国家重点基础研究发展计划(2003CB5155)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- NF-κB启动子调控的pNF-κB-IRES2-EGFP-p27双顺反子真核表达载体的构建及表达分析
- 2008年
- 目的构建并鉴定携带核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)特异性启动子的Flag-p27和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)双顺反子真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),观察其表达。方法采用基因工程技术,经过多步亚克隆后完成能同时表达p27和EGFP基因的NF-κB特异性启动子双转基因真核表达载体。转染体外培养的经H2O2干预的HUVEs,观察EGFP的表达,并通过免疫荧光细胞化学技术观察p27基因的表达。结果经酶切鉴定和测序鉴定,成功地构建真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的HUVEs后,可见部分细胞有EG-FP的表达,并且在EGFP阳性的细胞中p27基因的表达水平明显增高,而未经H2O2处理的对照组转染pNF-κB-IRES2-EGFP-p27后无EGFP的表达。结论NF-κB启动子能够特异性地激活p27基因的表达。EGFP基因可以指示p27基因的表达情况。由NF-κB特异性启动子启动的p27和EGFP双顺反子真核表达载体的构建为进一步研究细胞周期调控与慢性移植物失功(chronic graft dysfunction,CGD)之间的关系,并为进一步寻找慢性移植物失功的基因治疗途径奠定基础。
- 徐逸朱舟吴轲曾宁田学俾陈忠华
- 关键词：双顺反子P27基因
- 含人p27基因的重组腺病毒的构建及鉴定
- 2008年
- 目的:构建并鉴定含有人p27基因和EGFP基因的重组腺病毒载体,并观察其表达。方法利用腺病毒载体系统Adeno-X,通过质粒抽提、电泳、酶切、连接、转化等多种基因工程技术,构建重组腺病毒质粒pAdeno-p27-EGFP;酶切、PCR鉴定重组腺病毒质粒;利用293细胞包装重组腺病毒载体PAd-p27-EGFP,通过荧光倒置显微镜观察EGFP的表达。结果:经酶切和PCR鉴定,成功构建重组腺病毒质粒pAdeno-p27-EGFP,利用脂质体转染人293细胞后,转染腺病毒质粒pAdeno-p27-EGFP可见EGFP表达和细胞致病效应(CPE)。结论:利用腺病毒载体系统Adeno-X成功构建含CMV启动子的Flag-p27和EGFP基因的腺病毒载体,为进一步研究细胞周期调控与慢性移植物失功之间的关系,并为寻找慢性移植物失功的基因治疗的途径奠定基础。
- 徐逸朱舟吴柯陈曦林何文涛曾宁陈忠华
- 关键词：P27腺病毒细胞周期慢性移植肾失功
- 血清蛋白质指纹图谱构建及对慢性移植物肾病病人的早期诊断意义被引量：4
- 2006年
- 目的用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)检测慢性移植物肾病(CAN)患者血清蛋白质图谱,构建CAN血清蛋白质指纹图谱及其对该病的早期诊断作用。方法用SELDI-TOF-MS及弱阳离子交换芯片(CM10)检测24例移植肾功能完全正常的长期存活者(LS)和15例CAN患者的血清蛋白质图谱,并运用软件判别和分析处理数据,筛查特异的蛋白质分子标志物。结果对每份血清样本,质谱系统产生78个有意义的蛋白质峰,18个蛋白质的差异在两者间具有统计学意义(P<0．05),6个蛋白质(质荷比2476．0,3078．7,3190．5,4076．5,4506．0,6178．4)有极其显著差别(P<0．01),以质荷比3078．7为单一分子标志物可区别LS和CAN患者(P=0．0001),它在前者高表达,在后者低表达,其诊断CAN时的敏感性为87．5％,特异性为81．8％,其诊断作用绩效比为0．307。结论SELDI-TOF-MS构建的血清蛋白质指纹图谱在诊断CAN时具有较高的价值。
- 周绍棠阎冀焕杨成曾宁吴轲陈忠华
- 关键词：肾移植肾病血清蛋白质指纹图谱
