国家高技术研究发展计划(2005AA218030)
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 相关作者：戴青周东霞褚嘉祐黄小琴蒋国润更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 层析技术纯化核酸疫苗被引量：4
- 2007年
- 目的利用层析技术制备高纯度的核酸疫苗。方法用层析技术中的凝胶过滤、亲和、离子交换层析3种方法，依次对核酸疫苗进行纯化，并检测其纯度。结果连续使用3种层析方法获得的DNA达到了理想的分离效果，琼脂糖凝胶电泳未检出RNA，A260与A280的比值介于1．80～2．00之间，其中环状DNA达90％以上。经离子交换层析后的内毒素含量小于10EU／mg DNA，宿主DNA残留量小于0．002μg/μg DNA。结论纯化的核酸疫苗均符合国家标准，为制备核酸疫苗奠定了基础。
- 蒋国润周东霞孙明王玺戴青黄小琴褚嘉祐
- 关键词：核酸疫苗纯化
- HIV-1C亚型调控蛋白Nef在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2006年
- 目的表达人免疫缺陷病毒1型C亚型调控蛋白Nef,为研制HIV疫苗寻找新的途径。方法通过PCR扩增,获得HIV-1C亚型Nef基因片段,并将其克隆到原核表达载体pGEX-5X-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后,以SDS-PAGE和Westernblot分析表达产物。结果表达产物是相对分子质量为50000的GST融合蛋白,且能与p27单克隆抗体发生特异性反应。结论重组Nef蛋白在大肠杆菌中得到了有效表达。
- 戴青孙明周东霞蒋国润黄小琴褚嘉祐
- 关键词：NEF蛋白原核表达
- HIV-1C亚型nef基因构建的DNA质粒诱导小鼠免疫反应的研究被引量：1
- 2006年
- 目的构建表达中国流行株HIV-1C亚型调控nef基因的重组质粒pVAX-nef,并免疫BALB/c小鼠,观察其免疫效果,为探索新型HIV DNA疫苗提供数据。方法利用分子生物学技术,将nef基因克隆到pVAX,并在体外进行表达与鉴定。以纯化的Nef蛋白作为包被抗原,用ELISA检测其体液免疫反应,用ELISPOT检测其细胞免疫反应。结果重组质粒pVAX-nef成功构建。接种小鼠后2周,ELISPOT结果显示产生了针对HIV特异的CD4和CD8细胞抗原表位的免疫应答,且与免疫剂量存在一定的正相关性。ELISA实验诱导产生了抗HIV-1特异性抗体,其中40μg免疫组诱导的抗体水平最高。结论重组质粒pVAX-nef免疫小鼠后可有效地诱导机体产生细胞免疫和体液免疫反应。
- 周东霞孙明蒋国润戴青王玺黄小琴褚嘉祐
- 关键词：DNA疫苗免疫反应
