中国综合性艾滋病研究项目(CIPRA)
- 作品数：11 被引量：29H指数：4
- 相关作者：冯霞周玲余双庆曾毅陈国敏更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心中国医学科学院北京协和医学院北京工业大学更多>>
- 发文基金：中国综合性艾滋病研究项目国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SHIV-XJ02170在中国恒河猴体内传代过程中env基因变异研究
- 2010年
- 目的 研究SHIV-XJ02170在中国恒河猴体内传代过程中env基因序列变异的特点.方法 应用聚合酶链反应（PCR）和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别对各代动物SHIV-XJ02170病毒载量峰值时间点全血前病毒DNA gp160基因和血浆病毒RNA gp120基因进行扩增.GP160基因PCR产物直接进行测序分析,gp120 RNA扩增产物连接T载体后每份样品挑选18个克隆测序,分析传代过程中病毒的基因距离（divergence,diversity）的变化规律及病毒基因进化的特点.结果 SHIV-XJ02170在传代过程中基因连续进化并且进化的方向和病毒传代的顺序完全一致,基因距离总体上表现为逐步扩大的趋势,病毒传代早期存在明显的＂瓶颈效应＂.氨基酸序列分析发现V3环顶端四肽和辅助受体在传代过程中未发生改变.结论 SHIV-XJ02170经过中国恒河猴体内传代后基因距离出现明显扩大过程,且按照传代的顺序发生连续的基因进化.这从分子水平上部分解释了 SHIV-XJ02170经猴体传代出现毒力增强的原因.
- 刘强李悦杨贵波魏强秦川邵一鸣
- 关键词：SHIV传代ENV
- 体内电穿孔对报告基因表达和HIV Gag DNA疫苗诱导的免疫反应的影响被引量：6
- 2006年
- 目的研究体内电穿孔递送途径在小鼠模型中对于报告基因表达水平及HIV Gag DNA疫苗所诱导的免疫反应的影响。方法构建荧光素酶(luciferase)表达质粒p1．0-luc,将其通过直接肌肉注射、肌注后以双针电极进行电穿孔、肌注后以钳式电极进行电穿孔等3种不同方法注射小鼠,72h后取注射部位的肌肉测定luciferase的表达情况。同时构建携带密码子优化的HIV-1B′/C重组亚型CN54株gag基因的DNA疫苗质粒p1．0-gag,在10μg、100μg两个剂量水平上通过以上3种不同的方法免疫BALB/c雌性小鼠,ELISA方法检测Gag特异的抗体反应,ELISPOT方法和细胞内因子染色(jntracellular cytokine staining,ICS)技术检测细胞免疫应答。结果通过体内电穿孔可以使luciferase在小鼠肌肉中的表达水平显著提高,最大提高幅度达到66倍。Gag DNA疫苗免疫结果显示,电穿孔可以显著提高Gag特异的体液免疫应答,其中使用双针电极的效果要显著好于钳式电极,前者所诱导的抗体滴度比不使用电穿孔组提高可达28倍。但体内电穿孔对于Gag特异的细胞免疫应答并没有显著影响。结论体内电穿孔(尤其是使用双针电极)可以大幅度提高报告基因在体内的表达水平和DNA疫苗诱导的抗原特异性体液免疫应答。
- 李鼎锋张玉伟李海山范文玲孙茂盛刘勇邵一鸣
- 关键词：DNA疫苗基因表达
- 套式PCR在检测SHIV动物模型中的应用被引量：1
- 2005年
- 用嵌合体猴/人免疫缺陷病毒接种恒河猴,进行体内连续传代,从第4次传代接种嵌合体猴/人免疫缺陷病毒的2只恒河猴外周血淋巴细胞中提取猴全基因组,针对编码嵌合体猴/人免疫缺陷病毒核心蛋白的gag基因进行引物设计,采用套式PCR对提取的全基因组进行检测。套式PCR产物电泳后得到477 bp目的片段,测序结果与GenBank中的猴免疫缺陷病毒mac239的gag序列基本一致,说明嵌合体猴/人免疫缺陷病毒已整合到恒河猴基因组中。与传统病毒分离方法相比较,套式PCR检测的灵敏度明显高于病毒分离方法,尤其在感染初期和感染后期病毒处于潜伏期或病毒载量低的情况下,套式PCR方法的优越性更是传统病毒分离方法所不能替代的。
- 李晓燕孙晓梅高家红代成波陈瑜李琦涵代解杰
- 关键词：动物模型
- C亚型SHIV-XJ02170在中国恒河猴体内传代研究
- 2010年
- 目的 了解SHIV-XJ02170病毒在中国恒河猴体内传代过程中病毒学和免疫学变化特点,构建适用于我国艾滋病疫苗评价的C亚型SHIV/中国恒河猴模型.方法 将SHIV-XJ02170感染性全长质粒转染293T细胞制备病毒,后肢静脉途径在中国恒河猴体内传3～4代.传代过程中采用流式细胞术检测外周血CD4/CD8比值,分析病毒致病能力的变化.实时荧光定量RT-PCR方法 检测SHIV病毒载量,了解病毒学变化特点.同时,利用ELISA和ELISPOT方法 分析病毒传代过程中体液和细胞免疫学变化特点.结果 SHIV-XJ02170病毒传代过程中,CD4/CD8比值未表现出剧烈的下降特点.线路3传代中急性期血浆病毒载量峰值和Setpoint值表现出连续上升的趋势.病毒感染恒河猴后可诱导较强的体液和细胞免疫应答.同时,病毒载量和交叉抗体滴度之间表现出显著的正相关关系.结论 SHIV-XJ02170病毒在中国恒河猴传代后未出现致病性突变株,但是表现出毒力上升的趋势.SHIV-XJ02170/中国恒河猴模型将在我国艾滋病疫苗有效性评价中发挥重要作用.
