黑龙江省教育厅科学技术研究项目(11531083)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 电压门控型钾通道蛋白Kv 1.5抗血清的制备及特性鉴定
- 2010年
- 目的制备电压门控型钾通道蛋白Kv 1.5的多克隆抗体,对其特性进行鉴定。方法利用生物信息学方法分析Kv 1.5蛋白的序列,根据亲水性结构、柔韧区、抗原指数及表面概率结构等指标选择一段8个氨基酸序列,据此合成Kv 1.5多肽片段,并将其与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联作为免疫抗原,免疫新西兰白兔制备抗Kv 1.5抗血清。辛酸-硫酸铵法纯化抗血清,对纯化后的抗血清进行ELISA、Western blot鉴定。结果成功获得抗Kv 1.5合成肽的抗血清,该抗血清效价为1:64 000,可与Kv 1.5合成肽及天然Kv 1.5蛋白出现特异性反应,该抗血清识别的相应抗原的相对分子质量(Mr)为59 kD。同时,Western blot结果显示,所制备的抗血清能识别大鼠心脏天然Kv 1.5蛋白。结论合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性,可用于制备相应的抗血清,并且制备的抗血清经ELISA、Western blot鉴定后特异性较好。
- 于学薇李淑珍鄢成伟唐晓波
- 关键词：KV1.5合成肽多克隆抗体
- 兔抗人羧酸酯酶1多克隆抗体的制备与鉴定
- 2009年
- 目的:制备兔抗人羧酸酯酶1(CES1)多克隆抗体(pAb),并对抗体进行特性鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CES1(即CES1-GST)和pET-32a-CES1(即CES1-His)。CES1-GST融合蛋白作为免疫原制备兔pAb,辛酸-硫酸铵法纯化抗体,采用Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性。结果:CES1-GST和CES1-His融合蛋白均在大肠杆菌中以包涵体形式大量表达。兔抗人CES1pAb效价为1∶64000。Western blot鉴定表明,该抗体可识别重组人CES1蛋白,也可特异地识别人肝微粒体中的CES1亚基。免疫组织化学鉴定显示该抗体可特异性识别正常肝组织中的CES1蛋白。结论:成功地制备了兔抗人CES1pAb,该抗体可应用于ELISA、Western blot、免疫组化等实验,为进一步研究CES1的功能提供了特异性检测工具。
- 朱晓美李淑珍吴春铃包红霞朱大岭唐晓波
- 关键词：重组蛋白多克隆抗体
