江苏省博士生创新基金(CX10B281Z)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- 间质干细胞培养上清对日本血吸虫SEA诱导活化的巨噬细胞株RAW264.7的抑制作用被引量：2
- 2011年
- 目的观察大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)培养上清对日本血吸虫可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)诱导活化的巨噬细胞的抑制作用。方法用5、10、20和40μg/ml SEA分别诱导巨噬细胞株RAW264.7 12 h,或用20μg/ml SEA分别诱导小鼠巨噬细胞株(RAW264.7)4、8、12和24 h后,用实时荧光定量PCR检测α肿瘤坏死因子(TNF-α)的mRNA水平,选择SEA的最佳作用浓度和作用时间。将巨噬细胞分成5组,分别为阴性对照组、SEA组、SEA+MSC上清组(MSC组)、SEA+大鼠肾小管上皮细胞株(NRK-52E)上清组(NRK-52E组)和SEA+DMEM细胞培养基组(DMEM组)。除阴性对照组外,其他各组给予20μg/ml SEA诱导巨噬细胞活化12 h后,MSC组、NRK-52E组和DMEM组换液撤SEA,分别给予MSC培养上清、NRK-52E细胞培养上清和DMEM培养液,继续培养。显微镜观察细胞上清培养12 h后各组细胞形态。实时荧光定量PCR检测细胞上清培养12 h和24 h后TNF-αmRNA水平。蛋白质印迹(Western blotting)分析检测细胞上清培养12 h后转化生长因子β1(TGF-β1)的蛋白表达水平。噻唑蓝比色法(MTT法)测定细胞上清培养24 h和48 h后巨噬细胞增殖情况。结果 SEA活化巨噬细胞的最佳浓度和时间分别为20μg/ml和12 h。镜下观察显示,MSC上清培养12 h后,MSC组与SEA组、NRK-52E组和DMEM组相比,细胞变圆,体积明显较小,伪足较少。MSC上清作用12 h和24 h后,MSC组TNF-αmRNA水平分别为阴性对照组的(1.0±0.4)和(1.0±0.5)倍,显著低于NRK-52E组[分别为(10.4±3.9)和(16.5±5.0)倍(12 h:P<0.05;24 h:P<0.01)]和DMEM组[分别为(6.0±2.1)和(2.4±0.7)倍(均P<0.05)]。MSC上清作用12 h后,MSC组蛋白TGF-β1/GAPDH为0.31±0.10,显著低于NRK-52E组(0.88±0.10,P<0.01)和DMEM组(0.58±0.06,P<0.05)。MSC上清作用48 h后,MSC组吸光度(A490值)为0.22±0.05,与NRK-52E组(0.53±0.02)和DMEM组(0.31±0.03)比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 MSC培养上清能抑制SEA诱导的巨噬细胞株RAW264.7
- 徐会娟钱晖朱伟张徐严永敏张蕾蕾毛飞许文荣
- 关键词：间质干细胞日本血吸虫可溶性虫卵抗原
- 人Nanog基因重组腺病毒载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达
- 2011年
- 目的构建重组人Nanog基因腺病毒载体(Ad-Nanog),转染人脐带间充质干细胞(hucMSCs),用于后续研究。方法设计含有KpnⅠ及XhoⅠ酶切位点的引物,PCR扩增Nanog基因,将扩增产物亚克隆到pAdTrack-CMV穿梭质粒上,经双酶切和基因测序鉴定,重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后,在含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183中同源重组,筛选获得Ad-Nanog重组腺病毒质粒。经PacⅠ酶切线性化,脂质体转染293A细胞,包装和扩增病毒,并感染hucMSCs。结果重组腺病毒质粒经PCR和双酶切鉴定正确,测序结果和设计片段的序列一致。荧光显微镜下观察在感染的hucMSCs中绿色荧光蛋白高效表达。结论成功构建了Nanog腺病毒表达载体,能高效转染hucMSCs,可用于后续转基因的研究。
- 孙靖徐哲钱茜严家来陈圆张徐高硕钱晖许文荣
- 关键词：NANOG脐带间充质干细胞腺病毒载体
- 人脐带间质干细胞的CM-Dil标记及其移植在急性肾损伤大鼠体内的示踪研究被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hucMSCs)用CM-Dil染料标记之后生物学特性及体内定位示踪情况。方法:采用脐带组织块贴壁培养法分离人脐带间质干细胞,用CM-Dil染料标记第3代hucMSCs;采用细胞计数法分析CM-Dil标记后hucMSCs的生长变化情况;通过活体成像仪观察CM-Dil染料标记的hucMSCs移植于急性肾损伤大鼠后的体内定位。结果:CM-Dil染料标记hucMSCs的效率很高;标记后的hucMSCs生长增殖能力没有发生明显变化;体内示踪可以观察到标记的hucMSCs。结论:CM-Dil标记不影响hucM-SCs的生长增殖特征,并且能够在体内示踪,为后续研究提供了实验基础。
- 徐会涛周颖王冰莹毛飞徐会娟许文荣朱伟钱晖
- 关键词：人脐带间质干细胞体内示踪急性肾损伤
