江苏省“科教兴卫工程”医学重点人才基金(RC2007050)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 相关作者：周国平任伟王怡陆超徐华国更多>>
- 相关机构：江苏省人民医院更多>>
- 发文基金：江苏省“科教兴卫工程”医学重点人才基金国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- E2F1基因真核表达载体的构建及其对CD2AP启动子的影响
- 2011年
- 目的构建E2F1基因真核表达质粒,并初步探讨E2F1对CD2相关蛋白(CD2AP)启动子的作用。方法 RT-PCR扩增E2F1基因,构建含E2F1基因的重组真核表达质粒,重组质粒转染人胚肾HEK-293细胞。Western blot检测E2F1蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测E2F1过表达后人CD2AP启动子的活性。结果核酸序列分析及Western blot结果证实,成功构建含E2F1基因的重组真核表达质粒;过表达E2F1能增强CD2AP启动子的活性。结论 E2F1编码基因在HEK-293细胞中获得正确表达,且E2F1蛋白可促进人CD2AP启动子的转录活性。
- 邹黎金蕊任伟王怡朱亮华李悦周国平
- 关键词：E2F1CD2相关蛋白肾小球硬化
- 人干扰素调节因子3基因启动子的初步鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的克隆并鉴定人干扰素调节因子3（IRF3）基因启动子，为进一步研究其转录调控机制奠定基础。方法用BLAST分析软件进行序列比较和同源分析不同种系IRF3启动子序列，以人类基因组DNA为模板，通过PCR定向克隆和酶切亚克隆策略，构建了覆盖IRF3基因5’侧翼区转录起始位点上游1kb区域的一系列IRF3启动子虫荧光素酶报告基因重组体并瞬时转染宫颈癌HeLa细胞，用虫荧光素酶检测报告基因启动子的活性。结果在人、小鼠的IRF3推断的启动子区域进行同源比较发现，推断的E2F和GATA-1高度进化保守；启动子活性分析表明，IRF3启动子区域定位于主要转录起始位点区域前111～167bp的区域内。采用转录因子结合位点预测分析软件分析表明，该区域内存在E2F转录因子结合位点。结论-167～111bp区存在IRF3启动子的核心调控元件，转录因子E2F可能参与IRF3的转录调控。
- 徐华国任伟陆超周国平
- 关键词：转录调控
- 干扰素调节因子3第二内含子中新启动子在人胚肾AD-293细胞中的功能特征
- 2011年
- 目的构建包含人干扰素调节因子3(IRF-3)基因第二内含子中新启动子的质粒,研究其功能特征。方法以人类基因组DNA为模板,PCR定向克隆和酶切亚克隆构建IRF-3基因第二内含子内新转录起始位点上游的新启动子基因重组体,并瞬时转染人胚肾AD-293细胞。荧光素酶检测报告基因启动子的活性,计算相对活性单位(RLU)。结果成功构建含有新启动子区的质粒,与pGL3-Basic组相比,新启动子活性明显增强,并定位于新转录起始位点前-317～-110bp,且该区域内存在环腺苷酸应答元件结合蛋白(CREB)和GATA等转录因子结合位点。结论 IRF-3第二内含子内新转录起始位点上游具启动子活性;在-317～-110bp区域存在必需调控元件,并且CREB和GATA等转录因子可能参与其转录调控。
- 王怡任伟金蕊徐华国邹黎周国平
- 关键词：干扰素调节因子3启动子转录调控
- 干扰素调节因子3的激活被引量：1
- 2010年
- 干扰素调节因子3(interferon regulatory factor-3,IRF-3)是调节Ⅰ型干扰素基因表达的关键转录因子,它的活化将影响IFN基因的表达。IRF-3的磷酸化受多条信号转导通路及相关分子的调控。在有关的调控中,RIG-I/MDA-5-MAVS与IRF-3的活化关系较为密切,RIG-I/MDA-5识别病原相关分子模式(PAMP),经中间蛋白质MAVS激活下游激酶复合体TBK1/IKKε,通过不同机制活化转录因子IRF-3。在此通路中,有TRAF3、NEMO、TRADD等分子参与,最近有研究发现,TRAF5、STING、WDR5亦参与调控,在调节IRF-3的活化过程中发挥重要作用。通过对IRF-3激活的研究,将有助于阐明病毒诱导机体产生先天性免疫和特异性免疫的分子机制。
- 王怡周国平
- 关键词：干扰素调节因子3信号通路
- CD2相关蛋白启动子区域保守序列的功能分析被引量：1
- 2008年
- 目的在不同物种间通过保守序列分析和荧光素酶功能测定的方法寻找发现CD2相关蛋白（CD2AP）基因启动子重要的调节成分。方法用BLAST分析软件进行序列比较和同源分析不同种系CD2AP启动子序列，构建人CD2AP启动子不同的缺失变异载体，转染来自不同种类的细胞，测定荧光素酶活性，并用全反式维甲酸处理，观测其对CD2AP启动子活性的影响。结果在人、牛、猪的CD2AP推断的启动子区域进行同源比较发现推断的Sp1（specific protein1）和下游启动子成分高度进化保守，进行性缺失荧光素酶分析表明在人胚肾细胞株HEK-293、非洲绿猴肾细胞株Vero、仓鼠肾细胞株BHK-21中人CD2AP启动子活性有相似的形式，ATG上游500bp有基本的启动子活性，再向上100bp启动子活性增加10倍，两个推断的Sp1位点位于该100bp区域内，全反式维甲酸可下调CD2AP启动子的活性。结论我们初步发现推断的Sp1位点和下游启动子成分在CD2AP启动子调控中起重要作用。
- 苏鑫铭周国平任伟陆超陈吉庆吴升华吴元俊
- 关键词：CD2相关蛋白启动子肾病综合征肾小球硬化
