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单克隆抗体间接免疫荧光检测猪瘟病毒方法的建立被引量：9: 2010年; 以作者制备的抗猪瘟病毒单克隆抗体(anti-CSFV McAb)为一抗、荧光素标记羊抗小鼠IgG为二抗,通过反应条件的优化,建立检测猪瘟病毒抗原的间接免疫荧光(IFA)检测方法。确定IFA最佳工作条件:CSFV最佳接种浓度和培养条件为CSFV 10-3倍稀释后接种PK15细胞,37℃5%CO2恒温箱中培养36 h;McAb最适工作浓度为1∶1 000倍稀释;荧光素标记的羊抗小鼠IgG荧光抗体的最适工作浓度为1∶50倍稀释。特异性试验表明,用建立的IFA检测方法检测CSFV感染PK15细胞为阳性,而检测伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪2型圆环病毒(PCV-2)感染PK15细胞均为阴性。结果表明,建立的检测细胞培养中CSFV抗原的IFA检测方法具有敏感特异、简便快速等优点,可用于CSFV感染的实验室诊断及CSFV在感染细胞中的定位和动态分布研究。; 许保疆游一郭成留王川庆; 关键词：猪瘟病毒单克隆抗体间接免疫荧光

抗猪瘟病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定被引量：10: 2009年; 为对猪瘟病毒（CSFV）建立更加有效的临床检测方法。用纯化的猪瘟兔化弱毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。经ELISA方法筛选和3次亚克隆,最终获得了5株能稳定传代并分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为：C7,C9,G9,G10和4E8,其分泌的单克隆抗体（McAb）为IgG1（G9,4E8）和IgG2a（C7,C9,G10）亚类。经鉴定,5株单抗细胞培养上清效价为1∶1 600-1∶3 200,腹水效价为1∶51 200-1∶102 400。交叉试验及特异性抗原阻断试验表明,所制备的McAb与其他抗原无交叉反应性,均完全针对猪瘟病毒（CSFV）抗原决定簇,具有高度特异性。稳定性试验表明,制备的杂交瘤细胞株经连续传代25代和经3次冻存复苏后,仍能稳定分泌特异性抗体。抗CSFV McAb的成功制备,为进一步研究CSFV的生物学特性及其快速诊断方法的建立奠定了基础。; 许保疆陈陆游一刘春生郑鹿平王川庆; 关键词：猪瘟病毒杂交瘤单克隆抗体 ELISA

SYBR Green Ⅰ实时PCR对猪细小病毒体外复制动态分析被引量：4: 2012年; 根据已经发表的猪细小病毒(PPV)的VP2基因序列,设计2对特异性引物,建立了检测PPV的SYBR GreenⅠ实时PCR方法。该方法最小检出量为12个PPV拷贝。模板稀释度在108范围内呈良好的线性关系,与猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病病毒无交叉反应。应用本方法对PPV在体外感染细胞后的复制动态进行了观察,并绘制了病毒的体外增殖曲线。数据换算为每瓶中细胞内、外病毒拷贝数,结果显示细胞外病毒含量在接毒初始的36h逐渐下降,随后开始逐步增加;接毒后84h培养液中的病毒含量(1.739×1010拷贝)逐渐超过细胞内的病毒含量(1.321×1010拷贝);在接毒后108h培养液中病毒含量达到峰值(7.626×1010拷贝),随即病毒含量开始快速下降。细胞内病毒粒子在接毒后24h内为对数增长期,然后为缓慢增长期,至接种后72h达到复制峰值(1.425×1010拷贝),并维持至108h。与病毒复制动态变化相对应的细胞病变是从细胞聚集、开始形成空斑到约80%的细胞病变产生,108h之后随着细胞的大量死亡,细胞内、外病毒数量都开始急剧减少。; 顾帅陈陆常洪涛赵军杨霞王新卫周欣姚慧霞王川庆迪力拜尔.阿木提; 关键词：猪细小病毒 SYBR 病毒复制

10株猪圆环病毒2型(PCV2)河南株全基因组的克隆与序列分析被引量：5: 2010年; 为了解猪圆环病毒2型(PCV2)河南株的起源及遗传变异,从河南省不同临床表现的病猪中克隆了10株PCV2的全基因组,并对其进行了序列测定及分析。结果表明,河南株之间以及与中国其他地区PCV2流行株之间同源性均很高;河南株均处于欧洲分支中,提示PCV2河南株可能起源于欧洲株;河南省不同年份的PCV2中确实存在一定的基因差异,但PCV2全基因组从总体上来说遗传进化相对稳定;河南省猪群中与PCV相关的疾病不是由PCV2变异毒株引起的。; 陈陆彭志锋杨霞陈圆圆王宏魁孙彦婷郑鹿平王川庆; 关键词：猪圆环病毒2型全基因组克隆

猪圆环病毒复合PCR检测方法的建立及应用被引量：10: 2009年; 根据GenBank中PCV2和PCV1的基因组序列设计3条引物,并建立了检测PCV2的复合PCR方法。用该方法对河南省7个地市45个猪场的156份样品进行了检测,检出阳性病料98份,阳性率63%;阳性猪场38个,阳性率84%,表明该方法特异性及敏感性高,可用于临床诊断。; 王宏魁彭志锋孙彦婷徐雪刘春生刘慧敏王川庆; 关键词：猪圆环病毒2型复合PCR

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国家科技支撑计划(2006BAK02A213)