国家高技术研究发展计划(2007AA092422)
- 作品数：4 被引量：11H指数：1
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- 重组福安泰-03融合蛋白表达条件的优化及其生物学活性检测
- 2012年
- 福安泰-03(FAT-03)是从赤魟组织中分离得到,具有强抗血管生成活性的蛋白。本研究通过DNA重组技术获得了重组福安泰-03(rFAT-03)融合蛋白,运用响应面试验设计法优化表达条件,采用GST亲和柱分离纯化表达蛋白,比较分析不同培养时间、诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间对可溶性融合蛋白表达量的影响。结果表明,当培养时间为6.13h、诱导温度为19.71℃、诱导剂(IPTG)浓度为0.36mmol/L、诱导时间为13.60h条件下可获得较好的表达效果,可溶性目的蛋白GST-rFAT-03的得率为7.57mg/L。对获得的rFAT-03生物活性检测显示,rFAT-03能明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成,且其效果与剂量相关。为后续对该蛋白的分离纯化和生物学功能研究奠定了基础。
- 张永平马润娣于立坚苏伟明廖铭能黄来珍于廷曦
- 关键词：生物活性
- 福安肽-03的分离纯化及其一级结构解析
- 2008年
- 通过盐析、离子交换、凝胶过滤和疏水层析等分离纯化,同步进行抗血管生成和抗肿瘤生长检测,从赤魟(Dasyatis akajei)组织获得强抗血管生成成分福安肽-03(Fuantai-03,FAT-03)的纯品(纯度>95%);使用Edman降解法测定FAT-03 N-末端氨基酸组成和序列,RACE系统技术解析FAT-03的一级结构。结果表明:FAT-03明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成和BALB/c裸小鼠Lewis肺癌的生长及肝转移,且其效果与剂量相关。FAT-03分子的一级结构即其氨基酸组成和序列已被确定。
- 张永平马润娣于立坚苏伟明廖铭能黄来珍张霄瑜于廷曦
- 关键词：分离纯化
- 重组福安泰-03抑制人脐静脉血管内皮细胞的迁移和增殖被引量：1
- 2010年
- 研究重组福安泰-03(recombinant Fuantai-03,rFAT-03)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)迁移和增殖的影响.聚碳酸酯膜小室趋化运动模型(transwell model)检测rFAT-03对HUVECs迁移能力的影响;MTT法检测rFAT-03对HUVECs和多种人癌细胞生长的影响;荧光显微镜观察rFAT-03作用下HUVECs的形态变化;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(annexin V-fluorescein isothiocyanate,annexinV-FITC)双染检测rFAT-03对HUVECs早期凋亡的影响;流式细胞术分析rFAT-03对HUVECs周期及凋亡的影响;Western印迹检查rFAT-03对HUVECs血管内皮细胞生长因子(VEGF)、Bax和Bcl-2表达的影响.结果显示,rFAT-03明显抑制HUVECs细胞的迁移和增殖,其抑制效果与剂量和作用时间相关.0.20mg/mL恩度(endostar),0.10、0.20mg/mLrFAT-03作用HUVECs24h,对细胞迁移的抑制率分别为32.0%、32.6%、57.1%(P<0.01).0.20mg/mL恩度,0.05、0.10、0.20mg/mLrFAT-03作用HUVECs72h,其对细胞生长的抑制率分别为40.9%、63.7%、69.3%、87.0%.但rFAT-03对多种人癌细胞株的生长却无明显影响.rFAT-03处理HUVECs24h,细胞的早期凋亡率增加(P<0.05).rFAT-03阻滞HUVECs于G0/G1期,并呈现典型的凋亡峰.终浓度为0.05、0.10、0.20mg/mLrFAT-03作用于HUVECs24h,G0/G1期细胞指数分别为63.4%、67.5%和75.7%(对照组为62.1%),凋亡指数分别为4.2%、8.5%和10.3%.rFAT-03下调HUVECs的VEGF和抑调亡基因Bcl-2的表达,上调促凋亡基因Bax的表达,其效果与剂量相关.结果提示,rFAT-03明显抑制HUVECs细胞的迁移和增殖,诱导其凋亡,它的这些作用与其下调VEGF、Bcl-2表达,上调Bax表达密切相关.
- 黄来珍马润娣于立坚张永平苏伟明廖铭能于廷曦
- 关键词：人脐静脉内皮细胞细胞周期血管内皮细胞生长因子
- 福安泰-03对肿瘤血管生成的抑制作用被引量：10
- 2008年
- 目的研究从赤魟组织中分离到的福安泰-03(Fuan-tai-03,FAT-03)对肿瘤血管生成的影响。方法鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)法检测FAT-03对人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)诱导的CAM血管生成的影响;免疫组化法检查FAT-03对裸小鼠Lewis肺癌组织微血管密度(MVD)和血管生成因子表达的影响。结果FAT-03抑制CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成,当其用量为20、40、80、160μg/胚/d×5时,其抑制率分别为22.3%、34.3%、43.3%、46.2%。FAT-03降低小鼠Lewis肺癌组织的MVD,FAT-03组平均微血管数为9.1±1.5(对照组为18.2±3.2,P<0.05)。免疫组化检测结果显示,FAT-03明显下调小鼠Lewis肺癌组织血管内皮细胞生长因子(VEGF),碱性成纤维细胞因子(bFGF)和血小板衍生生长因子(PDGF)的表达。结论FAT-03有抗肿瘤血管生成作用,其作用与它的下调VEGF、bFGF和PDGF的表达密切相关。
- 于立坚马润娣廖铭能苏伟明黄来珍于廷曦
- 关键词：肿瘤血管生成
