国家自然科学基金(39770242)
- 作品数：8 被引量：24H指数：4
- 相关作者：黄倩徐萍刘文文王丰陈霞芳更多>>
- 相关机构：上海市第一人民医院上海第二医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 培养的胚胎视网膜神经细胞Ca^(2+)分布与Ca^(2+)通道特征被引量：1
- 2002年
- 目的 检测分析培养的胚胎早期视网膜神经细胞游离钙 (Ca2 + )分布与钙 (Ca2 + )通道特征。 方法 体外培养 11～ 15周胎儿视网膜神经细胞 ,在含 Ca2 +与不含 Ca2 +的 Hepes缓冲液中与钙荧光指示剂 Fluo3孵育染色 ,同时加入或不加入异博定、佩尔地平或地塞米松 ,共聚焦显微镜观察记录游离 Ca2 +分布 ,以及受不同浓度 K+刺激后 Ca2 +通道开放与 Ca2 +转移情况。 结果 培养的 11～ 15周胎儿视网膜神经元及神经胶质细胞受 K+ 刺激后均出现明显的 Ca2 + 转移与再分布 ,在缺乏细胞外 Ca2 + 的情况下 ,细胞浆内钙库仍可迅速释放 Ca2 +并转移至细胞核内。异博定、佩尔地平及地塞米松能够抑制细胞外 Ca2 +进入视网膜神经细胞内。 结论 胚胎早期视网膜神经元及神经胶质细胞存在 L型 Ca2 + 通道 。
- 刘文文徐萍郭强苏刘军顾青黄倩
- 关键词：胚胎视网膜神经元钙通道神经胶质细胞
- 14株肿瘤细胞P53基因突变的检测被引量：6
- 2008年
- 目的：检测14株肿瘤细胞P53基因的突变情况。方法：根据P53基因5～8外显子之间的内含子序列设计引物,分别对人肺癌、脑胶质瘤、肝癌、胃癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、脉络膜恶性黑素瘤、视网膜成细胞瘤等9种肿瘤14株细胞的P53基因5、6、7、8的外显子进行PCR扩增反应。琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物;DNA测序,并与正常的DNA序列比较;抽提肿瘤细胞蛋白进行Western blotting检测P53蛋白的表达。结果：14株肿瘤细胞P53基因热变区5、6、7、8外显子的扩增产物经电泳鉴定与预期相同。DNA测序结果表明,14株肿瘤细胞中8株存在P53基因5～8外显子的突变,其中肺癌细胞H1299、肝癌细胞Hep3B、肝癌细胞SMMC7721、脉络膜恶性黑素瘤细胞OCM-1检测到以前未报道过的突变;突变主要发生在外显子的编码序列,多数为单个碱基替换导致的错义突变,也有部分表现为同义突变;2株正常细胞未检测到突变。Western blotting检测显示,有基因突变的8株肿瘤细胞中仅6株有P53蛋白表达;所有P53基因未突变的肿瘤细胞株和正常细胞株均未检测到P53蛋白。结论：检测的14株肿瘤细胞中有8株细胞P53基因热变区存在突变,其中4株检测到以前未报道过的突变;2株正常细胞未发现P53基因突变。
- 马家烈韦芳李惠明田毓华陈霞芳王丰黄倩
- 关键词：肿瘤细胞P53基因基因突变
- 人视网膜发育分化过程中基质金属蛋白酶9表达的变化
- 2008年
- 目的观察人视网膜发育和分化过程中基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达水平与细胞分布特点,探讨其在人视网膜发育和分化过程中的可能作用。方法胚胎发育早期、中晚期及成人视网膜石蜡切片,抗MMP-9免疫组织化学染色,观察MMP-9表达水平和分布的变化。结果胚胎发育早期的视网膜仅在外成神经细胞层的外侧可见弱阳性细胞;胚胎发育中期外成神经细胞层的外侧,即将来要发育成盘膜处出现明显的特异性染色,而其他细胞染色仍然较弱;成人视网膜的外核层出现显著的特异性染色细胞,胞质明显着色,胞体轮廓清晰,并可观察到锥体的结构以及突触的特异染色,判断这些细胞主要是光感受器细胞中的视锥细胞。结论MMP-9在视网膜中的表达与视网膜的成熟和细胞分化关系密切,在光感受器中的视锥细胞高水平表达,提示MMP-9可能参与视觉信号的处理。
