国家自然科学基金(30371031)
- 作品数：27 被引量：110H指数：7
- 相关作者：李碧春陈国宏周冠月孙思宇秦洁更多>>
- 相关机构：扬州大学江苏省农业科学院宿迁市农业局更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学自动化与计算机技术医药卫生更多>>
- 鸡睾丸细胞分离方法与培养的研究被引量：4
- 2007年
- 吴洪李碧春周冠月孙思宇秦洁
- 关键词：睾丸细胞体外培养哺乳类动物啮齿类动物支持细胞精原细胞
- 氟烷基因对母猪繁殖性能的影响被引量：14
- 2006年
- 采用PCR-RFLP技术检测江苏省泰兴种猪场长大(长白猪×约克夏)二元杂交初产母猪及经产母猪的氟烷(H al)基因型,分析氟烷基因对总产仔数和产活仔数等9个繁殖性状的影响。结果表明:初产母猪的繁殖性状各基因型间无显著差异,而经产母猪N N型的总产仔数、产活仔数、断奶仔猪数和初生窝重与N n型、nn型差异均显著,个体初生重上氟烷阴性与氟烷阳性间差异显著,其他性状在各基因型间均无显著差异。氟烷敏感基因可导致总产仔数、产活仔数和断奶仔猪数下降,初生窝重和个体断奶重降低,并使生长速度减慢,即H aln对繁殖性能有较显著的不良影响。
- 鞠慧萍伊萍吴圣龙巢亦成丁家桐陈国宏
- 关键词：氟烷基因繁殖性状
- 鸡精原细胞分离纯化与体外培养初探被引量：5
- 2006年
- 本研究以组合酶分步消化法并利用Percoll梯度分离、贴壁纯化的方法,从不同时期的鸡睾丸组织中分离精原细胞。结果发现:①Percoll分离后,出壳6d雏鸡获得的细胞总数、精原细胞总数、精原细胞纯度分别为282.1、174.6、61.9%,其中精原细胞纯度比孵化15d、19d鸡胚和出壳后13d雏鸡分别高10.2%、5.7%和2.5%;②贴壁纯化后精原细胞纯度达到82%,比未经贴壁纯化的精原细胞纯度高出15.6%;③在无饲养层培养条件下,比较Percoll梯度分离前、后鸡精原细胞体外培养的情况,Percoll梯度分离前精原细胞贴壁在时间上比分离后较快,且分离前精原细胞体外存活时间亦比分离后长。
- 吴洪李碧春周冠月孙思宇秦洁陈国宏
- 关键词：精原细胞体外培养
- 鸡睾丸细胞体外分离培养初探被引量：8
- 2007年
- 取孵化15d鸡胚及出壳7d内和7d后雏鸡的睾丸，分别采用二酶二步消化法（胶原蛋白酶＋胰蛋白酶）和三酶二步消化法（胶原蛋白酶＋透明质酸酶／胰蛋白酶）分离睾丸细胞。结果表明：同一时期睾丸细胞的分离效果，二酶二步消化法与三酶二步消化法差异显著；不同时期采用二酶二步消化法分离睾丸细胞，孵化15d的分离效果显著优于出壳7d内，极显著优于出壳7d后，出壳7d内极显著优于出壳7d后。Percoll离心法提纯结果表明：密度梯度为27％～35％的条带中睾丸细胞纯度较高。在体外无饲养层的条件下分别培养经提纯与未经提纯的睾丸细胞，结果表明未经提纯的细胞具有较高的存活力。
- 李碧春周冠月吴洪孙思宇
- 关键词：精原干细胞分离提纯
- 用于筛选化学预防剂的报告载体的构建被引量：1
- 2007年
- 构建以TK为基本启动子,其上游由抗氧化反应元件(ARE)调控的报告载体pARE-TK-GFP以期用于化学预防剂的筛选.应用重组PCR技术,分别经3次PCR获得重组TK启动子并克隆入pMD18-T载体中,经酶切和测序鉴定正确后连入pEGFP中构建载体pTK-GFP.人工合成的ARE插入TK基本启动子上游,成功构建报告载体pARE-TK-GFP.脂质体转染HepG2细胞并在荧光显微镜下观察有绿色荧光.该载体的成功构建可为各种天然或人工合成的化学预防剂的筛选奠定基础.
