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国家自然科学基金(31001099C190101)

作品数：14 被引量：8H指数：2
相关作者：陈思礼梅菊陈洁刘欣尤隽丹更多>>
相关机构：中南民族大学华中科技大学更多>>
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相关领域：生物学化学工程更多>>

文献类型

  • 13篇中文期刊文章

领域

  • 12篇生物学
  • 1篇化学工程

主题

  • 10篇鱼腥藻
  • 9篇鱼腥藻PCC...
  • 9篇基因
  • 4篇同源
  • 3篇同源基因
  • 2篇毒素-抗毒素...
  • 2篇质粒
  • 2篇染色
  • 2篇染色体
  • 2篇抗毒素
  • 2篇集胞藻
  • 2篇ANABAE...
  • 1篇蛋白
  • 1篇蛋白表达
  • 1篇点突变
  • 1篇定点突变
  • 1篇亚基
  • 1篇原核表达
  • 1篇藻蓝蛋白
  • 1篇铁元素

机构

  • 12篇中南民族大学
  • 1篇华中科技大学

作者

  • 12篇陈思礼
  • 3篇陈洁
  • 3篇梅菊
  • 2篇田申
  • 2篇尤隽丹
  • 2篇刘欣
  • 2篇龚凤娇
  • 1篇张磊
  • 1篇朱超
  • 1篇李丽君
  • 1篇刘炳君
  • 1篇马凯
  • 1篇镇慧

传媒

  • 6篇中南民族大学...
  • 4篇华中师范大学...
  • 1篇湖北农业科学
  • 1篇Wuhan ...
  • 1篇陕西科技大学...

