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扩展青霉脂肪酶的纯化及氨基酸序列测定被引量：9: 2001年; 扩展青霉 (Pen .expansum)WMC2 0 718所产碱性脂肪酶经离心分离、硫酸铵沉淀、疏水层析、阴离子交换层析以及凝胶过滤等步骤 ,其酶纯化了 18.5倍 ,获得了比活性为 4 2 0 0U mg的纯碱性脂肪酶 ,提取得率 4 8.8%。纯化后的脂肪酶经过SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和高效反相色谱 (RP HPLC)检测 ,分别达到了SDS PAGE电泳纯和RP HPLC色谱纯。经SDS PAGE和SephadexG 15 0凝胶过滤色谱 ,分别测得酶的相对分子质量为 2 75 0 0和 2 82 0 0 ,表明该酶以单体形式存在。N末端 2 0个氨基酸残基序列测定的结果为ATADAAAFPDLHRAAKLSSA。该酶的最适作用温度为 30℃ ,在 35℃以下稳定 ,4 5℃处理 30min仅残留 30 %酶活性 ;pH稳定范围在 6 .5～ 10 .5之间 ,最适pH值为 10 .0。阴离子表面活性剂LAS对该酶活性的影响较大 ,而非离子表面活性剂AEO9对酶活性无影响。洗涤剂蛋白酶在规定的添加量范围内 ,对脂肪酶的活性影响较小。; 邬敏辰黄伟达孙崇荣; 关键词：扩展青霉碱性脂肪酶纯化

黑曲霉酸性β-甘露聚糖酶的酶学特性被引量：13: 2007年; 纯化的黑曲霉Aspergillus niger WM20-11所产的酸性β-甘露聚糖酶经Sephadex G-100凝胶过滤层析和SDS-PAGE分别测得相对分子质量为39 000和40 000;IEF-PAGE测得酶的等电点为4.0;最适作用pH值和温度分别为3.5和70℃;糖质量分数19.6%;Mg2+、Ca2+、Li+、Na+、K+对酶有激活作用,Pb2+、Co2+、Fe3+、Mn2+、Hg2+对酶有抑制作用;酶对角豆胶的Km和Vmax分别为66.7 g/L和333μmol/(min.mg);酶蛋白的氨基酸组成中Asp和Glu含量最高;HPLC分析角豆胶酶水解液的主要产物是低聚糖。; 朱劼邬敏辰; 关键词：黑曲霉 Β-甘露聚糖酶

碱性脂肪酶同工酶的分离纯化被引量：11: 2000年; 对经疏水层析 (PhenylSepharoseCL 4L)和阴离子交换层析 (DEAE FastFlow)等部分纯化的样品 ,采用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳进一步将其分离纯化 ,获得了PG3 7碱性脂肪酶的 3种同工酶LipaseⅠ、LipaseⅡ和LipaseⅢ .用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和SephadexG 1 50凝胶色谱法分别测得同工酶的相对分子质量为 2 750 0和 2 90 0 0 .测定了LipaseⅠ的等电点为 5.4 ,动力学常数Km 和Vmax分别为 4 .54g/dL和 5.56μmol/ (min·μg) .; 邬敏辰黄伟达孙崇荣邬显章; 关键词：碱性脂肪酶分离纯化同工酶酶动力学

碱性脂肪酶与表面活性剂相互作用的研究被引量：19: 2000年; 研究洗涤剂中常见的非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂和阳离子表面活性剂对由扩展青霉 (Penicilliumexpansum)产生碱性脂肪酶活性的影响及该酶在各种常见的洗涤剂溶液中的稳定性。; 郑毅施巧琴吴松刚; 关键词：扩展青霉碱性脂肪酶表面活性剂洗涤剂相容性

