国家自然科学基金(30471433)
- 作品数：7 被引量：33H指数：3
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- 真核细胞筛选系统快速检测环境水样的DNA损伤效应
- 2008年
- 目的利用含生长抑制和DNA损伤诱导基因153(gadd153)启动子和荧光素酶报道基因真核细胞株GADD153-Luc,建立快速检测环境水样中有机提取物的DNA损伤作用的新方法。方法RT-PCR方法检测内源性gadd153基因mRNA表达;生物发光和彗星试验分别检测环境水样对稳定转染细胞和HepG2细胞的DNA损伤效应。结果RT-PCR结果表明,在100ml/ml培养基剂量组,源水和氯化消毒饮用水中有机提取物可诱导gadd153基因mRNA表达显著增加(P<0.05),并与荧光素酶活性呈正相关;荧光素酶表达在源水和氯化消毒饮用水有机提取物各剂量组均显著高于对照组(P<0.01),并有良好的剂量反应关系;彗星试验显示,在10、100ml/ml培养基剂量组源水和氯化消毒饮用水有机提取物处理后,OTM(Olive尾距)显著高于对照组(P<0.01);相关分析表明,各剂量组诱导荧光素酶活性和DNA损伤程度(OTM)呈正相关(P<0.01)。结论真核细胞gadd153-Luc检测体系可用于快速检测环境水样的DNA损伤效应,并具有较高的灵敏性。
- 张荣杜海荣曹贤文周宜开
- 关键词：荧光素酶报告基因
- 不同消毒剂处理饮用水的有机提取物对HepG2细胞DNA的损伤作用被引量：3
- 2008年
- [目的]研究以氯(Cl2)、二氧化氯(ClO2)及两者不同体积比的联合消毒剂处理的饮用水,其有机提取物对HepG2细胞DNA的损伤作用。[方法]先以6mg/LCl2、2mg/LClO2、2mg/LCl2+2mg/LClO2联合(简称"22")和2mg/LCl2+6mg/LClO2联合(简称"26")分别消毒20L饮用水,之后将消毒后的各20L饮用水分别浓缩至10mL二甲亚砜(DMSO)中,即得体积比为2L/mL的消毒饮用水有机提取物储备液(即相当于1mLDMSO中浓缩有2L消毒水的有机副产物,下文体积比意义同)。将上述4份储备液各倍比稀释成125、25、5、1、0.2mL/mL5组,以1‰DMSO作为阴性对照,对体外培养的HeG2细胞进行染毒。应用MTT试验检测HepG2细胞活性,碱性彗星试验、中性彗星试验分别检测HepG2细胞DNA的单链和双链损伤,双核微核实验检测微核形成率。[结果]与阴性对照组相比,25、125mL/mL的Cl2、ClO2,125mL/mL的22、26联合组诱导细胞活力降低;在25mL/mL组,Cl2与ClO2所致细胞活力小于22和26联合组。1mL/mL以上各组的Cl2、ClO2、22联合,以及125mL/mL26联合组诱导单链损伤(Olive尾距,OTM)高于阴性对照组;在1mL/mL组,Cl2>ClO2>22联合>26联合,差异有统计学意义,但在5mL/mL以上各组,Cl2与ClO2之间差异无统计学意义,在25mL/mL以上组Cl2与22联合组差异无统计学意义。Cl2和ClO2从1mL/mL起各组,22和26联合的25、125mL/mL组诱导的双链损伤高于阴性对照组;1mL/mL以上各组的22和26联合诱导的双链损伤低于Cl2和ClO2单独消毒,125mL/mL的26联合所致的双链损伤低于22联合消毒法。Cl2和ClO2在5mL/mL以上各组诱导微核率(MNF)高于阴性对照组。22和26联合消毒法在25、125mL/mL组与阴性对照相比微核率增加。[结论]Cl2、ClO2及其22、26联合消毒饮用水的有机提取物均可不同程度诱导HepG2细胞DNA损伤,对HepG2细胞DNA损伤能力为Cl2>ClO2>22联合>26联合。
- 杜海荣曹贤文张荣朱晓玲杜宏郝巧玲周宜开
- 关键词：二氧化氯联合消毒有机提取物DNA损伤
- 源水和氯化饮用水中有机提取物对HepG2细胞DNA损伤的诱导作用及对gadd153基因表达的影响被引量：3
- 2006年