- 李惠明裘玮王丰马家烈易苗英王煜非黄倩
- 关键词：视网膜基质金属蛋白酶9细胞分布
- 生长因子对培养的胚胎视网膜神经细胞增殖与凋亡的影响被引量：1
- 2003年
- 目的 探讨表皮生长因子 ( epidermal growth factor,EGF)、成纤维细胞生长因子 ( fibroblastgrowth factor,FGF)及胎牛血清对体外培养的人胚胎视网膜神经细胞生长、增殖、分化和凋亡等的影响及可能的机制。 方法 采用胎牛血清培养人胚胎视网膜神经细胞 ,加入或不加入 EGF、FGF。通过神经元特异稀醇化酶 ( neuron specific enolase,NSE)、视网膜神经节细胞特异的 Thy1.1抗体、胶质纤维酸性蛋白( glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫组织化学染色、倒置显微镜及扫描电镜观察鉴定细胞成分 ;细胞生长曲线及溴脱氧尿苷 ( bromodeoxyuridine,Brd U)掺入测定细胞增殖率 ;原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸切口末端标记 ( Tdt- mediated d UTP nick end labelling,TUNEL)检测细胞凋亡 ;c- fos、c- jun及 bcl- 2、bax免疫组织化学染色判断转录调控因子及细胞凋亡调控因子表达水平 ,计数阳性细胞并进一步作统计分析。 结果 经过 EGF、FGF培养的人胚胎视网膜细胞总数增加 ,细胞倍增时间缩短 ,Brd U掺入率增加 ,凋亡细胞数减少 ,其中 NSE、Thy1.1阳性细胞数明显增加。同时 ,c- fos、c- jun及 bcl- 2阳性细胞数也增加。 结论 生长因子 EGF、FGF可通过上调转录因子 c- fos、c- jun及细胞凋?
- 刘文文徐萍陈霞芳黄倩
- 关键词：细胞培养胚胎视网膜神经细胞细胞增殖免疫组织化学
- Expression patterns of the retinal development-related genes in the fetal and adult retina被引量：1
- 2007年
- 背景视网膜在把光变换成神经信号是重要的，但是很少为网膜的词法形成，发展和功能的区别对规章的基因必需品被知道。这研究试图调查 mRNA 表示模式并且细胞或 33 差别的 subcellular 分发在在 situ 杂交在人的 development.Methods 期间象早成年的舞台一样属于早、中间迟了的 embryogenesis 舞台的视网膜表示了基因并且即时荧光灯量的反向的抄写聚合酶链反应( FQ-RT-PCR )使用用 microarray 分析和 wer 外面被屏蔽的表示基因到试金 33 差别在人的网膜的发展期间， 17 基因是下面调整的， 6 是起来调整的并且留下 10 是相对未改变的。大多数在怀孕期在视网膜的所有层表示的基因上演，并且在充分发达的视网膜，检验的一些基因确实在象网膜的中心房间或光敏电阻器 cells.Conclusion 的外部片断那样的某些特定的房间和结构显示出更高的表达式水平基因表达式侧面在网膜的开发期间拥有时间、空间的分发特征，它能为那些基因的函数的进一步的研究提供试验性的证据。
- LI Hui-mingWANG FengQIU WeiLIU YanHUANG Qian
- 关键词：视网膜基因表达胎儿
- 胚胎与成人视网膜神经细胞培养被引量：4
- 2002年