年份

  • 4篇2016
  • 1篇2015
  • 3篇2014
  • 2篇2013
  • 3篇2012
共 14 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
鱼腥藻PCC7120基因asr0757/alr0758的初步研究
2015年
为研究鱼腥藻PCC7120(Anabaena sp.)基因asr0757/alr0758在毒素-抗毒素系统中的相关生物学功能,设计了特异性引物,扩增目的片段asr0757和alr0758,将目的基因与p MD18-T载体连接构建克隆载体,并对其进行XhoⅠ和NdeⅠ双酶切,再与表达载体p ET-28a连接构建表达重组菌,重组菌的体外表达在IPTG的诱导下进行。经琼脂糖电泳检测,结果扩增出了大小为210 bp的asr0757和342 bp的alr0758目的基因。经SDS-PAGE电泳检测,表达出相对分子质量分别为8.068 k D和12.534 k D的蛋白质。根据结果可初步认定alr0758为毒素基因,asr0757为抗毒素基因,共同构成鱼腥藻PCC7120毒素-抗毒素系统。
李丽君陈思礼马凯蒋泽凤周江旭
关键词：毒素-抗毒素系统
鱼腥藻PCC7120α质粒上的parD/E同源基因all7155/asl7156的克隆及表达
2014年
为研究鱼腥藻PCC7120质粒上毒素抗毒素系统的蛋白质性质和相互作用,根据NCBI中PCC7120的α质粒上的all7155和asl7156基因数据,通过降落PCR克隆了目的基因(all7155/336 bp,asl7156/258 bp).将目的基因片段连接至p MD18-T构建了克隆载体,蓝白斑筛选了阳性克隆,经双酶切纯化后将目的基因连接至表达载体p ET30a(+),并转入表达菌BL21中,测序后证实构建成功,并利用IPTG诱导进行了表达.通过NCBI的BLAST蛋白比对,发现了all7155和asl7156与已知的Par D/E毒素抗毒素系统同源,可通过对此基因的克隆,表达和蛋白性质来进一步认识Par D/E系统.
陈思礼张磊刘炳君
关键词：鱼腥藻PCC7120蛋白表达
鱼腥藻PCC7120染色体基因对asr0757/alr0758的表达优化及其鉴定
2016年
NCBI预测鱼腥藻PCC7120染色体上的基因对asr0757/alr0758可能构成一个毒素-抗毒素系统.为研究其是否属于毒素-抗毒素系统家族,分别构建这两个基因的表达载体.用1.0 mM IPTG诱导重组菌表达,优化表达条件,并对表达出的蛋白进行纯化与western blot检测.SDSPAGE结果显示:asr0757与alr0758在37℃下诱导6h后,均成功诱导表达出目的蛋白asr0757(13.5KD)和alr0758(17.9KD).抗毒素表达量较好,毒素alr0758表达量较少.通过设置诱导时间梯度和IPTG浓度梯度优化毒素基因表达条件,优化结果显示:毒素基因alr0758在28℃,IPTG浓度为0.4mM,诱导10h时有最大表达量.蛋白纯化与western blot结果证实诱导表达的蛋白为目的蛋白.
陈洁陈思礼吴汇兰
关键词：鱼腥藻PCC7120
鱼腥藻PCC7120基因all3211和asl3212的克隆及其功能鉴定被引量：1
2012年
鱼腥藻PCC7120染色体上的开放阅读框all3211和asl3212具有与大肠杆菌细胞染色体上毒素-抗毒素系统(TA,toxin-antitoxin system)相同的遗传结构,该系统由位于同一操纵子中的两个分别编码毒素蛋白和抗毒素蛋白的基因组成,介导细胞程序性死亡.基因all3211的编码产物与MazEF毒素-抗毒素系统中的毒素蛋白MazF同源.为证明这一对基因表达产物的毒素抗毒素作用,首先设计合适引物克隆了鱼腥藻PCC7120染色体上all3211和asl3212基因,并构建了含乳糖启动子和阿拉伯糖启动子的双启动子表达载体,将两个基因分别置于该载体的不同启动子下进行诱导表达,验证了各自表达产物对细胞的作用.结果显示:all3211基因的表达产物对细胞有一定的毒性作用,可抑制细胞生长;asl3212基因表达产物能减弱all3211表达产物对细胞的毒性作用,初步证明这一对基因构成了一个毒素-抗毒素系统,all3211为毒素基因,asl3212为抗毒素基因.
梅菊陈思礼刘欣尤隽丹
关键词：鱼腥藻PCC7120
集胞藻PCC6803基因ssl1690缺失突变株的构建
2013年
使用BLAST软件对聚球藻PCC7002的裂合酶基因cpcT进行了同源搜索分析,在集胞藻PCC6803中获取了相似程度达68%的同源基因ssl1690.为进一步探讨ssl1690功能,构建了同源缺失突变载体,将其转入蓝藻细胞中,筛选得到基因缺失突变株,并将基因缺失突变株培养于BG11液体培养基中,观察了其生长情况和表型变化.结果表明:基因缺失突变株与野生株相比,生长有所延迟,有漂白现象.通过分离和比较SDS-PAGE电泳突变株与野生株的藻胆体蛋白,发现缺失株存在藻胆体组分蛋白的缺失.故认为集胞藻PCC6803 ssl1690基因功能与光合作用有关,其所编码的蛋白对藻蓝蛋白正常的体内生物合成具有重要作用.
陈思礼镇慧
关键词：集胞藻PCC6803同源重组缺失突变
集胞藻PCC6803基因slr2049定点突变及其体内重组功能研究
2013年
