国家自然科学基金(30770889)
- 作品数：7 被引量：28H指数：4
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- 小鼠胚胎心脏发育过程中组蛋白乙酰化酶亚型p300调控心脏特异转录因子的动态表达被引量：8
- 2010年
- 目的:观察小鼠胚胎心脏发育过程中GATA4、Nkx2.5、MEF2C、Tbx5基因的动态表达和这些基因的启动子区域组蛋白H3乙酰化修饰状态的变化,以及组蛋白乙酰化酶亚型p300对这些基因启动子的直接调控作用,为进一步研究先天性心脏疾病的发生机制奠定基础。方法:选取胎龄(Embryoday,E)10.5d和16.5d小鼠正常胚胎心脏,用实时荧光定量PCR(RealTimePCR)的方法观察上述基因mRNA的动态表达;采用染色质免疫沉淀技术(Chromatin immunoprecipitation,ChIP),用ChIP级抗乙酰化H3和抗p300抗体免疫沉淀与其所结合的DNA,采用RealTimePCR扩增抗体所富集的上述基因启动子的DNA量,观察胚胎心脏发育过程中乙酰化组蛋白及组蛋白乙酰化酶亚型p300是否参与调控上述四种心脏特异转录因子的表达。结果:①胎龄E10.5d和E16.5d小鼠胚胎心脏的GATA4、Nkx2.5、MEF2C、Tbx5基因的mRNA表达水平都有明显差异(P<0.05),其中GATA4和MEF2C mRNA相对β-actin的表达水平,E10.5明显低于E16.5,而Nkx2.5和Tbx5mRNA相对表达水平,E10.5明显高于E16.5;并且ChIP结果显示这些基因启动子的乙酰化水平也随着时间而改变,但差异无统计学意义。②E10.5和E16.5胚胎小鼠心脏中,p300抗体均能免疫沉淀GATA4、Nkx2.5、MEF2C、Tbx5基因启动子,其沉淀的基因量在这两个小鼠心脏发育的关键时间点有所不同,但差异无统计学意义。结论:小鼠胚胎心脏发育过程中,心脏发育相关基因GATA4、Nkx2.5、MEF2C、Tbx5呈现动态表达,提示这些基因在心脏发育不同阶段具有重要作用。ChIP结果提示p300介导的组蛋白乙酰化修饰可能为调节这些基因动态表达的机制之一。
- 杨雪芳田杰陈国珍孙慧超钟立霖吴晓云朱静
- 关键词：P300组蛋白乙酰化心脏发育染色质免疫沉淀
- 姜黄素对小鼠心脏发育相关基因表达的影响及其表观遗传调控机制被引量：8
- 2011年
- 目的阐明姜黄素对心脏发育相关基因GATA4,MEF2C和Nkx2.5表达的影响,探讨其表观调控机制。方法姜黄素处理新生鼠心肌细胞后,分别用ELISA,Western blot,real time RT-PCR和染色质免疫沉淀(ChIP)检测组蛋白乙酰化酶活性,组蛋白H3乙酰化修饰状态,GATA4,MEF2C和Nkx2.5的表达和启动子区域组蛋白乙酰化水平。结果 30μmol/L姜黄素作用24 h能有效降低心肌细胞中组蛋白乙酰化酶活性和组蛋白H3的乙酰化修饰状态,GATA4,MEF2C和Nkx2.5的表达水平明显降低(分别为0.34±0.017,0.26±0.04和1.05±0.12)(P<0.05),启动子区域组蛋白乙酰化修饰水平明显降低(分别为1.75±0.67,2.13±0.99和1.29±0.40)(P<0.05)。结论启动子区域组蛋白乙酰化修饰状态降低导致染色质构型紧密,可能为姜黄素抑制GATA4,MEF2C和Nkx2.5表达的调控机制之一。
- 孙慧超朱静吕铁伟吴晓云黄国英田杰
- 关键词：组蛋白乙酰化姜黄素P300
- 姜黄素对小鼠胚胎心脏发育中Tbx5表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的探讨组蛋白乙酰化酶p300抑制剂姜黄素对小鼠胚胎心脏早期发育转录因子Tbx5表达的影响。方法取清洁级健康成年昆明小鼠,雌雄合笼,受孕成功后于妊娠期第7.5天(E7.5)开始腹腔注射姜黄素75 mg.kg-1.d-1,分别在胚胎心脏发育不同时间点(E11.5、E14.5和E17.5)断颈处死孕鼠,取胎鼠心脏,提取RNA,实时荧光定量(RT)-PCR检测Tbx5的表达。同时设立二甲基亚砜(DMSO)组(腹腔注射相同剂量DMSO)和空白对照组(不做任何处理)作为对照。结果 1.E11.5时,姜黄素组、DMSO组和空白对照组Tbx5的表达水平分别为2.06±0.16、1.08±0.13和1.08±0.18,姜黄素组Tbx5表达较空白组升高1.90倍,差异有统计学意义(P<0.05)。2.E14.5时,姜黄素组、DMSO组和空白组Tbx5的表达水平分别为1.21±0.08、0.71±0.04和0.64±0.10,姜黄素组Tbx5表达较空白组升高1.88倍,差异有统计学意义(P<0.05)。3.E17.5时,姜黄素组、DMSO组和空白对照组Tbx5的表达分别为1.09±0.07、0.79±0.06和0.75±0.06,姜黄素组Tbx5表达较空白组升高1.45倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素能透过胎盘,升高小鼠胚胎心脏早期发育转录因子Tbx5的表达。
