国家重点基础研究发展计划(2005CB723400-G)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- brcaa1基因新抗原表位片段的扩增、快速表达和活性鉴定
- 2009年
- 目的制备包含乳腺癌新抗原表位的BRCAA1部分肽段。方法根据brcaa1基因序列与RTS技术要求,设计并合成带有His尾巴的PCR引物,利用brcaa1基因质粒作模板,利用PCR技术扩增获取相应基因片段并测序证实,然后采用RTS系统试剂盒与配套设备,快速翻译合成蛋白,利用PAGE电泳与Western Blot技术,鉴定表达蛋白的活性。结果PCR获取包含乳腺癌新抗原表位的BRCAA1基因片段;测序证实所获片段是所需的目的片段;Western Blot分析证实表达的肽段具有抗原活性。结论制备了具有活性包含乳腺癌新抗原表位的BRCAA1肽段,为进一步制备单克隆抗体与建立诊断方法奠定了基础。
- 李清崔大祥高峰黄拓徐萍贺蓉
- 关键词：聚合酶链反应WESTERNBLOT分析
- BRCAA1蛋白在胃癌组织与不同分化细胞株中的表达及其临床意义被引量：2
- 2007年
- 背景:BRCAA1蛋白是一个新蛋白,其在胃癌发生、发展中的作用尚不明确。目的:探讨BRCAA1蛋白在胃癌组织与不同分化细胞株中的表达水平及其临床意义。方法:收集60例胃腺癌患者,分别取胃癌和癌旁组织,应用免疫组化SP法检测BRCAA1蛋白的表达水平,并分析其与胃癌分级的关系。蛋白质印迹分析检测BRCAA1蛋白在胃癌高分化(MKN-1和MKN-74)、中分化(SGC-7901)和低分化(KATO-Ⅲ和MGC80-3)细胞株中的表达水平。结果:胃癌组织中BRCAA1蛋白的表达阳性率(23/60,38.3%)显著高于癌旁组织(0/60,0%)(P<0.01);BRCAA1蛋白在高分化(2/17,11.8%)、中分化(11/26,42.3%)和低分化胃癌组织中(10/17,58.8%)的表达阳性率存在显著差异(P<0.05)。蛋白质印迹分析结果表明BRCAA1蛋白在胃癌高、中、低分化细胞株中的表达水平逐渐增强。结论:BRCAA1蛋白参与了胃癌的发生、发展,其表达水平与胃癌低分化程度密切相关,BRCAA1蛋白可能是一个胃癌不良预后的标志物。
- 黄拓崔大祥李清徐萍孙荔
- 关键词：胃肿瘤免疫组织化学印迹法
- HIV-1 env蛋白的制备活性鉴定与快速检测方法的建立
- 2009年
- 目的制备具有生物活性的HIV-1 env蛋白,利用量子点的特殊光学性能结合免疫分析技术,建立快速、简便的免疫凝集分析检测HIV-1gp41抗体方法。方法以HIV-1 env基因质粒为模板,采用体外快速翻译系统(RTS)线性模板试剂盒制备线性模板,用RTS100试剂盒合成env蛋白,用磁珠法纯化蛋白,用Western Blot方法鉴定蛋白活性。纯化后的HIV-1 env蛋白采用量子点标记,与样品液中的抗HIV-1gp41抗体进行免疫反应,根据量子点的荧光信号的变化,定量检测样品液中抗gp41抗体的浓度。结果体外快速翻译系统表达出相对分子量约为97KD的env蛋白;Western blotting证实纯化后的蛋白具有生物活性,量子点标记的env蛋白与山羊抗HIV-1gp41抗体发生了免疫凝集反应,使量子点发生荧光淬灭,荧光信号强度与抗体浓度呈负相关。结论HIV-1 env蛋白可采用RTS系统进行大量表达,分离纯化后的env蛋白具有生物学活性,建立的量子点标记的免疫凝集反应方法检测HIV gp41结果准确,方法简便。
- 杜彤崔大祥刘彬杨浩鲍晨晨高峰
- 关键词：HIV-1ENV基因抗HIV-1艾滋病毒BLOT分析