在Synechocystis sp.PCC 6803中找到与cpeS具有高度同源性的基因slr2049.采用PCR从Synechocystis sp.PCC 6803DNA中扩增出cpcB,slr2049,ho1,pcyA4个基因;定点突变试剂盒构建8个突变体slr2049(H21S)、slr2049(L23S)、slr2049(A24S)、slr2049(F25S)、slr2049(W72L)、slr2049(G84S)、slr2049(R107S)和slr2049(Y124S);将它们与表达载体pCDFDuet-1和pET-23a(+)相连构建pCDF-cpcB-slr2049野生型和pCDF-cpcB-slr2049突变体以及pET-ho1-pcyA,进行高效表达,用亲和层析柱纯化,产物用SDS-PAGE和光谱检测.研究表明:突变体slr2049(H21S)、slr2049(L23S)、slr2049(F25S)、slr2049(W72L)、slr2049(G84S)、slr2049(Y124S)与野生型slr2049催化获得的重组藻蓝蛋白β亚基具有与天然藻蓝蛋白β亚基相似的光谱特性,其他2个突变体slr2049(A24S)和slr2049(R107S)催化的产物则没有光谱特性.由此推测,第24位丙氨酸和第107位精氨酸可能是slr2049酶活性的必需氨基酸,其所处位置是slr2049的活性位点.
朱超陈思礼
关键词：定点突变
鱼腥藻铁吸收调节蛋白基因(alr0957)的克隆和表达
2012年
依据CyanoBase提供的鱼腥藻PCC7120 furC基因(alr0957)的序列信息设计了一对特异性引物,用Touch-down PCR的方法从基因组DNA中扩增得到大小约450bp的目的片段.通过TA克隆的方法将该片段连接到pMD18-T载体上筛选出重组质粒pMD18-T-fur,然后进行双酶切,纯化furC基因,再连接到原核表达载体pET-28a(+)上,转化表达菌株BL21(DE3).经PCR、双酶切和测序鉴定,对阳性菌株进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测重组蛋白.结果表明:在25℃条件下经1mmol/L IPTG诱导20h,融合蛋白被成功表达,其分子量约为19 000,为进一步纯化蛋白和对基因的调控功能方面研究奠定了基础.
尤隽丹陈思礼梅菊刘欣
关键词：鱼腥藻PCC7120原核表达
鱼腥藻PCC 7120染色体上relBE同源基因的克隆及表达被引量：3
2012年
为研究鱼腥藻PCC7120染色体上与relBE同源的基因asl4561和asl4562表达产物的毒素-抗毒素作用,从鱼腥藻细胞中提取总基因组DNA,设计特异引物PCR扩增目的基因asl4561和asl4562,与T载体连接后经XhoI和EcoR I双酶切并与表达载体pET28a(+)连接,由IPTG诱导表达,并在IPTG浓度和诱导时间上对asl4561基因的表达条件进行了优化.琼脂糖凝胶电泳显示扩增出了264bp的asl4561基因和213bp的asl4562基因,SDS-PAGE检测表明成功表达出15.65kD和13.55kD的两蛋白,当诱导温度28℃、IPTG浓度0.4 mmol/L、诱导时间6h时,asl4561基因表达蛋白在细菌裂解液上清中表达量最大.
陈思礼梅菊
关键词：鱼腥藻PCC7120
鱼腥藻PCC7120质粒上毒素-抗毒素基因对alr9029/asr9028的初步研究被引量：2
2016年
指出了大肠杆菌的毒素-抗毒素系统(TAs)能介导解离后致死机制维持细菌质粒的稳定性和参与环境胁迫诱导细菌生长抑制或死亡,在鱼腥藻PCC7120质粒上的基因对alr9029/asr9028具有与TA系统较高的同源性.为了证实该基因对属于TA系统,通过生物信息学分析了alr9029/asr9028的遗传结构,设计特异性引物,扩增得到大小为198 bp的asr9028和387 bp的alr9029.PCR产物经Bam H I和HindШ双酶切后被插入p MD18-T和p ET-30a中,依次构建克隆载体和表达载体.经SDS-PAGE电泳检测,含有His6标签的表达蛋白相对分子量分别为12.4k Da和19.2 k Da,且为可溶性蛋白.故初步认定asr9028为抗毒素基因,alr9029为毒素基因,二者共同构成一个TA系统.
陈思礼吴汇兰陈洁
关键词：鱼腥藻PCC7120
鱼腥藻PCC7120染色体MazEF同源基因对asr0757/alr0758的初步研究被引量：1
2016年
鱼腥藻PCC7120染色体上的基因对asr0757/alr0758,经NCBI比对显示其与大肠杆菌中的毒素-抗毒素基因Maz EF具有较高的同源性,且具有毒素-抗毒素系统基因的保守遗传结构,为研究其是否属于Maz EF家族系统基因,构建同时含有asr0757和alr0758基因的双启动子选择性表达载体,先选择性诱导了该基因对的表达,再验证了其表达产物对细菌生长的影响.结果显示:成功诱导表达出了目的蛋白asr0757(13.5KD)和alr0758(17.5KD),当单独诱导asr0757基因表达时,细菌生长状况不受影响,单独诱导alr0758表达时细菌生长明显受到抑制,同时诱导asr0757和alr0758基因时细菌生长恢复正常,说明asr0757/alr0758构成具有生物功能的Maz EF家族系统基因对,具有毒性与抗毒性功能.
陈思礼陈洁吴汇兰
关键词：鱼腥藻PCC7120毒素-抗毒素系统
全选 清除 导出
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