- 孙慧超1程昕然朱静田杰孙慧超
- 关键词：胚胎心脏姜黄素
- 姜黄素干预乙醇对心肌祖细胞H3K9的高乙酰化失衡及心脏发育相关基因表达异常被引量：5
- 2011年
- 目的:探讨乙醇对心肌祖细胞毒性作用的表观遗传机制。方法:以心肌祖细胞株为研究对象,用200mmol/L乙醇和溶解于该浓度乙醇的不同浓度姜黄素(5μmol/L,15μmol/L,25μmol/L)处理。Western blot检测组蛋白H3K9乙酰化水平,筛选出姜黄素的有效干预浓度,实时定量PCR检测心脏发育相关基因GATA4,Mef2c,Tbx5mRNA表达量的变化。结果:200mmol/L乙醇使组蛋白H3K9乙酰化水平升高2.76倍(P<0.05),同时使心脏发育相关基因GATA4,Mef2c,Tbx5表达均增加,其中GATA4,Mef2c较对照组有统计学差异(P<0.05)。5μmol/L、15μmol/L姜黄素分别使组蛋白H3K9乙酰化水平升高2.22、1.58倍(P<0.05);25μmol/L姜黄素使组蛋白H3K9乙酰化水平降至对照组水平,同时使心脏发育相关基因GATA4,Mef2c,Tbx5表达较乙醇组均下降,且与对照组无差异(P>0.05)。结论:姜黄素可干预乙醇对心肌祖细胞的高乙酰化失衡以及进而发生的相关基因的表达异常,可为了解乙醇致畸的机制以及临床预防先天性心脏病提供新的思路。
- 王琳轶田杰钟立霖吕铁伟吴晓云朱静
- 关键词：乙醇
- 组蛋白乙酰化转移酶亚型类固醇受体共激活因子1在发育心脏的时空表达
- 2010年
- 目的研究组蛋白乙酰化转移酶亚型类固醇受体共激活因子1(SRC1)在小鼠心脏中的时空表达规律,初步探讨其与心脏发生发育的关系。方法取胎龄E7.5～18、出生1d和3个月成年小鼠正常心脏,每个时间点选9个标本,采用免疫组织化学SP法观察SRC1蛋白在不同发育阶段心脏的空间表达;每个时间点选6组标本,利用蛋白质印迹分析技术检测其在小鼠心脏发育过程中时序性表达变化。结果免疫组织化学结果显示,SRC1蛋白在E7.5胚胎心脏原基中不表达;E8.5～E9.5心管中微弱表达;E10.5后心脏发育各时期,小梁弱表达,心脏其他区域均有较强而广泛表达。蛋白质印迹分析结果显示,E10.5以后的心脏发育阶段,SRC1蛋白在E10.5较低表达,与E11.5、E12.5相比表达差异有统计学意义(P<0.05),与其他发育时间点相比表达差异无统计学意义(P>0.05);E11.5～E12.5达到表达高峰,此两个发育时间点相比表达差异无统计学意义(P>0.05),与其他发育时间点相比表达差异有统计学意义(P<0.05);此后表达下降并持续低表达至成年鼠期,此阶段表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SRC1蛋白广泛表达于E8.5后的发育心脏,并呈时空动态变化,提示其参与了心脏发育的整体调控,可能与心脏间隔早期的诱导形成关系更为密切。
- 陈国珍田杰朱静吕铁伟孙慧超杨雪芳
- 关键词：心脏发育
- 组蛋白乙酰化酶和去乙酰化酶与胚胎发育被引量：2
- 2008年
- 过去十几年从酵母和哺乳动物中鉴定出6类组蛋白乙酰化酶(HATs)和4类组蛋白去乙酰化酶(HDACs)。HATs和HDACs分别与基因转录的活化和抑制有关。胚胎早期组蛋白乙酰化阶段性分布与合子基因组的转录调节有关,组蛋白去乙酰化引起的转录抑制状态对早期胚胎发育至关重要。应用基因敲除/基因敲入HATs/HDACs方法建立的小鼠胚胎模型死于胚胎期或出现某些器官形态发育及功能异常。不同的HATs/HDACs对胚胎特定器官形成必不可少,与某些先天性疾病的发生密切相关。
- 陈国珍田杰
- 关键词：组蛋白乙酰化组蛋白乙酰化酶组蛋白去乙酰化组蛋白去乙酰化酶胚胎发育
- 组蛋白乙酰化酶p300和CREB结合蛋白在小鼠胚胎心发育中的时序表达被引量：5
- 2008年
- 目的：探讨p300和CREB结合蛋白（CBP）在小鼠胚胎心发育过程中的时序表达规律。方法：选取胎龄7．5～18d、出生1d、3月小鼠正常心，采用免疫组织化学法观察p300和CBP在小鼠胎心发育中的表达分布及变化规律。结果：p300在胚胎心发育各个时期及出生1d和3月成年鼠的心各部分均有很强表达。CBP在E7．5不表达；在E8．5～E9．5的心管中较强表达；E10．5～E16．5及E18和生后1d心肌较强表达，房室瓣和小梁网较弱表达，室间隔肌部弱表达而膜部几乎不表达；3月成年鼠心肌和小梁较弱表达，室间隔极弱表达。结论：p300对发育早期的生心细胞诱导特化和中期的室间隔形成作用较CBP更大。
- 陈国珍朱静田杰吴晓云张晓萍吴刚孙慧超
- 关键词：组蛋白乙酰化酶胚胎发育免疫组织化学
