国家自然科学基金(30972141C120110)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 相关作者：周芳李兴华杨华军缪云根云涛更多>>
- 相关机构：浙江大学浙江省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省重大科技专项资金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 利用杆状病毒Bac-to-Bac系统在家蚕表达猪繁殖与呼吸综合征病毒的E蛋白和M蛋白被引量：4
- 2010年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种严重危害养猪业的传染性病原。PRRSV病毒的E蛋白和M蛋白基因是开发PRRSV病毒新型疫苗的目标基因。利用杆状病毒Bac-to-Bac表达系统,将PRRSV病毒的E蛋白和M蛋白的基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb中,获得重组转移质粒pFastBacHTb-E和pFastBacHTb-M,转化大肠杆菌Bm DH10 Bac感受态细胞,获得重组杆粒BmNPV Bacmid-E、BmNPV Bacmid-M,将这些重组杆粒转染家蚕培养细胞Bm5,获得重组病毒BmNPV-E和BmNPV-M。将2种重组病毒分别接种5龄起蚕,用SDS-PAGE和Western blotting方法在重组Bacmid DNA转染的Bm5细胞和感染重组病毒的家蚕幼虫血细胞中分别检测到分子质量约20 kD和18 kD的E蛋白和M蛋白,表明PRRSV病毒的E蛋白和M蛋白在家蚕培养细胞及幼虫体内获得了表达,为利用家蚕-杆状病毒表达系统研制PRRSV的新型疫苗与诊断试剂奠定了基础。
- 王丹BHASKAR Roy李兴华杨华军周芳缪云根云涛刘光清
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒E蛋白M蛋白
- 昆虫细胞内N-糖基化途径及人源化糖蛋白表达被引量：1
- 2011年
- 虽然昆虫杆状病毒表达系统在蛋白表达领域得到了广泛的应用,但由于不能表达复杂的末端唾液酸化的N-糖链,使得该系统在生物制药行业的应用受到了很大的限制。通过比较哺乳动物细胞和昆虫细胞内糖基化途径可知,其起始步骤一致,之后再发生分化,主要表现为3方面,即昆虫细胞内缺乏哺乳动物细胞所具备的N-乙酰葡萄糖氨转移酶II、半乳糖基转移酶/N-乙酰氨基半乳糖转移酶、α-2,3-唾液酸转移酶和α-2,6-唾液酸转移酶等延长N-糖链的糖基转移酶;另外,昆虫细胞内具有能够特异性地将蛋白质末端的N-乙酰氨基葡萄糖残基从GlcNAcMan3GlcNAc(±α3/6-Fuc)GlcNAc上切除的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶及核心α-1,3-岩藻糖基转移酶。本文从上述异同出发,综述了克服昆虫细胞内不能表达人源化糖蛋白这一缺陷所进行的N-糖基化途径的改造研究——主要集中在昆虫细胞内GlcNAcase的抑制和昆虫细胞内GnT2,GalT/GalNAcT,ST3及ST6等基因的导入等方面,结果表明经改造的昆虫细胞可表达人源化糖蛋白,这将极大地拓宽昆虫杆状病毒表达系统的应用领域。本文还探讨了选择特殊细胞系及特殊培养条件以在昆虫细胞内表达唾液酸化蛋白的可行性。
- 胡嘉彪张芃牛艳山Bhaskar ROY李兴华杨华军周芳缪云根
- 关键词：昆虫细胞哺乳动物细胞糖蛋白糖苷
