浙江省科技厅科技计划项目(2011F10043)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- 利用植物生物反应器表达药用蛋白FC-IL-1ra被引量：1
- 2013年
- 目的:构建植物双元表达载体pMCP0-FC-IL-1ra转化根癌农杆菌GV3101并侵染胡萝卜悬浮细胞,筛选得到的阳性细胞24孔板培养1周后,检测上清中FC-IL-1ra蛋白的表达。方法:用PCR的方法扩增得到含组织型纤溶酶原激活物(tPA)分泌型信号肽的FC-IL-1ra片段,并将其连接至测序载体pGEM-T Easy中,测序正确后将FC-IL-1ra片段酶切连接至植物表达载体pMCP0中,经PCR及酶切验证插入片段的正确性。重组质粒经农杆菌GV3101介导转染胡萝卜悬浮细胞,经潮霉素筛选得到阳性克隆,24孔板培养后取上清检测蛋白表达,dot blotting检测及Western blotting验证分泌蛋白FC-IL-1ra。结果:成功构建了植物双元表达载体pMCP0-FC-IL-1ra,转化胡萝卜悬浮细胞后筛选得到阳性克隆,经dot blotting检测获得6个表达较高的细胞克隆,经Western blotting确认获得能分泌FC-IL-1ra蛋白的胡萝卜悬浮细胞株系,但分泌表达的FC-IL-1ra在IL-1ra中间某一位置有断裂。结论:成功构建了植物双元表达载体pMCP0-FC-IL-1ra,并在植物悬浮细胞体外实现了Fc-IL-1ra融合蛋白的分泌表达,证明了利用植物细胞大规模表达药用蛋白的可行性。
- 陈观平汪一帆应栩华
- 关键词：药用蛋白
