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HPLC法同时测定甜叶菊中3种绿原酸类化合物被引量：9: 2014年; 建立了同时测定甜叶菊中绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸和4,5-二咖啡酰奎宁酸3种化合物的HPLC分析方法,并测定了3种化合物在根、茎、叶中的含量。色谱柱为Waters C18（4.6 mm×250mm,5μm）,流动相为0.2%醋酸（A）和甲醇（B）,流速：1 mL/min,检测波长：327 nm,柱温：40℃,洗脱条件为0~10 min 70%A;10~15 min 70%A-45%A;15~25 min 45%A,25~26 min 45%A-70%A;26~30 min 70%A。在此条件下,绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸和4,5-二咖啡酰奎宁酸的线性范围分别为9.50~285.00、9.25~277.50、9.75~292。50μg/mL且在此范围内线性关系良好（R2〉0.999）,加标回收率介于96.42%~101.18%。从乙醇体积分数、料液比和超声提取时间3因素优化绿原酸提取条件,最佳条件为70%乙醇在料液比1：25的条件下超声提取60 min。对甜叶菊根、茎、叶中上述3种化合物含量进行分析,结果显示,甜叶菊根、茎、叶中绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸和4,5-二咖啡酰奎宁酸的含量范围分别为0.59~7.56、2.43~23.92、1.12~21.21 mg/g。该方法准确度高,重复性好,可用于甜叶菊中3种绿原酸类化合物的同时测定。; 付晓尹忠平上官新晨陈继光郭春梅彭大勇; 关键词：高效液相色谱法甜叶菊绿原酸

牛至细胞悬浮培养合成多酚及黑曲霉诱导子的促进作用被引量：1: 2020年; 以牛至细胞悬浮培养合成多酚,通过超高效液相色谱-飞行时间质谱仪检测鉴定该细胞中的多酚类物质,并以外源黑曲霉诱导子促进细胞多酚的合成,研究诱导子质量浓度、添加时间及持续作用时间对细胞生长、细胞形态及多酚合成的影响。结果表明:牛至悬浮培养细胞所合成的多酚类物质主要有原儿茶酸-O-己糖苷、红景天苷、水杨酸-O-葡糖苷、迷迭香酸-3-O-葡糖苷、迷迭香酸、迷迭香酸甲酯6种,以迷迭香酸含量最高,是其中的标志性多酚物质;在细胞指数生长中期(第10天)添加50μg/mL黑曲霉诱导子,持续作用2d,对细胞的生长和形态基本上没有影响,但对细胞合成多酚具有很好的促进效果,迷迭香酸的含量和产量分别提高到对照组的3.25、3.33倍,迷迭香酸产量可达361.38mg/L,总多酚产量增长了1.90倍。研究结果可知,牛至细胞悬浮培养能合成多种多酚,黑曲霉诱导子的诱导能够显著提高该细胞中多酚含量,是提高以迷迭香酸为代表的多酚类化合物产量的有效手段。; 李燕平刘媛王小强沈倍韵周香菊赵文佳陈继光尹忠平; 关键词：多酚迷迭香酸

青钱柳叶总三萜刺激3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖消耗（英文）被引量：9: 2014年; 青钱柳为我国特有植物,以其叶制成的茶叶具有较好的降血糖效果。为了进一步研究其降糖作用,以超声辅助法提取青钱柳叶总三萜,经萃取、大孔树脂吸附、脱色等纯化后纯度达86.3%,其中熊果酸、齐墩果酸、山楂酸、科罗索酸和白桦脂酸的含量分别为19.35%、17.38%、7.53%、4.59%和1.42%。对于3T3-L1前脂肪细胞,纯化后的青钱柳叶总三萜(CPTT)在基础状态下对葡萄糖消耗没有明显的影响,但在同时添加10 nM胰岛素进行刺激时能显著提高葡萄糖消耗;对于成熟的脂肪细胞,无论是在基础状态下还是胰岛素刺激状态下,CPTT均能显著促进其葡萄糖消耗;对于由地塞米松诱导的胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞,CPTT能有效地改善其胰岛素敏感性,提高葡萄糖消耗,且呈剂量-效应关系,以25μg/mL的效果最佳。以上研究结果表明,CPTT能促进脂肪细胞的葡萄糖消耗,在食品和药品领域有很好的应用前景。; 付晓尹忠平上官新晨彭大勇陈继光蒋艳; 关键词：青钱柳葡萄糖消耗胰岛素抵抗三萜化合物 3T3-L1脂肪细胞