- 魏文志吴玉娟李湘鸣李碧春夏文水
- 关键词：重组PCR
- 鸡精原干细胞的体外培养被引量：5
- 2008年
- 本试验旨在探索不同基础培养基对鸡精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外培养的影响,以期选出最佳的培养体系,并用其进行传代培养,以观察精原干细胞继代培养的特性。结果表明:在高糖DMEM培养体系和TCM199培养体系中,SSCs均能正常生长和增殖,在以DMEM和TC199为基础培养基的培养体系中,在SSCs的活率、克隆形成率上显著不差异,但SSCs在以DMEM为基础培养基的培养体系中生长情况较好,为最佳培养体系。在RPMI1640培养体系中,SSCs克隆形成率、活率较低,比前2种培养体系的效果差异显著。在添加细胞因子的培养基中精原干细胞在体外传至第3代。
- 孙思宇李碧春魏彩霞秦洁吴洪周冠月陈国宏
- 关键词：体外培养继代培养
- 鸡胚精原干细胞体外保存能力的研究被引量：7
- 2007年
- 采用二酶3步法获取孵化第19 d的鸡胚精原干细胞(SSCs),比较在快速冷冻条件下3种冷冻保护剂(DMSO、乙二醇、甘油)在3个浓度5%、10%、15%条件下对鸡胚精原干细胞的冷冻保存效果进行研究。结果显示:(1)当DMSO的浓度为5%、10%及15%时,复苏后细胞存活率分别为73.1%、88.6%和74.8%,三者差异显著(P<0.05);而10%DMSO保存精原干细胞的存活率、复苏后培养细胞生长和集落形成均显著高于其它2个浓度;当乙二醇浓度为5%、10%和15%时,复苏后细胞存活率分别为69.4%、83.1%和65.2%,三者差异显著(P<0.05);复苏后无论饲养层存在与否,SSCs均能增殖,但未有AKP阳性集落生成;当甘油浓度为5%、10%、15%时,复苏后细胞存活率均小于15%,三者差异不显著(P>0.05);复苏后细胞存活时间极短,仅存活12 h左右;(2)当在10%DMSO浓度条件,复苏后SSCs在有饲养细胞层的条件下,培养5 d形成集落,表明10%DMSO是鸡胚精原干细胞适宜的冷冻保护剂。
- 李碧春周冠月陈国宏孙国波孙鹏翔徐琪刘铁铮
- 关键词：精原干细胞冷冻保存
- 不同时期鸡胚胎体外培养的比较研究被引量：1
- 2004年
- 试验采用代用蛋壳体外培养方法进行了不同时期鸡胚胎换蛋壳培养的研究。结果显示:体外受精卵体外培养发育率为10%。X期胚胎体外培养的孵化率为1.2%;孵化1日龄的胚胎体外培养的孵化率为7.9%;直接去1/4壳的鸡胚孵化率为3.7%;鸡胚胎换蛋壳以后,添加6～8mL的稀蛋白对换壳鸡胚发育比较适宜。
- 李碧春陈国宏吴圣龙吴信生蔡琳琳
- 关键词：胚胎体外培养孵化发育
- 用于化学预防剂筛选的转基因细胞模型的建立
- 2007年
- 建立TK启动子以及抗氧化反应元件(ARE)增强子调控报告基因GFP在HepG2细胞中稳定表达的细胞模型。人工合成ARE增强子序列,经退火和磷酸化后插入pTK-GFP载体的TK启动子上游,构建pARE-TK-GFP重组质粒。PCR法扩增TK和ARE-TK目的片段克隆到pEGFP-N1上,构建TK启动子启动以及上游由ARE增强子调控的报告基因表达载体pTK-GFP/Neo和pARE-TK-GFP/Neo。脂质体转染法转染人HepG2肝癌细胞后加G418筛选出阳性克隆。经扩大培养的克隆细胞中加入化学预防剂PDTC和香菇多糖作用48h后检测细胞中GFP荧光强度,结果显示pARE-TK-GFP/Neo表达载体中的GFP基因受ARE增强子的调控,其表达水平高于对照载体且在一定范围内与化学预防剂的浓度呈剂量效应关系,从而表明所构建的细胞模型可用于各种天然或人工合成的化学预防剂的初步筛选。
- 吴玉娟魏文志李湘鸣李碧春陈国宏
- 关键词：GFP
- 建立鸡EPGCs单细胞克隆株初探
- 2007年
- 目的 探索鸡EPGCs单细胞克隆建立细胞系的可能性,并对其生物学特性进行鉴定.方法 采取19期和28期的鸡EPGCs,体外培养传至第4代的细胞聚合体,用胰酶消化将细胞分散成单细胞悬液,将单个细胞接种至96孔板,每个孔内接种1个细胞,生长出的细胞集落用胶原酶消化传代,细胞化学法和免疫荧光法检测多向分化细胞的表面标志物;常规染色体核型检查.结果 接种的288个单细胞中有9个扩增,其中7个传至第2代,2个传至第4代,克隆形成率为3.1%.扩增出的2～4代单细胞克隆能稳定增殖不分化,具有正常二倍性染色体核型、碱性磷酸酶阳性、阶段特异性胚胎抗原（SSEA）-1等特征性细胞表面标志物呈阳性;离体情况下具有形成类胚体和类上皮样细胞的能力.结论 建立鸡EPGCs单细胞克隆细胞系是可行的,其生物学特性稳定.
- 李碧春秦洁赵文明徐琪吴信生陈国宏
- 关键词：原始生殖细胞生物学特性
