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福建省高等学校科技创新团队培育计划(FMU-RT001): 作品数：13 被引量：41H指数：4; 相关作者：林旭林建银陈婉南林万松王林更多>>; 相关机构：福建医科大学更多>>; 发文基金：福建省高等学校科技创新团队培育计划高等学校全国优秀博士学位论文作者专项资金福建省重大科技项目更多>>; 相关领域：医药卫生文化科学更多>>

加强大型仪器共享平台管理,提高仪器利用率被引量：9: 2014年; 大型仪器共享平台作为科技创新的重要实验平台,为学科的发展起着巨大的推动作用。如何使大型仪器设备共享平台更加高效地服务于科研课题,为各类研究提供强有力的技术支持,提高大型仪器利用率,是共享平台建设与管理的重要任务。结合大型仪器共享平台的设备管理与使用经验,初步探索出一条科学化管理仪器设备,推进大型仪器设备共享,提高大型仪器设备和优质资源的使用效率和效益的路子。; 颜彩玲王世鄂陈婉南林旭; 关键词：大型仪器共享平台实验教学

乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白致HepG2细胞凋亡的蛋白质组学分析被引量：2: 2010年; 目的研究乙型肝炎病毒（hepatitits B virus,HBV）表面抗原大蛋白（large envelope protein,LHB）对HepG2细胞凋亡的影响,并以蛋白质组学方法探讨其机制.方法以腺病毒表达载体pShuttle-IRES-hrGFP-1克隆HBV LHB基因,经重组、包装后获得重组腺病毒Ad-LHB,与空载体重组腺病毒Ad-GFP分别感染HepG2细胞,采用Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒、JC-1细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒和碘化丙啶（PI）染色检测细胞凋亡情况.Ad-LHB及Ad-GFP分别感染HepG2细胞,提取细胞总蛋白,各取600μg蛋白样品进行双相电泳,R350染色,以双相电泳图像分析软件ImageMaster 2D Platinum确定差异蛋白点,Ettan斑点自动挖胶系统切取差异蛋白,脱色酶解后进行MALDI-TOF-TOF MS鉴定并分析.结果 Ad-LHB感染导致HepG2细胞凋亡明显增加.双向电泳及扫描分析显示Ad-LHB与Ad-GFP感染的HepG2细胞共有39个蛋白差异.质谱分析并确定其中的33种共36个蛋白,这些差异蛋白质有9种与细胞凋亡密切相关,其中,CAPN2、eIF3K和PPP2CB在Ad-LHB感染HepG2细胞表达增高,SERPINH1、LASP1、PRDX1、DHRS2、LDHA和PSMA4在Ad-LHB感染HepG2细胞表达降低.结论 HBV LHB可致HepG2细胞凋亡,多种细胞凋亡相关蛋白参与此过程.; 郑大利黄清玲吴云丽林建银林旭; 关键词：乙型肝炎病毒蛋白质组学双向凝胶电泳肝细胞细胞凋亡

幽门螺杆菌促肝细胞增殖及分子机制的初步研究: 2012年; 目的研究幽门螺杆菌(Hp)对肝细胞增殖的影响并探讨其分子机制。方法以不同量的Hp标准株NCTC11637与HepG2肝细胞共培养,CCK-8法检测细胞的增殖情况并确定最佳Hp作用剂量。用Affymetrix人类基因表达谱芯片检测Hp与HepG2共培养对HepG2细胞基因表达谱的影响,并选取5个差异表达基因以半定量RT-PCR技术验证。结果 MOI比值(细菌与细胞个数比)在0.15∶1～0.075∶1时,Hp对HepG2细胞具有明显的促增殖作用;HepG2细胞经MOI比值为0.15∶1Hp处理后有35个基因转录发生变化:ICAM-1等19个基因上调,SLC38A4等16个基因下调,这些变化基因涉及细胞骨架/基质、DNA结合蛋白及转录因子等;5个基因表达情况与表达谱芯片检测结果完全吻合。结论一定剂量的幽门螺杆菌可促进肝细胞增殖,这与Hp导致HepG2细胞基因转录调控有关基因的表达变化有关。; 林小玲陈燕凌强华陈婉南林旭; 关键词：幽门螺杆菌基因芯片肝细胞增殖肝癌