紫薯愈伤组织诱导和培养条件优化及绿原酸类化合物的积累被引量：4: 2015年; 以紫薯叶片为外植体,通过筛选培养基和培养条件建立了紫薯愈伤组织培养体系。研究6-苄基氨基嘌呤(6-BA)及萘乙酸(NAA)不同浓度组合对紫薯愈伤组织诱导的影响,之后分别考察基础培养基MS、1/2MS、B5、WPM、White及NAA、6-BA、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)三种激素对紫薯愈伤组织继代生长的影响。确定最适基础培养基后,对激素进行单因素实验后再做正交实验。结果表明1/2MS基本培养基中添加1.5 mg/L 6-BA和0.4 mg/L NAA适合紫薯愈伤组织诱导,诱导率为81.82%。MS为优选基础培养基,通过正交实验优化的激素配比组合为1.0 mg/L NAA,0.4 mg/L 6-BA,1.0 mg/L 2,4-D。最佳继代培养基为MS+1.0 mg/L NAA+0.4 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D+6 g/L琼脂+30 g/L蔗糖,此优化激素条件下愈伤组织的生物量增长倍数为23.46倍,3-咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰宁酸、4,5-二咖啡酰宁酸三种绿原酸类化合物含量分别为0.30%、1.91%、1.10%,三者总含量3.31%,因此,通过紫薯愈伤组织培养生产绿原酸类化合物是可行的。; 张清兰上官新晨尹忠平蒋艳吴少福陈继光裴阿淼; 关键词：紫薯愈伤组织

青钱柳悬浮细胞的培养及其基质消耗的规律被引量：6: 2014年; 青钱柳为我国特有的胡桃科青钱柳属单种属珍稀植物,也是国家重点保护的濒危植物之一,青钱柳叶含三萜、黄酮、多糖及微量元素等活性成分,具有降糖、调脂、增强免疫等多种生理活性和药理功能,是很好的天然保健食品资源。本文建立青钱柳细胞悬浮培养体系,测定悬浮培养细胞的生长曲线,并研究了培养代数、接种量、装液量、pH值和激素组合对青钱柳悬浮体系建立的影响,同时研究了悬浮培养青钱柳细胞对培养液中主要基质的消耗规律。结果表明:适合青钱柳悬浮培养的培养基为:MS+0.1 mg/L2,4-D+0.5 mg/L NAA+1 mg/L KT+30 g/L蔗糖,接种量为8%,摇瓶装液量的体积分数为40%,初始pH 5。青钱柳细胞生长与碳源、氮源和磷的消耗存在着密切关系,在培养8 d,糖和PO43-基本消耗完毕;在氮源的吸收上,NH4+优于NO3-,NH4+的吸收基本上是呈直线下降。; 陈继光上官新晨尹忠平任民红付晓; 关键词：青钱柳悬浮细胞培养

硝普钠对青钱柳悬浮细胞三萜合成的影响被引量：2: 2014年; 本文采用植物细胞工程技术建立青钱柳细胞悬浮培养体系，以硝普钠为外源诱导物对其三萜的合成进行诱导，从硝普钠的浓度、添加时间和持续作用时间三个方面系统地研究了硝普钠对青钹柳悬浮细胞生长、总三萜酸积累及代表性三萜酸合成的影响，以期为植物细胞培养生产三萜酸类化合物提供参考。10~50μmol／L的硝普钠对悬浮细胞的生长影响不大，但对三萜合成的诱导作用也不明显；150μmol／L的硝普钠有效地促进了三萜的合成且对细胞生长影响较小；200μmol／L以上的浓度则对细胞生长有较强的抑制作用；接种后的第8d添加150μmol／L硝普钠、持续作用4d后收获效果最佳，总三萜酸产量可达1228．74mg／L，为对照组的2．14倍，五种代表性三萜酸中以熊果酸（UA）和齐墩果酸（OA）的变化最为明显，分别比对照组提高了2．28倍和2．48倍。研究结果表明，外源添加硝普钠能有效地促进青钱柳悬浮细胞三萜酸的合成。; 郭春梅尹忠平上官新晨陈继光付晓; 关键词：细胞工程植物细胞培养青钱柳三萜酸硝普钠

