河北省自然科学基金(C2013407106)
- 作品数：2 被引量：7H指数：1
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- 犬组织相容复合物Ⅰ类分子的真核表达和细胞膜呈递
- 2018年
- 为进一步研究主要组织相容性复合体Ⅰ类分子（major histocompatibility complexclass Ⅰ，MHCⅠ）的作用机制，提高其抗原呈递效率，通过基因重组技术获得犬DLA-12基因，插入pcDNA3真核表达载体，成功构建了重组质粒pcDNA3-DLA-12。用重组质粒脂质体法转染FK81细胞，G418筛选稳定转染细胞，获得表达MHCI克隆细胞。Western blot检测可见43000左右的蛋白特异反应带，与目的蛋白大小相当。流式细胞仪分析表明，超表达DLA-12增加了MHCⅠ的细胞膜呈递。
- 贺英陈娟潘素敏倪静曹旺斌杨宗泽史秋梅
- 关键词：真核表达
- 犬细小病毒结构蛋白VP2基因的克隆和在毕赤酵母中表达被引量：7
- 2013年
- 表达犬细小病毒VP2蛋白(CPV-VP2),用于重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,并为犬细小病毒病的诊断奠定基础。采用PCR方法对CPV-VP2基因进行扩增,将CPV-VP2基因克隆到毕赤酵母分泌表达载体pPICZAA中,构建真核重组表达载体pPICZAA-VP2,将该重组质粒线性化后,转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)X-33中,甲醇诱导表达CPV-VP2,SDS-PAGE和Western-blotting鉴定表达蛋白。结果,成功扩增了CPV-VP2基因,构建了真核重组表达载体pPICZAA-VP2,在毕赤酵母菌中表达出约68 000蛋白。Western-blotting鉴定表明,表达蛋白为目的蛋白VP2。表达菌株扩大表达体系于培养基中培养,上清液用70%过硫酸铵4℃沉淀浓缩,采用His选择镍-亲和层析柱分离纯化获得重组的酵母表达的带组氨酸标签的VP2蛋白,表达量约3mg/L。结果表明,在毕赤酵母中成功地表达了CPV-VP2蛋白,且能被犬细小病毒VP2单克隆抗体特异识别。
- 贺英史秋梅潘素敏张艳英邵欣华
- 关键词：毕赤酵母真核表达
