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国家自然科学基金(39670695)
国家自然科学基金(39670695)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 相关作者：邓健蓓药立波陈萍韩骅苏成芝更多>>
- 相关机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 抗人肿瘤坏死因子-α单链抗体与其配体的相互作用被引量：1
- 2000年
- 为了在大肠杆菌中表达纯化抗人 TNF- α单链抗体并检测其结合活性与中和活性 .利用GST融合蛋白系统在大肠杆菌中表达抗人 TNF- α单链抗体 E6Sc Fv;分离包含体后进行变性和复性 ,再用亲和层析法进行纯化 ;用 ELISA法和酵母双杂交系统检测 E6Sc Fv与配体的结合 ;用 L92 9细胞检测 E6Sc Fv对人 TNF- α细胞毒作用的中和活性 .经变性 ,复性与亲和层析 ,E6Sc Fv被纯化 ,在 SDS- PAGE上为单一蛋白带 ;体外结合与中和实验表明 ,表达纯化的 E6Sc Fv可与人 TNF-α结合并中和其细胞毒活性 ;进一步用酵母双杂交系统证明当表达于细胞内时 ,E6Sc Fv仍保持了与TNF-α相结合的能力 .
- 陈萍邓健蓓韩骅药立波苏成芝
- 关键词：人TNF-Α单链抗体酵母双杂交胞内抗体
- 三种抗人TNF-α重组抗体的重折叠
- 2002年
- 目的 探讨重组抗体蛋白的复性规律 .方法 用共溶剂氧化还原、表面活性剂介导、变性剂介导及抗原介导复性四种条件对抗人 TNF- α单域抗体、单链抗体 GST融合蛋白进行了分离纯化 .结果 复性产物的可溶率为 1 0 %左右 .结论 几种复性方法均可使目的蛋白复性 。
- 陈萍徐鹏蒲勤邓健蓓药立波
- 关键词：复性抗体肿瘤坏死因子重折叠
- 应用胞内染色技术分析抗TNF-α单链抗体的活性
- 2000年
- 本文用TPA和LPS刺激培养的HL6 0细胞作为靶的 ,通过胞内染色技术和流式细胞仪分析了抗TNF α单链抗体 (ScFv)的活性。结果表明 ,抗TNF αScFv和其亲本单克隆抗体 (mAb)与TNF α竞争作用显示平均荧光强度 (MFC)为 2 2 7% ,而mAb与TNF α结合显示MFC为 6 9 5 % ,抗TNF αScFv E tag与TNF α结合显示MFC为 48 8% ,空白和阴性对照的MFC分别为1 1%和 2 5 %。相对于mAb ,ScFv的抑制率是 78 37% ,抗原相对结合力是 6 8 17%。本文的结果说明抗TNF αScFv具有与其亲本单抗相同表位的结合活性 ,也为定量和直观测定ScFv的活性提供了实验依据。
- 陈萍徐鹏邓健蓓韩骅药立波苏成芝
- 关键词：单链抗体TNF-Α