- 目的 建立胚胎及成人视网膜神经细胞体外培养系统 ,为视网膜神经细胞的基础研究与药物开发提供实验模型。 方法 10～ 13周龄胎儿及 2 0～ 40岁成人视网膜神经层用不同的酶进行消化 ,分散的细胞接种于预先经过包被的细胞培养盘内 ,加入或不加入表皮生长因子 (epidermal growth factor,EGF)、成纤维细胞生长因子 (fibroblast growth factor,FGF)、脑源性神经营养因子 (brainderived neu-rotrophic factor,BDNF)、神经营养素 - 4(neurotrophic- 4,NT- 4)等培养。通过 Brd U掺入、免疫组织化学及免疫荧光等方法检测培养细胞增殖并辨别细胞成分。 结果 胚胎及成人视网膜细胞可在体外连续培养10 0及 180 d以上。加入 EGF、FGF、BDNF或 NT- 4可明显促进胚胎与成人视网膜神经元存活 ,胎儿视网膜细胞增殖。与对照组相比 ,处理组神经元或神经节细胞的百分率较高。 结论 胚胎及成人视网膜神经细胞培养技术为视网膜神经细胞基础研究及药物开发提供了一种十分有价值的手段 ,加入外源性的生长因子可促进培养的视网膜神经细胞存活、增殖与分化。
- 刘文文徐萍黄倩
- 关键词：视网膜细胞培养神经营养因子胚胎
- 神经营养因子和生长因子等对培养的成人视网膜神经细胞的影响被引量：7
- 2003年
- 目的 探讨成人视网膜神经细胞体外培养条件 ,脑源性神经营养因子 (BDNF)、神经营养素 (NT 4 )、表皮生长因子 (EGF)、成纤维细胞生长因子 (FGF)、诱导分化因子全反式视黄酸 (RA)等对成人视网膜神经细胞生长、增殖、凋亡的影响及调控机制。方法 胰蛋白酶消化结合机械吹打分离成人视网膜神经细胞 ,在培养基中加入或不加入BDNF、NT 4、EGF、FGF、RA。根据细胞形态、生长方式及免疫细胞化学特征确定细胞类型。比较各组中神经元的数目、转录调控因子c fos、c jun及细胞凋亡调控因子Bcl 2、Bax表达水平。结果 与对照组相比 ,BDNF、FGF处理组存活的神经元特异性烯醇酶、Thy1.1抗体和Bcl 2、c fos及c jun表达阳性细胞数也增多 (均P <0 0 1) ,培养的视网膜神经细胞在体外存活时间可长达 8个月 ;RA处理组c fos、c jun阳性细胞数较对照组增多 (均P <0 0 1) ;而NT 4、EGF处理组各项指标与对照组比较 ,差异无显著意义 (均P >0 0 5 )。结论 BDNF、FGF、RA能显著提高体外培养的成人视网膜神经细胞的存活 ,其机制可能涉及上调转录调控因子c fos、c jun及凋亡抑制因子Bcl 2的表达 ,或下调凋亡促进因子Bax的表达。但EGF、NT 4对体外培养的视网膜神经细胞存活状态无明显改善作用。
- 刘文文徐萍黄倩
- 关键词：脑源性神经营养因子神经营养素表皮生长因子成纤维细胞生长因子体外培养
- 视网膜下间隙移植经基因修饰的视网膜色素上皮细胞对大鼠光感受器变性及视功能的保护作用被引量：4
- 2004年
- 目的 以RCS大鼠作模型,研究经基因修饰的永生化视网膜色素上皮细胞(RPE)视网膜下移植对光感受器变性的保护作用。方法 在绿色荧光蛋白基因逆转录病毒感染的基础上,利用脂质体介导节状神经生长因子(CNTF)表达质粒转移,修饰成人RPE细胞系CRL-2302。将1×105个表达绿色荧光蛋白(GFP)或GFP及CNTF的RPE细胞移植到4～5周龄RCS大鼠右眼视网膜下间隙,左眼不移植或注射。PBS作为对照。术后2、4、6、8、10和12周作荧光显微镜、光镜、电镜及电生理检查。结果 荧光显微镜观察,术后1周移植的人RPE细胞在RCS大鼠视网膜下间隙已扩散到几乎整个眼底,但随时间延长移植的细胞逐渐减少,术后6周仅残留少量移植细胞。光镜及电镜观察显示移植眼保留的光感受器数量明显较对照眼多,凋亡细胞则较对照跟少。此外,移植眼宿主RPE细胞形态较正常,并可见吞噬小体。视网膜电图(ERG)检查结果表明部分移植眼视网膜功能明显较对照眼好。结论 经过基因修饰的RPE细胞移植可延缓RCS大鼠视网膜光感受器变性,为治疗视网膜变性提供了新的途径。(中华眼科杂志,2004,40:552-556)
- 黄倩吴继红王丰徐萍夏欣易静赵新峰
- 关键词：基因修饰视网膜色素上皮细胞