- 背景与目的研究源水和氯化饮用水有机提取物对DNA的损伤作用以及对gadd153启动子和mRNA表达的影响。材料与方法应用彗星试验检测源水和氯化饮用水有机提取物对HepG2细胞的DNA损伤作用;构建含有gadd153启动子和荧光素酶报告基因的载体pGADD153-Luc,以检测荧光素酶活性(发光检测荧光素酶活性)反映gadd153启动子的活性,RT-PCR检测gadd153基因mRNA的表达。结果彗星试验显示在10、100ml/ml培养基剂量组源水和氯化饮用水有机提取物处理24h后,OTM(Olive尾距)显著高于对照组(P<0.01),并有良好的剂量反应关系(源水r=0.882,P<0.05;氯化饮用水r=0.940,P<0.05);氯化饮用水中有机提取物诱导OTM显著高于源水(P<0.05);荧光素酶表达在源水和氯化饮用水有机提取物各剂量组均显著高于对照组(P<0.01)并有良好的剂量反应关系(源水r=0.814,P<0.05;氯化饮用水r=0.921,P<0.05);相关分析表明荧光素酶活性与OTM呈正相关(源水r=0.980,P<0.01;氯化饮用水r=0.995,P<0.01);RT-PCR结果显示在100ml/ml培养基剂量组,源水和氯化饮用水中有机提取物诱导gadd153mRNA表达显著增加(P<0.05),并与OTM有良好的相关性(源水r=0.864,P<0.05;氯化饮用水r=0.897,P<0.05)。结论源水和氯化饮用水有机提取物可诱导HepG2细胞DNA损伤,导致gadd153启动子区的激活,并进一步调控下游gadd153基因mRNA的表达。
- 张荣郝巧玲石丹周宜开
- 关键词：荧光素酶报告基因
- 双酚A对人胚肝细胞DNA损伤和修复功能的影响被引量：13
- 2005年
- [目的]研究双酚A(BisphenolA,BPA)对人肝L-02细胞DNA损伤修复功能的影响。[方法]分别以1、10、50、100μmol/LBPA和100μmol/LBPA+30μg/LVitC处理L-02细胞,比较处理和未处理的人胚肝L-02细胞在DNA损伤程度、切除修复鼠缺陷交叉互补蛋白1(ERCC1)、尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)、错配修复hMSH2基因(hMSH2)、DNA依赖蛋白激酶复合物(DNA-PKcs)及O6-甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)表达水平的差异。每组细胞数均为1×106个/ml。[结果]BPA处理后,彗星试验显示BPA在低剂量(10μmol/L)时即具有DNA损伤作用(P<0.05),随着剂量增大,DNA损伤效应增加。100μmol/LBPA+30μg/LVitC组DNA损伤效应降低,显示抗氧化剂VitC可减缓BPA所致的DNA损伤效应,氧化损伤是BPA所致DNA损伤的方式之一。5种DNA损伤修复酶表达水平在1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L剂量组依次降低,在100μmol/L、100μmol/L+VitC组依次增加,50μmol/L组各种DNA损伤修复酶表达水平最低。BPA50μmol/L组与溶剂对照比较,5种DNA损伤修复酶均有明显降低,差异具有显著性(P<0.05)。100μmol/L组的表达水平均高于50μmol/L组,100μmol/L+VitC组均高于100μmol/L组。除DNA-PKcs与hMSH2外,其他DNA损伤修复酶在100μmol/L+VitC组与溶剂对照组比较差异均无显著性(P>0.05)。[结论]BPA对L-02细胞具有氧化损伤作用,并可导致DNA损伤,多种DNA损伤修复酶参与修复双酚A所导致的DNA损伤。VitC可减缓双酚A的DNA损伤作用。
- 张江华李华文石丹江明郝巧玲周宜开吕斌
- 关键词：双酚ADNA损伤修复酶
- 双酚A对人胚肝细胞凋亡的影响被引量：1
- 2005年