甜叶菊毛状根绿原酸类化合物对α-淀粉酶的抑制作用被引量：5: 2017年; 本文建立了微量α-淀粉酶抑制剂体外活性检测模型,并以此模型研究了甜叶菊毛状根绿原酸类化合物对α-淀粉酶的抑制作用效果及其动力学特征。优化后的α-淀粉酶抑制剂活性检测模型的主要参数如下:酶浓度为1.25 U/m L,底物浓度范围为0.05~6 mg/mL,反应时间为30 min。以此模型检测了由ACCC10060、R1601、A4三种发根农杆菌所诱导的甜叶菊毛状根总绿原酸提取物对α-淀粉酶的抑制效果,发现三者均对α-淀粉酶具有较强的抑制作用,其IC50分别为12.43、18.31和21.08 mg/mL。高效液相色谱检测结果表明,ACCC10060所诱导的甜叶菊毛状根的总绿原酸提物主要含绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸三种成分,含量分别为6.88、19.90和1.50 mg/g。酶抑制动力学检测结果显示,该三种绿原酸类化合物均对α-淀粉酶有较强抑制作用,以该三种绿原酸标品复配模拟毛状根总绿原酸提取物,发现其对α-淀粉酶的抑制作用与总绿原酸提取物无显著性差异。以上研究结果表明,甜叶菊毛状根绿原酸类化合物对α-淀粉酶有很好的抑制作用,其有效成分为绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸,可利用该毛状根生产以绿原酸类物质为主要活性成分的餐后血糖抑制剂。; 卢桃尹忠平彭大勇朱娟娟邹凯刘泽波; 关键词：甜叶菊毛状根 Α-淀粉酶抑制剂

甜叶菊毛状根的诱导培养及茉莉酸甲酯对其绿原酸类物质积累的影响被引量：5: 2017年; 以发根农杆菌ACCC10060诱导甜叶菊毛状根,建立毛状根培养生产绿原酸类物质体系,研究茉莉酸甲酯对绿原酸类化合物积累的影响。经发根农杆菌ACCC10060侵染的甜叶菊叶片外植体,共培养14 d后产生毛状根。聚合酶链式反应检测结果表明,发根农杆菌Ri质粒的rol B和rol C基因已成功整合到甜叶菊毛状根基因组中。MS液体培养基较B5、WPM更利于甜叶菊毛状根生长及绿原酸类物质的积累,培养35 d后,干质量增加约30倍,绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸最高含量分别为3.47、11.47、3.04 mg/g。毛状根在MS液体培养基中培养至第3周时分别添加15、45、100μmol/L的茉莉酸甲酯进行诱导,处理后第1、2、4、8天收获,毛状根的生长量和绿原酸类物质含量均有提高,其中以45μmol/L茉莉酸甲酯的促进作用最为显著,3种绿原酸类物质的总产量是对照组的2.68倍(P<0.01)。以上结果表明,甜叶菊毛状根培养可用于绿原酸类物质的生产,经茉莉酸甲酯处理可显著提高绿原酸类物质的产量。; 邹凯刘泽波陈继光尹忠平上官新晨许小向; 关键词：甜叶菊发根农杆菌毛状根茉莉酸甲酯

青钱柳叶三萜化合物分离与鉴定被引量：10: 2013年; 采用大孔树脂、硅胶、半制备高效液相等柱色谱技术以及重结晶等方法对青钱柳叶三萜化合物进行了分离纯化,获得了8个三萜单体,经高液相色谱(HPLC)、高分离度快速液相-飞行时间质谱(RRLC-TOF/MS)、核磁共振氢谱(1H NMR)和核磁共振碳谱(13C NMR)等检测分析,分别确定为β-香树脂醇(1)、熊果酸(2)、齐墩果酸(3)、白桦脂酸(4)、β-乳香酸(5)、科罗索酸(6)、马斯里酸(7)、阿江榄仁酸(8)。; 李田上官新晨尹忠平陈继光蒋艳; 关键词：青钱柳三萜化合物

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国家自然科学基金(31260368)

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