- 刘强李悦杨贵波魏强秦川邵一鸣
- 关键词：SHIV传代恒河猴
- 塞姆利基森林病毒翻译增强序列对HIV Gag DNA疫苗抗原表达和免疫原性的调节被引量：2
- 2005年
- 目的研究塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)衣壳蛋白5′翻译增强区对基于该病毒复制子的HIVGagDNA疫苗抗原表达水平和免疫原性的影响。方法将SFV衣壳蛋白(capsid,C蛋白)基因的5′端102bp翻译增强区插入到SFV复制子DNA疫苗载体pCMVRep的SFV亚基因启动子下游,得到DNA疫苗载体pCMVRepC。将删除ATG的HIV1gag基因插入pCMVRepC,使gag编码区与翻译增强区融合,得到DNA疫苗质粒pCMVRepCgag。同时,构建携带未融合翻译增强序列的DNA疫苗质粒pCMVRepgag。Westernblot检测翻译增强序列对Gag表达水平的影响。用上述两种DNA疫苗分别免疫BALBc雌性小鼠,ELISA检测Gag特异的抗体反应,ELISPOT和细胞内因子染色技术检测细胞免疫应答。结果衣壳蛋白5′翻译增强区增强了Gag表达水平,对体液免疫应答没有显著影响,但显著增强了特异性细胞免疫应答水平。结论SFVC蛋白翻译增强区能显著提高SFV复制子DNA疫苗的抗原表达和抗原特异性细胞免疫反应。
- 张玉伟周克民李鼎锋李海山范文玲徐建青孙茂盛刘勇邵一鸣
- 关键词：DNA疫苗抗原表达免疫原性GAG特异性细胞免疫应答翻译
- 含密码子优化型HIV-1 gp120基因重组腺病毒的构建及其免疫效果研究被引量：4
- 2004年
- 目的 构建能表达野生型和密码子优化型人免疫缺陷病毒Ⅰ型 (HIV 1)B亚型中国流行株gp12 0基因的非复制型腺病毒。方法 按哺乳动物细胞偏好的密码子对HIV 1B亚型中国流行株Chgp4 2的gp12 0基因进行优化 ,合成优化基因。将野生型和密码子优化的gp12 0基因插入穿梭质粒 ,再与腺病毒骨架质粒pAdEasy 1共转化E coliBJ5 183,获得重组子 ,转染 2 93细胞后获得重组病毒。分别以两种重组腺病毒疫苗免疫小鼠 ,ELISA检测小鼠血清中的特异性抗体 ,乳酸脱氢酶法检测小鼠细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)反应。结果 获得两株重组腺病毒rAd wt gp12 0和rAd mod gp12 0 ,能正确表达Gp12 0。rAd mod gp12 0比rAd wt gp12 0蛋白表达水平明显提高。重组腺病毒免疫小鼠后能产生HIV 1特异性的抗体及CTL反应 ,rAd mod gp12 0组明显优于rAd wt gp12 0组。结论 成功构建了表达野生型和密码子优化的HIV 1gp12 0基因的重组腺病毒 ,能诱导HIV 1特异性体液和细胞免疫反应。
- 冯霞余双庆陈国敏左建民周玲曾毅
- 关键词：HIV-1GP120重组腺病毒免疫效果
- 提高内毒素去除效果的质粒DNA层析纯化工艺的优化被引量：4
- 2009年
- 目的优化质粒DNA分子筛或离子交换层析工艺,提高内毒素去除效果。方法在经精胺沉淀初步纯化的质粒DNA溶液中,加入不同浓度的EDTA(5、10和20mmol/L)或SDS(0.1%、0.2%和0.5%),分别进行Sephacryl S-1000分子筛层析及Source30Q离子交换层析,收集质粒峰,测定内毒素含量。结果用含0.5%SDS的质粒溶液进行分子筛层析,用含10～20mmol/L EDTA或0.1%～0.5%SDS的质粒溶液进行离子交换层析,质粒DNA的内毒素含量均<5EU/mg。结论添加一定浓度的EDTA或SDS可提高质粒DNA分子筛层析或离子交换层析去除内毒素的效果。综合考虑安全性因素,推荐用含10mmol/L EDTA的质粒溶液进行Source30Q离子交换层析。
