湖南省自然科学杰出青年基金(10JJ1006)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：莫小阳刘会朱红敏张亚莉陈涛更多>>
- 相关机构：湖南师范大学贵阳医学院附属医院贵阳医学院更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学杰出青年基金国家自然科学基金贵州省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 斑马鱼ISL1蛋白多克隆抗体的制备被引量：1
- 2013年
- 目的为了进一步研究ISL1作为第二生心区心脏前体细胞的分子标志在心脏发育中的功能,需要获得ISL1蛋白并制备其抗体。方法根据已报道的ISL1基因序列,以斑马鱼mRNA为模板进行PCR扩增得到ISL1部分编码区序列,然后将其连接到pET-28a载体上获得原核表达载体。将重组质粒进行酶切测序鉴定,然后利用大肠杆菌E.coli BL21对该重组质粒进行表达。经过IPTG诱导,采用Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化的his-ISL1融合蛋白免疫新西兰大白兔制备ISL1多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体效价。结果获得了ISL1原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗ISL1多克隆抗体。结论本实验为ISL1在斑马鱼心脏发育中的新功能的进一步研究奠定了基础。
- 任恋唐超刘宪楚李容戴悦彭佩莹莫小阳
- 关键词：斑马鱼融合蛋白多克隆抗体
- 雷帕霉素对低氧下人HL-60细胞增殖和凋亡的影响被引量：3
- 2012年
- 本研究拟通过小分子化合物氯化钴(CoCl_2)模拟的低氧环境,探讨雷帕霉素(RPM)对该低氧下人急性髓细胞白血病HL-60细胞的生物学行为的影响。低氧模拟组、低氧雷帕霉素处理组、常氧雷帕霉素处理组HL-60细胞分别采用CoCl_2、CoCl_2/RPM、RPM进行处理,对照组为常氧下常规培养的HL_60细胞,处理及培养24 h、48 h、72 h后收集细胞,采用倒置相差显微镜观察细胞生长状况,常规瑞氏染色后光学显微镜下观察细胞形态;MTT比色法检测各组细胞的活性和增殖能力;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡。结果表明,与对照组细胞形态规则,胞核呈圆形或椭圆形相比,低氧模拟组和低氧雷帕霉素处理组细胞密度降低,生长明显受抑,细胞胞核呈不规则形或杆状,染色质粗糙,伴扭曲折叠等变化。各组间不同时间细胞增殖抑制率差异显著(P<0.05),低氧模拟组和低氧雷帕霉素处理组增殖抑制率随着处理时间延长而增大,且低氧雷帕霉素处理组的增殖抑制率大于低氧模拟组。与常氧下的对照组及雷帕霉素处理组比较,低氧的模拟组和雷帕霉素处理组诱导细胞发生较明显的凋亡,且后期72 h低氧雷帕霉素处理组凋亡率显著高于模拟低氧处理组。以上结果表明,模拟低氧环境下,HL_60细胞生长明显受抑制,且诱导细胞凋亡;雷帕霉素可增强对低氧对细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。
- 张亚莉朱红敏王剑青刘会陶建蜀陈涛莫小阳
- 关键词：雷帕霉素HL-60细胞低氧凋亡
