国家科技支撑计划(2012BAD12B07-4)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 相关作者：刘晓明邓光存李武曾瑾包少文更多>>
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- 产肠毒素大肠埃希菌STa-K99融合蛋白重组腺病毒载体的构建及表达被引量：2
- 2013年
- 为构建产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)STa-K99融合蛋白重组腺病毒载体Ad STa-K99,通过PCR技术分别克隆了STa及K99基因,并与腺病毒穿梭质粒连接构建了穿梭质粒pAd5 STa-K99,将pAd5STa-K99和骨架质粒(含GFP基因)分别用PacⅠ酶切线性化,利用LipofectamineTM LTX&PLUS共转染293细胞进行同源重组包装重组腺病毒,通过PCR及Western blot对重组腺病毒进行鉴定。结果显示,重组腺病毒Ad5STa-K99构建正确并表达融合蛋白,且表达的融合蛋白能够被抗体所识别,为研制由ETEC引起的新生动物腹泻重组腺病毒载体疫苗奠定了基础。
- 邓光存包少文杨继辉曾瑾李武刘晓明
- 关键词：黏附素重组腺病毒载体
- 结核分枝杆菌CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原真核共表达载体的构建与表达被引量：3
- 2014年
- CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B是结核分枝杆菌的主要免疫优势抗原。为了构建一种可同时表达这4种抗原的真核多基因共表达载体pcDNA-CFP10-ESAT6-Ag85A-Ag85B(pcDNA-CEAB),并利用HEK 293T细胞对其体外表达进行检测。采用酶切、连接的方法,将CFP10和ESAT6编码基因以(Gly4Ser)3蛋白Linker连接,插入至质粒pcDNA3.1(+)多克隆位点CMV启动子与加尾信号BGH pA之间,使两者融合表达,将Ag85A和Ag85B编码基因以内部核糖体进入位点(Internal ribosome entry site,IRES)序列连接,并赋予RSV启动子和加尾信号BGH pA,使两者在RSV启动子作用下独立表达。重组质粒经酶切及测序验证后转染至HEK 293T细胞中进行体外表达实验,48 h后提取总蛋白,利用CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B特异性抗体进行Western blotting检测。结果显示多基因共表达载体pcDNA-CEAB在真核细胞HEK 293T中得到表达,且CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原能被相应的特异性抗体所识别,表明质粒pcDNA-CEAB构建正确,这为进一步研究其免疫原性和免疫保护效果奠定了基础。
- 李武邓光存刘晓明王玉炯
- 关键词：结核分枝杆菌蛋白免疫印迹
- 表达产肠毒素性大肠埃希菌STa-K99融合蛋白重组腺病毒的免疫学特性研究
- 2014年
- 为研究表达产肠毒素性大肠埃希菌(ETEC)耐热性肠毒素STa与粘附素K99融合蛋白重组腺病毒r Ad.STa-K99的免疫学特性,本实验将r Ad.STa-K99经肌肉注射免疫小鼠,采用ELISA法分别检测了特异性Ig G、SIg A、脾脏淋巴细胞增殖活性水平及CD4+、CD8+T淋巴细胞分型比值;并通过攻毒保护试验对其免疫效果进行评价。结果表明,免疫后小鼠特异性Ig G、SIg A及脾脏淋巴细胞增殖活性水平显著升高;CD4+/CD8+值显著增大;动物攻毒保护率达到70%。结果表明r Ad.STa-K99可以刺激小鼠机体产生较高水平的体液免疫、特异性细胞免疫和肠道粘膜免疫反应,并对小鼠提供有效保护。本实验为研制预防由ETEC引起的新生动物腹泻重组腺病毒疫苗奠定了基础。
- 包少文庄佩佩石娟杨佳丽曾瑾李武刘晓明邓光存
- 关键词：腺病毒载体黏附素