- 王贻杰刘勇程海范文玲韩建霍烛郝彦玲邵一鸣
- 关键词：质粒DNA内毒素层析EDTASDS
- HIV-1B亚型gp120基因密码子优化前后免疫原性的比较被引量：10
- 2004年
- 对HIV 1B亚型gp120基因按照哺乳动物优势密码子的使用原则进行优化,以Westernblot方法比较其体外表达量。将优化前的野生型gp120基因和改造后的modgp120基因插入重组腺伴随病毒载体,构建了重组病毒rAAV wtgp120和rAAV modgp120,比较两者免疫Balb/C小鼠后的抗体和CTL应答。Westernblot检测结果显示:优化后基因的体外表达量明显高于野生型基因,rAAV modgp120与rAAV wtgp120相比可更好地诱导Balb/C小鼠的CTL应答,但检测不到明显的抗体反应。由此得出结论,优化后gp120基因的体外表达量明显高于野生型基因,并且可以诱导更强的特异性CTL应答,但检测不到gp120抗体。
- 余双庆冯霞陈国敏龚非周玲曾毅
- 关键词：人免疫缺陷病毒I型GP120密码子免疫原性重组腺伴随病毒
- 含HIV-1 gp120基因的重组腺相关病毒和重组腺病毒疫苗联合免疫的研究被引量：3
- 2004年
- 目的 探讨含HIV 1gp12 0基因的重组腺相关病毒 (rAAV)和重组腺病毒 (rAdV)疫苗在BALB c小鼠中联合免疫的效果。方法 将密码子优化的HIV 1gp12 0基因分别插入腺相关病毒(AAV)和腺病毒 (AdV)载体质粒 ,构建含该基因的rAVV和rAdV载体疫苗。将两种疫苗以不同的联合方式免疫BALB c小鼠 ,ELISA检测小鼠血清中的gp12 0特异性抗体 ,细胞内细胞因子染色法检测小鼠的特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)应答。结果 两种重组病毒均可表达目的基因gp12 0 ;在小鼠体内两种重组病毒联合免疫可诱导特异性的CTL应答和血清IgG抗体反应 ,但用rAAV初免 2次 ,再用rAdV加强 3次所诱发的CTL和血清IgG反应最强。
- 冯霞余双庆陈国敏吴小兵左建民董温平周玲曾毅
- 关键词：GP120联合免疫HIV-1重组腺相关病毒载体疫苗抗体反应
- 含HIV-1 gag基因的重组腺病毒5型与35型嵌合病毒免疫效果研究
- 2007年
- 目的 探讨含HIV-1 gag基因的重组腺病毒5型与35型嵌合病毒（rAd5／F35）在BALB／c小鼠中的免疫效果。方法 PCR，间接免疫荧光鉴定HIV-1 gag基因在重组腺病毒（rAd5／F35-mod．gag）的正确插入和体外细胞水平的表达，用rAd5／F35-mod．gag以不同的方式免疫BALB／c小鼠，ELISA检测小鼠血清中的p24特异性抗体，细胞内细胞因子染色法检测小鼠的特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）应答。结果 重组腺病毒rAd5／F35-mod．gag在体外细胞水平可以很好的表达目的基因gag；在小鼠体内重组腺病毒rAd5／F35-mod．gag可诱导特异性的CTL应答和血清IgG抗体反应，用rAd5／F35单独免疫2次，所诱发的CTL和血清IgG反应最强。但Ad5初次感染后，产生的抗Ad5抗体可以抑制rAd5／F35疫苗的特异性免疫反应。结论 重组腺病毒rAd5／F35-mod．gag单独免疫可在小鼠体内诱导特异性的CTL应答和血清IgG抗体反应。只改变Ad5纤突蛋白Fiber，不能避免抗Ad5抗体的抑制作用。
- 刘新蕾余双庆冯霞王小利刘红梅张晓梅李红霞周玲李泽琳曾毅
- 关键词：HIV-1艾滋病疫苗腺病毒科
