的胶图利用Image Master 2D Elite 6.01软件进行分析,重点分析胶图总点数、匹配点数和差异蛋白点数。结果表明:Tris/酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法得到的总蛋白含量最高;TCA/丙酮沉淀法分离得到的蛋白条带和蛋白点数最少,且对分子量较高的偏碱性区域的蛋白提取效果差,与其他2种方法相比明显丢失了较多的蛋白。因此,进行甜瓜幼苗根系总蛋白质组分析时,可采用后2种方法,其中Tris/酚抽提法更简单易行。
- 范龙泉胡新明赵进峰高洪波潘映红
- 关键词：蛋白提取差异蛋白