458nt～1308nt乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白对Huh7细胞基因表达的影响被引量：3: 2009年; 目的研究458nt^1 308nt乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白TSR′r′对Huh7细胞基因表达的影响,探讨其可能的致病机制。方法PCR扩增TSR′r′编码序列并克隆入pcDNA3.1/HisC。以FuGENE6将重组表达载体及相应空载体分别瞬时转染Huh7细胞,Trizol抽提细胞总蛋白与总RNA;以融合表达多肽表位抗体为一抗,Western blot检测目的蛋白的表达;用Affymetrix Genechip U133 plus 2.0人类基因表达谱芯片检测Huh7肝细胞基因转录的变化,并以半定量RT-PCR进一步验证。结果成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1/HisC-TSR′r′,转染48 h后在Huh7细胞中表达TSR′r′蛋白。TSR′r′导致Huh7细胞载脂蛋白H等27个基因转录上调,其中包括5种代谢相关基因,7种免疫相关基因,7种胶原及胞外基质基因,5种干扰素诱导蛋白基因;TSR′r′还导致Huh7细胞核受体共激活物1基因在内的7种基因转录下降。结论458nt^1 308nt乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白可能多方面影响肝细胞功能,具有重要的致病意义。; 黄连真王林陈金烟林万松林建银林旭; 关键词：RNA剪接

B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白在果蝇细胞中的表达与纯化: 2009年; 目的获得高纯度B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白(HBx蛋白)。方法PCR扩增获得B、C基因型乙型肝炎病毒X基因,以AgeⅠ及BglⅡ位点将其克隆入果蝇表达载体pMT/BiP/V5/HisC。重组载体与筛选质粒pCoBlast以脂质体Cellfectine共转染果蝇S2细胞,25μg/ml Blasticidin筛选多克隆抗性细胞株。扩增细胞以CuSO4诱导HBx蛋白表达,Western blot鉴定表达产物并确定最佳蛋白表达时间和诱导浓度。200 ml大规模培养细胞并诱导表达,一步法及两步法分别纯化B、C基因型HBx蛋白。结果成功构建重组表达载体pMT/BiP-HBxb(含B基因型HBx基因)和pMT/BiP-HBxc(含C基因型HBx基因)。在果蝇S2细胞中,B、C基因型HBx蛋白与6×His融合表达(分别为HBxb-His及HBxc-His),在CuSO4诱导后72 h以及诱导浓度为500μmol/L^1 mmol/L时蛋白表达量最高。在200 ml培养液中,一步法纯化所得HBxb-His及HBxc-His蛋白总量分别为1.52和1.37 mg,纯度为85.23%和84.59%;二步法所得的HBxb-His及HBxc-His蛋白总量分别为5.38和6.42 mg,纯度分别为95.36%和94.62%。结论在果蝇表达系统中表达并获得高纯度B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白,为进一步探讨结构和功能的关系奠定了基础。; 郑瑾林万松林建银林旭; 关键词：乙型肝炎病毒基因型纯化果蝇

幽门螺杆菌膜分离组分对SGC-7901细胞的促增殖作用被引量：1: 2008年; 目的探寻幽门螺杆菌(Hp)促细胞增殖组分。方法利用超声破碎法提取NCTC11637Hp不同组分,获得分泌成分、菌膜及胞浆内容,分别加入SGC-7901细胞,共育24h,用MTT法检测各组分对细胞增殖的影响。进而用细菌蛋白提取试剂盒(P-PEK)分离菌膜蛋白,获得4个不同溶解度膜蛋白组分,分别或两两组合后加入SGC-7901细胞,用MTT法和Ki-67细胞免疫组化检测细胞增殖情况。结果低浓度Hp菌膜(≤1μg/mL)可促细胞增殖,增殖率可达119.32%(P<0.05);Hp菌膜3个不同溶解度膜蛋白组分单独作用于细胞时抑制细胞增殖,但低浓度的"中溶解度"和"难溶解度"混合组分促细胞增殖,增殖率可达115.55%(P<0.05)。结论Hp促细胞增殖成分存在于菌膜的"中溶解度"和"难溶解度"混合组分中。; 佘菲菲陈爱灼陈建森陈月秀; 关键词：幽门螺杆菌细胞增殖