扩展青霉碱性脂肪酶cDNA的克隆和表达被引量：8: 2001年; 采用ＴＲＩｚｏｌ试剂一步法所抽提的总ＲＮＡ的Ｄ（２６０）／Ｄ（２８０）值为１.８２，甲醛变性电泳呈现真核微生物所特有的２８ＳｒＲＮＡ和１８ＳｒＲＮＡ条带．根据扩展青霉所产碱性脂肪酶（ＬｉｐＰＥ）Ｎ末端２０个氨基酸残基序列和真核生物ｍＲＮＡ３’端具有ｐｏｌｙ（Ａ）等所提供的生物信息，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术和３’－ＲＡＣＥ法扩增了ＬｉｐＰＥ成熟肽编码区和３’非纪码区的ｃＤＮＡ，直接将该ＰＣＲ产物克隆至ｐＵＣｍ－Ｔ载体中。序列分析表明，该碱性脂肪酶含有２５８个氨基酸，其中保守的五肽序列为Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ。进一步采用ＣｌｏｎＴｅｃｈ公司的ＳＭＡＲＴ～（ＴＭ）ＰＣＲｃＤＮＡ文库构建试剂盒，扩增、克隆和测定了自转录起始点至纪码区的ｃＤＮＡ片段，从而完成了ＬｉｐＥＰ完整ｃＤＮＡ的分析测定．最后将编码完整脂肪酶蛋白的ｃＤＮＡ克隆至ｐＧＥＸ－５Ｘ－３表达载体中．在大肠杆菌ＢＬ２１中进行ＩＰＴＧ诱导表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测结果表明，所表达的ＧＳＴ－ＬｉｐＥＰ融合蛋白分子质量约为５３ｋｕ；; 邬敏辰李江华黄伟达孙崇荣; 关键词：碱性脂肪酶基因克隆真核生物 CDNA

抗性突变株筛选法选育碱性脂肪酶高产菌被引量：13: 2001年; 以扩展青霉 (Penicillumexpansum)P1336为出发菌株 ,研究琥珀酸钠和制霉菌素对菌株生长的影响。经过多代诱变 ,获得一突变株W 2 5 80 ,其产酶水平比出发株P1336菌株提高 34 .7%,该菌菌丝体麦角固醇含量下降了 12 .2 %。; 章文贤蒋咏梅周晓兰陈必链施巧琴吴松刚; 关键词：碱性脂肪酶扩展青霉高产菌选育筛选法

新型酶制剂──碱性脂肪酶可实现国产化被引量：2: 2000年; 郑毅施巧琴谢必峰吴松刚江祖德; 关键词：碱性脂肪酶酶制剂

宇佐美曲霉木聚糖酶的纯化和性质被引量：14: 2005年; 采用缓冲液浸提、硫酸铵盐析、Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析等分离纯化手段,从宇佐美曲霉E001固态发酵曲中分离出木聚糖酶组分,再经DE-AE-Sepharose fast flow阴离子交换层析进一步纯化,获得了两种电泳纯木聚糖酶XynⅠ和XynⅡ.分别采用SDS-PAGEG-75凝胶过滤层析测得XynⅠ、XynⅡ相对分子质量,两种酶均为单体蛋白质;等电聚焦电泳测得两种酶的等电点(pI);测定了XynⅠ、XynⅡ的酶动力学常数;序列测定XynⅡN末端15个氨基酸残基的.; 邬敏辰符丹丹朱劼夏美芳; 关键词：宇佐美曲霉分离纯化

平板扩散法粗略确定碱性脂肪酶的活性被引量：38: 2000年; 通过对圆弧青霉PG3 7所产碱性脂肪酶活性测定方法的研究和比较 ,建立了一种快速、直观、灵敏的固体琼脂平板脂肪酶活性测定方法 .利用脂肪酶在一定条件下分解三丁酸甘油酯所释放出的游离脂肪酸使指示剂 (维多利亚蓝 )变色的原理 ,根据变色圈直径的大小对酶活性进行粗略分析 ,特别适合于酶提纯过程中大批量样品酶活性的估测以及酶活性条带和其它蛋白质条带的区分 .; 邬敏辰孙崇荣邬显章; 关键词：碱性脂肪酶

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“九五”国家科技攻关计划(96-C03-02-01)

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