国家自然科学基金(39770231)
- 作品数：9 被引量：8H指数：2
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- 相关机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院中国科学院上海生命科学研究院更多>>
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- 抗癌胚抗原单链抗体基因与Mn-SOD基因的融合及在昆虫细胞中的表达
- 2002年
- 将抗癌胚抗原单链抗体基因与锰 超氧化物歧化酶基因融合 (ScFv Mn SOD )插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTb中 ,经大肠杆菌DH1 0Bac体内转座 ,产生重组杆状病毒pBacHTb Mn SOD ScFv。将其转染粉纹夜蛾Tn 5B1 4细胞 ,经扩增后在细胞内进行表达。SDS PAGE分析结果表明 ,融合基因得到高效表达 ,其表达产物相对分子质量为 40 0 0 0单体和 1 60 0 0 0左右的四聚体。Western印迹分析结果 ,以 6×His单克隆抗体为一抗进行蛋白印迹在相对分子质量 40 0 0 0单体和 1 60 0 0 0四聚体处可见表达条带 ,放射免疫分析表明重组杆状病毒表达ScFv Mn SOD融合蛋白能与CEA有较高的结合力 ,并且此融合蛋白具有特异SOD酶活性 ,酶比活可达 32 6 5u/mg。
- 杨卫东李彪朱承谟吴祥甫
- 关键词：癌胚抗原单链抗体肿瘤免疫学
- 抗癌胚抗原单链抗体与核心链霉亲和素融合蛋白在荷瘤裸鼠体内的预定位显像被引量：3
- 2002年
- 目的 研究1 53Sm 生物素和抗癌胚抗原单链抗体与核心链霉亲和素融合蛋白 (CEAScFv core streptavidin)在荷人结直肠癌裸鼠体内的两步法预定位显像和体内分布。方法 对 2 3只荷人结直肠癌裸鼠腹腔注射CEAScFv core streptavidin进行预定位 ,2 4h后腹腔注射1 53Sm 生物素 ,其中2 0只于 1、4、8和 2 4h进行体内分布研究 ,余 3只于 8和 2 4h进行定位显像。结果 在荷人结直肠癌裸鼠腹腔注射CEAScFv core streptavidin预定位后 2 4h ,注射1 53Sm 生物素后 1h ,肿瘤 血比值为 0 .4 9,4和 8h达 1.2 1和 1.5 6 ,2 4h达最高 ,为 3.0 9。裸鼠定位显像示 ,8h肿瘤部位放射性明显浓聚 ,2 4h本底明显降低 ,肿瘤呈放射性“热”区。结论 1 53Sm 生物素和CEAScFv core streptavidin预定位显像能提高靶 非靶比值 ,缩短显像时间 ,改善图像质量。
- 杨卫东李彪朱承谟江旭峰冯国伟吴祥甫
- 关键词：结肠直肠肿瘤放射免疫检测动物实验
- CEA微型抗体载体的构建及在大肠杆菌中的高效表达被引量：1
- 2000年
- 目的制备适合放免显像的抗癌胚抗原微型抗体。 方法在已获得的抗癌胚抗原重链可变区 (VH)及轻链可变区 (VL)基因的基础上将重链可变区 (VH)与轻链可变区 (VL)基因直接连接制成微型抗体基因 ,并在大肠杆菌进行表达。 结果大肠杆菌高效表达了微型抗体C端 6×His的融合蛋白 ,表达量达菌体总蛋白的 15 % ,SDS -PAGE和Western印迹显示表达物分子量为 2 6kd与基因编码蛋白的理论推算值相符 ,RIA表明表达物与CEA特异性结合。
- 杨卫东李彪朱承谟廖文韬吴祥甫
- CEA单链抗体表达质粒构建及产物纯化被引量：2
- 2000年
- 目的单链抗体基因的构建并在大肠杆菌中进行表达以及表达产物的纯化研究。 方法采用重组PCR技术将已获得的抗癌胚抗原 (CEA)鼠源单克隆抗体E7B10 重、轻链可变区基因 (VH、Vk)经 (Gly4 Ser) 3 编码的寡核苷酸拼接成单链抗体基因 ,并在大肠杆菌中表达了单链抗体C端融合 6×His蛋白 ,表达产物经Ni2 +-IDASepharose 6B亲和柱纯化。 结果表达的融合蛋白在胞内主要以可溶性存在 ,其表达量达到菌体总蛋白的 10 % ,SDS -PAGE和Western印迹图谱显示表达产物分子量为 2 7kd ,与其基因编码蛋白的理论推算值相符。表达产物经Ni2 +-IDASepharose 6B亲和柱纯化 ,纯度可达 90 %以上 ,得率为 0 .8mg/ 10 0ml。 结论纯化后的融合蛋白具有CEA结合活力 ,其亲和常数为 5 .4× 10 7/M(抗体结合浓度 ) ,略低于其亲本单抗E7B10 2 .7× 10 9/M。
- 李彪朱承谟吴祥甫
- 关键词：单链抗体CEA质粒放射免疫显像
- 抗癌胚抗原嵌合重链抗体与核心链霉亲和素融合基因在昆虫细胞中的表达