非酒精性脂肪性肝病发病影响因素的病例对照研究被引量：13: 2009年; 目的调查非洒精性脂肪性肝病（NAFLD）发病的影响因素，为预防NAFLD的发生提供可靠的流行病学依据。方法采用病例对照研究方法，对福建医科大学附属协和医院2007年18月体检确诊的NAFI．D患者385例和同期的体检健康人群825人进行调查。自制调查表收集两组一般情况、生活方式、饮食习惯、疾病既往史及生物化学检查结果，并对过程进行质量控制。两组问均衡检验采用f检验和x^2检验；单因素分析采用x^2检验；采用非条件Logistic逐步回归分析筛选变量，找出NAFLD的影响因素。结果两组在饮洒量（g／周）、是否喝茶、是否吸烟、运动指数、韭餐速度、应酬频率、食用油种类、是否食用海产品、是否有脂肪肝家族史及是否有高血压、血糖增高、血脂异常、ALT增高、AST增高、高尿酸血症、肥胖、高密度脂蛋白降低、低密度脂蛋白增高】8个方面的差异有统计学意义（P值均〈0．05）。非条件Logistic逐步回归分析结果显示，以上18个因素中有12个因素进入模型，其中肥胖（OR=6．35）、高血压（OR=3．82）、血脂异常（OR=2．95）、高密度脂蛋白降低（OR=2．85）、高血糖（OR=2．82）、ALT增高（OR=2．80）、高尿酸血症（ON=2．35）、HBsAg阳性（OR=1．99）、脂肪肝家族史（OR=1．79）及常吃海产品（OR=1．58）是NAFLD的危险凶素，而饮茶（OR=0．72）和经常运动（OR=0．90）则是NAFLD的保护因素。结论影响NAFLD发病的因素有多种，主要是生活方式，与遗传因素也有关。; 彭仙娥赖智双陆青青林建银林旭; 关键词：脂肪肝病例对照研究

乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白对病毒自身调控序列的影响被引量：2: 2008年; 目的研究双剪接型2，2kb乙型肝炎病毒（HBV）剪接变异体特异性蛋白TPds对病毒自身调控序列的影响。方法PCR扩增6种HBV启动子／增强子序列，以Kpn I及Xho I位点克隆于pGL3-basic，分别构建萤火虫荧光素酶重组报告载体pGL3-BCP（含HBV基本核心启动子）、pGL3-CP1601（含增强子Ⅱ的核心启动子）、pGL3-XP（X基因最小启动子）、pGL3-XP1071（含增强子I的X基因启动子）、pGL3-SP1（表面抗原大蛋白基因启动子）、pGL3-SP2（表面抗原中蛋白基因启动子）。以FuGENE6将TPds表达载体pcDNA3.1／HisC-TPds或空白载体pcDNA3.1／HisC分别与6种HBV启动子／增强子报告载体共转染Huh7细胞，转染后48h裂解细胞并检测胞内萤火虫荧光素酶活性，实验重复5次，数据以SPSS11.5软件分析。结果在一定的质量比值范围内，与pcDNA3.1／HisC空白载体对照相比，pcDNA3.1／HisC-TPds分别与pGL3，CP1601、pGL3-XP1071、pGL3-SP1、pGL3-SP2共转染后，Huh7细胞内萤火虫荧光素酶活性增高，而pcDNA3.1／HisC-TPds分别与pGL3-BCP或pGL3-XP共转染后，胞内荧光素酶活性无变化。结论TPds蛋白可反式激活HBV启动子SP1、SP2和增强子I、Ⅱ，对基本核心启动子和X基因最小启动子无影响。; 陈婉南陈金烟王林林万松林建银林旭; 关键词：乙型肝炎病毒 RNA剪接反式激活增强子