- [目的]研究双酚A(BPA)对人胚肝L-02细胞的凋亡的影响。[方法]以MTT来分析不同浓度BPA对人胚肝L-02细胞的细胞存活率的影响;用流式细胞术分析不同浓度BPA对细胞凋亡的影响;通过RT-PCR分析BPA引起的生长抑制、DNA损伤基因GADD45、GADD153、GADD34表达水平的变化。[结果]BPA处理后,L-02细胞的生存率随着BPA浓度的增加而下降,在≥50μmol/L,细胞的存活率显著降低(P<0.01)。随着BPA浓度升高,细胞凋亡率增加,≥50μmol/L可显著升高L-02细胞的凋亡率(P<0.01)。生长抑制DNA损伤基因GADD45、GADD153.GADD34表达水平随着BPA浓度增加表达量也增加,100μmol/LBPA组显著高于正常对照组,但在100μmol/L,BPA+VitC组三种GADD基因表达量均稍降低。[结论]BPA对L-02细胞具有细胞毒性作用,可导致细胞凋亡率升高,与细胞生长调控和DNA损伤相关的GADD45、GADD153、GADD34基因表达升高,VitC可减缓BPA对DNA的损伤作用。
- 石丹李华文张江华江明郝巧玲周宜开吕斌
- 关键词：双酚A凋亡
- 基于GADD153启动子的环境致癌物快速筛选系统研究被引量：2
- 2006年
- [目的]构建快速检测环境中痕量致癌物DNA损伤效应的重组人肝细胞株。[方法]构建含生长抑制与DNA损伤基因153(GADD153)启动子和萤光素酶报告基因的重组稳定转染人肝肿瘤HepG2细胞;发光检测不同致癌物对稳定转染细胞的DNA损伤效应;同时RT-PCR检测内源性GADD153mRNA的表达;彗星试验(Cometassay)检测DNA的损伤效应。[结果]稳定转染GADD153-LUC细胞株可检出多环芳烃、芳香胺、重金属、农药等已知环境致癌物以及实际水样中的含量。检测结果与彗星试验结果相比,大多数检测下限均低于彗星试验的检测限,其中对苯并芘、氯化镉和2-氨基芴的检测灵敏度分别高于彗星试验1000、300和100倍;对Aems试验不敏感的重金属、四氯化碳、氟化钠等重组细胞株具有较高的检测灵敏性。10μmol/L的氯化镉可诱导内源性GADD153mRNA和萤光素酶活性表达增加,相关分析表明两者具有良好的相关性(r2=0.9539)。[结论]重组细胞株GADD153-LUC细胞可快速检测环境中痕量污染物的DNA损伤效应。
- 张荣石丹李华文郝巧玲吕斌周宜开
- 关键词：萤光素酶报告基因重组细胞环境致癌物
- 双酚A对人胚肝细胞L-02的毒性作用研究被引量：12
- 2005年
- [目的]探讨双酚A对肝细胞L- 0 2的毒性作用及可能损伤机制。[方法] 1、10、5 0、10 0 μmol/L浓度的双酚A作用肝细胞L 0 2后,检测双酚A对肝细胞L-0 2的存活率、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量变化、细胞凋亡及凋亡相关基因P5 3、caspase3mRNA表达的影响。[结果]双酚A处理后,肝细胞L 0 2的存活率随着双酚A浓度的增加而下降,在≥5 0 μmol/L浓度,细胞的存活率显著降低(P <0 .0 1)。双酚A诱导肝细胞L -0 2中的SOD含量降低(P <0 .0 1) ,GSH和MDA含量在1μmol/L明显降低(P <0 .0 5 ) ,而后随着剂量的增加升高明显(P <0 0 1)。CAT水平先随着剂量的增加而升高到10 μmol/L的(10 5 .68±9.63 )U/g蛋白,而后随着剂量的增加而显著降低(P<0 .0 1)。≥5 0 μmol/L浓度的双酚A能明显诱导肝细胞L 0 2凋亡和P5 3、caspase3mRNA的表达升高(P <0 .0 1)。凋亡率从对照组的(8.16±0 .0 7) %上升到10 0 μmol/L的(17.2 0±1.2 5 ) % ,5 0、10 0 μmol/L浓度P5 3和caspase3mRNA表达分别是对照组的(1.42±0 .2 5 )、(1.65±0 .13 )、(1.41±0 .12 )和(1.77±0 .0 6)倍。[结论]双酚A对肝细胞L 0 2具有细胞毒性和氧化损伤作用,并能诱导肝细胞L 0 2发生凋亡和P5 3。
- 李华文刘燕群石丹张江华郝巧玲吕斌周宜开
- 关键词：L-02双酚A人胚肝细胞氧化损伤作用基因P53