- 2001年
- 将抗癌胚抗原嵌合重链抗体与核心链霉亲和素融合基因插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTa中 ,经大肠杆菌DH10Bac体内转座 ,产生重组杆状病毒pBacHTa VH Cr3 CS。将其转染粉纹夜蛾Tn 5B1 4细胞 ,经扩增后在细胞内进行表达。SDS PAGE分析结果表明 ,在粉纹夜蛾Tn 5B1 4细胞中都表达产生一条特异性蛋白质 ,其相对分子质量约为 75 0 0 0左右 ,以Westernblot分析表明 ,该特异条带即为VH Cr3 CS蛋白。SDS PAGE和Westernblot分析结果表明 ,以HRP标记的生物素作为抗体进行蛋白质印迹在相对分子质量 75 0 0 0处可见表达条带 ,表明融合蛋白能特异性的与生物素结合 ,RIA表明重组杆状病毒表达产生的VH Cr3 CS蛋白能与CEA有较高的结合力。
- 杨卫东李彪朱承谟杨冠珍吴祥甫
- 关键词：癌胚抗原昆虫杆状病毒
- 抗癌胚抗原鼠人嵌合抗体重、轻链基因在昆虫细胞中的表达被引量：1
- 1998年
- 本文采用杆状病毒表达系统在昆虫细胞(Sf_9,秋粘虫细胞)中表达了抗癌胚抗原(CEA)鼠-人嵌合抗体重、轻链基因.将鼠源性单抗杂交瘤细胞中已克隆到的重、轻链可变区(V_H、Vk)基因分别与人免疫球蛋白恒定区基因Cr_3、Ck相拼接,构建鼠人嵌合抗体基因.含嵌合抗体基因的转移载体与线性化病毒DNA共转染Sf_9细胞,并通过点杂交、PCR扩增和Southern blot分析获得重组病毒.Western blot分析表明以重组病毒感染的Sf_9细胞分别表达了嵌合重链和轻链,放射免疫分析法(RIA)和间接ELISA测定的结果表明嵌合重、轻链基因表达产物具有与CEA结合的能力.
- 李彪朱承谟吴祥甫
- 关键词：癌胚抗原抗体嵌合杆状病毒表达
- 核心链霉亲和素基因的克隆及表达
- 2003年
- 文章采用PCR方法 ,以链霉亲和素菌 (Streptmycesavidinii)基因组DNA为模板 ,克隆出 384bp的DNA片段并以BamHI及XhoI位点装入PSK载体 ,经测序确证为核心链霉亲和素基因 (core strepavidin )。将该基因重组到质粒pET 2 4a ( + ) ,构建重组表达质粒pET 2 4a CS。转化大肠杆菌BL2 1,经IPTG诱导后得到高效表达。SDS PAGE图谱显示表达产物相对分子质量为15 0 0 0 ,与其基因编码蛋白的理论值相符。HRP标记的生物素作为抗体进行Westernblot,结果在 15 0 0 0处可见特异性条带 。
- 李彪杨卫东朱承谟吴祥甫
- 关键词：克隆
- 抗癌胚抗原微型抗体基因在昆虫细胞中的表达
- 2001年
- 目的获得生物活性更高的癌胚抗原 (CEA)微型抗体用于放免显像。 方法将抗癌胚抗原微型抗体基因插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTb中 ,经大肠杆菌DH10Bac体内转座 ,产生重组杆状病毒BacHT -VH-L ,将其转染粉纹夜蛾 (Tn - 5B1- 4)细胞 ,经扩增后在细胞内进行表达。 结果SDS -PAGE分析结果表明 ,在Tn- 5B1- 4细胞中表达产生一条特异性蛋白质 ,其分子量为 2 6kd左右 ;以Westernblot分析表明 ,该特异条带即为VH-L蛋白。RIA表明重组杆状病毒表达产生的VH -L蛋白能特异性的结合CEA ,较大肠杆菌表达物活性更高。结论昆虫细胞表达可制备生物活性更高的癌胚抗原微型抗体。
- 杨卫东李彪朱承谟贺华君杨冠珍吴祥甫
- 关键词：癌胚抗原昆虫杆状病毒基因表达肿瘤
- 抗癌胚抗原单链抗体与核心链霉亲和素基因的融合及在大肠杆菌的表达被引量：1
- 2000年
- 制备抗癌胚抗原 (CEA )单克隆抗体的单链抗体 ,在保留抗原抗体结合位点的同时有效降低抗体的分子量不仅可减少人抗鼠抗体反应 (HAMA ) ,而且适合放射免疫显像。为纯化及核素标记抗体 ,将单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合并在大肠杆菌得到高效表达 ,表达量占菌体总蛋白的 2 4%。SDS PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达产物分子量为 41kD ,与其基因编码蛋白质的理论推算值相符。表明融合蛋白能特异性地与生物素结合 ,RIA表明表达产物具有结合其特异性抗原CEA的能力 ,以HRP标记的生物素作为抗体进行蛋白质印迹在 41kD处可见表达条带。说明表达物不仅能与生物素结合且能特异性地与CEA结合。
- 杨卫东李彪朱承谟杨冠珍吴祥甫
- 关键词：癌胚抗原单链抗体基因表达