乙型肝炎病毒458nt-1308nt剪接特异性蛋白抗α-干扰素作用被引量：2: 2008年; 目的研究乙型肝炎病毒（HBV）458nt-1308nt剪接特异性蛋白TSR′r′（源于HBVDNA聚合酶读码框，T代表TP区，S为Spacer区，R′为截短的RT区，r′为截短的RNaseH区）抗α-干扰素（IFN-α）作用并分析其功能区域。方法PCR扩增获得HBV458nt-1308t剪接变异体剪接特异性基因TSR′r′及其缺失突变体，并克隆于pcDNA3.1／HisC。重组载体以FuGENE6转染Huh7肝细胞，通过融合表达的多肽表位抗体，Western blot检测目的蛋白表达。TSR′r′及其缺失突变体重组载体分别与IFN-α反应报告载体p6-16CAT共转染Huh7肝细胞，转染后48h给予终浓度为100IU／ml的IFN-α2a刺激，作用24h后裂解细胞，检测胞内氯霉素乙酰基转移酶（CAT）含量。所有实验数据采用单因素方差分析法进行统计分析。结果构建TSR′r′及其缺失突变体重组真核表达载体，Western blot显示各基因片段在Huh7细胞中均表达相应蛋白。06-16CAT共转染结果显示，随着TSR′r′重组表达载体转染量的递增，Huh7胞内CAT值逐渐降低。此外，转染TP＋Spacer区的缺失突变体可导致Huh7胞内CAT值显著下降，而其他各类TSR′r′缺失突变体共转染后胞内CAT值无变化。结论HBV458nt-1308nt剪接特异性蛋白抑制Huh7细胞对IFN-α的反应性，其活性与N端的TP及Spacer区有关。; 王林黄清玲郭丹华陈婉南林建银林旭; 关键词：乙型肝炎病毒 RNA剪接 Α-干扰素 DNA聚合酶

乙型肝炎病毒X蛋白对MMPs及TIMPs的影响: 2007年; 目的全面分析乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)对基质金属蛋白酶(Matrix Metallo-proteinases,MMPs)及组织金属蛋白酶抑制物(Tissue Inhibitors of Metalloproteinases,TIMPs)的影响,探讨其在肝细胞癌的侵袭转移中的可能作用。方法PCR扩增HBVX基因并克隆入真核表达载体pcDNA3.1/HisC,重组载体及空载体分别以Lipofectamine2000转染HepG2细胞并以800μg/mlG418筛选抗性细胞克隆。以Western blot检测抗性细胞HBx表达。抽提细胞总RNA,半定量RT-PCR检测MMPs及TIMPs。收集细胞培养液上清,以明胶酶谱检测MMP2及MMP9活性,反相明胶酶谱检测TIMPs活性。结果构建了HBx重组载体pcDNA3.1-XB。该重组载体及对照空载体转染HepG2细胞后,G418筛选,分别获得抗性细胞克隆HepG2-XB及HepG2-HIS,前者经Western blot证实可表达HBx。半定量RT-PCR显示HBx可促进MMP2、7、13、14、16、17、19、23、24及TIMP1、4基因的转录,抑制MMP1、3、8、9、10、11、12、15、20及TIMP2、3基因的转录。明胶酶谱检测显示HBx可促进酶原MMP2(Pro-MMP2)及活性MMP9(Active-MMP9)表达,抑制酶原MMP9(Pro-MMP9)表达;反相明胶酶谱显示HBx可促进TIMP1、TIMP4的表达,同时抑制TIMP2及糖基化TIMP3的表达。结论HBx蛋白对MMPs、TIMPs转录表达的影响是多方面的,但这种影响在HBx促进肝癌细胞侵袭转移过程中的确切机制有待进一步阐明。; 柏世玉黄清玲李晖王林郑瑾林建银林旭; 关键词：乙型肝炎病毒基质金属蛋白酶组织金属蛋白酶抑制物

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