国家自然科学基金(31260394)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
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- 发文基金：国家自然科学基金贵阳市科学技术计划项目贵州省科技厅重大专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 威宁豆酱中主酵菌株的分离与鉴定被引量：3
- 2019年
- 以贵州省威宁地区传统方法制作的酱曲为试材,通过分离纯化初步得到22株细菌、10株真菌。将分离纯化的菌株分别接种于豆酱中进行纯种发酵,通过感官评价筛选出主要的发酵菌株,通过形态观察、分子生物学技术及VITEK 2全自动微生物鉴定系统对其进行鉴定,并对其发酵豆酱的理化指标进行测定。结果表明,菌株DX-9和DZ-3发酵豆酱的感官评分最高,分别为94分、90分,且与传统威宁豆酱风味相似,确定为主要发酵菌株。鉴定菌株DX-9为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),菌株DZ-3为异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)。两菌株发酵豆酱的理化指标符合相关国标要求,且菌株DX-9发酵豆酱优于菌株DZ-3。
- 张问平黄晓润郭娅曾金兴黎忠杰佟硕秋吴拥军
- 关键词：豆酱纯种发酵
- 高活性谷氨酰胺酶基因glsA_2在枯草芽孢杆菌BJ3-2染色体上的定点整合被引量：2
- 2014年
- 以枯草芽孢杆菌BJ3-2的glsA1基因为同源序列,通过构建单交换整合载体,将高活性谷氨酰胺酶基因glsA2定点整合入BJ3-2菌株染色体中,获得能够稳定遗传的重组菌株BJ3-2A2。经检测重组菌株谷氨酰胺酶活力为BJ3-2菌株的3.36倍。利用重组菌株BJ3-2A2发酵豆豉,全氨基酸检测显示,重组菌株发酵的豆豉谷氨酸含量比出发菌株高12.8%。说明枯草芽孢杆菌BJ3-2可以转化且为RecE+菌株,glsA2基因在BJ3-2菌株染色体上可实现较高活性表达,并提高发酵豆豉的鲜味。
- 卢彪吴拥军刘艳敏王亚娟唐雪
- 关键词：枯草芽孢杆菌同源重组
- 枯草芽孢杆菌基因的安全改良研究被引量：1
- 2014年
- 为了构建能稳定表达外源基因且无抗性标记基因的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)工程菌。采用聚合酶链式反应(PCR)技术,分两段扩增定位于B.subtilis BJ3-2染色体上的谷氨酰胺酶基因(glsA)上下游基因片段作为同源臂。将同源臂及卡那霉素基因(Kan)克隆入温敏型载体pKSV7,构建了双交换载体pKUKD。并利用pKUKD质粒将kan基因定点整合入BJ3-2染色体上,通过Kan抗性筛选获得glsA敲除菌株BJ-kan。经检测BJ3-2菌株谷氨酰胺酶活力比重组菌株高3.2倍。结果显示:BJ3-2染色体上的基因可通过同源重组方式进行敲除与置换,为今后BJ3-2菌株以及野生型B.subtilis基因敲除与置换提供了更加便捷的方法。
- 沈玺龙蔡传斌王亚娟卢彪吴拥军
- 关键词：枯草芽孢杆菌谷氨酰胺酶卡那霉素
- 谷氨酰胺酶基因原核表达载体的构建与表达被引量：2
- 2013年
- 为验证谷氨酰胺酶基因glsA2的酶活力,以pET-32a为表达载体构建原核表达重组质粒pET32a-glsA2,转化表达菌株E.coli BL21(DE3)。从异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)的诱导浓度及诱导表达时间两方面对重组菌株glsA2基因的表达系统进行优化。结果显示,0.1mmol/L IPTG诱导6h,谷氨酰胺酶活力达到608.2U/μg,约为对照的15倍。
- 卢彪吴拥军吴玉俊罗熹刘艳敏
- 关键词：谷氨酰胺酶原核表达
