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粪便中人基因组DNA提取技术及其应用被引量：2: 2014年; 无创早期诊断有助于降低大肠癌的致死率并减少受检者的痛苦，粪便DNA检测是进行大肠癌无创早期诊断的重要途径之一，从粪便中提取大量的且高质量的人基因组DNA产物是保证诊断正确性的前提。然而，由于粪便样本的成分十分复杂，使粪便DNA提取较为困难。因此，开发高效的粪便人基因组DNA提取技术，对提高基于粪便DNA检测的大肠癌早期诊断水平起到关键作用。目前，用于粪便人基因组DNA提取方法主要包括两类：粪便DNA直接提取和富集粪便中肠壁脱落细胞后提取。本文就这两类粪便人基因组DNA提取方法进行简要介绍，并对其应用前景进行了展望。; 王勇邹秉杰周国华; 关键词：粪便 DNA 基因组结直肠肿瘤

用于高度降解mRNA样本的非反转录基因表达量测定方法: 2013年; 许多生物样本(如石蜡包埋组织样本)中的mRNA易断裂为小片段,利用传统方法检测较困难。为了测定高度降解的mRNA,本研究针对待测mRNA短片段设计一对探针,当探针与待测模板杂交后,通过连接反应将两条探针5'与3'端相连,连接产物作为PCR扩增模板进行实时荧光定量检测,从而对待测mRNA进行定量测定。以人ACTB基因为待测靶标,通过测定不同浓度的待测靶标及与待测靶标序列不同的RNA片段,分别考察方法的灵敏度与特异性,并检测肺癌石蜡切片样本中ACTB基因的表达量,与传统的反转录定量PCR检测结果进行了对比。本方法的检出限为150 fmol/L,定量线性范围为150 fmol/L～300 pmol/L,并且具有良好的特异性。在对石蜡包埋组织样本中的基因表达量检测时,本方法扩增检测CT值比反转录实时定量PCR小,表明本方法更适合对高度降解的mRNA样本进行定量测定。; 唐晓闻李桂梅邹秉杰刘敏周国华; 关键词：基因表达量实时荧光定量PCR

HIGHLY SENSITIVELY METHODS ALLOW INDIVADUALIZED MEDICINE AT A LOW COST: ＜正＞Efficacy or side-effect of a certain drug may be greatly different among individuals due to the difference ...; Guohua ZHOU; 文献传递

A SIMPLIFIED PYROSEQUENCING PROTOCOL BASED ON LINEAR-AFTER-THE-EXPONENTIAL（LATE）-PCR USING WHOLE BLOOD AS STARTING MATERIAL DIRECTLY: ＜正＞Pyrosequencing is a sequencing-by-synthesis method which is based on the bioluminometric detection of inorg...; Yunlong LIUHui YEZhiyao CHENHaiping WUQingxin SONGBingjie ZOUGuohua ZHOU; 文献传递

不同粪便DNA提取试剂盒及样本储存时间对粪便人基因组DNA提取率的影响被引量：4: 2014年; 目的比较不同粪便DNA提取试剂盒及粪便样本不同储存时间对粪便人基因组DNA提取效率的影响。方法对18例体检健康者使用QIAamp DNA Stool Mini Kit,MO BIO UltraCleanFecal DNA Isolation Kit,E.Z.N.A.Mag Bind Stool DNA Kit 3种粪便DNA提取试剂盒进行粪便DNA提取,通过紫外分光光度法对总DNA产量和纯度进行分析,通过实时荧光聚合酶链反应(PCR)方法对提取产物中结肠腺瘤性息肉病基因进行定量,并比较人基因组DNA提取效率的差异及不同样本储存时间对其影响。结果在3种试剂盒中,QIAamp DNA Stool Mini Kit对人基因组DNA的提取产量最高(平均67.81 ng/g),E.Z.N.A.Mag Bind Stool DNA Kit提取产物纯度最高(A260/A280平均2.07),MO BIO UltraCleanFecal DNA Isolation Kit操作耗时最短(约40 min);粪便样本在-70℃条件下储存30 d内,不同储存时间对总DNA提取效率差异有统计学意义(P<0.01)。结论 QIAamp DNA Stool Mini Kit对粪便人基因组DNA的提取效率最高,且于-70℃储存粪便样本30 d内对人基因组DNA提取效率无影响。; 王勇邹秉杰刘云龙李思勤周国华; 关键词：DNA 粪便

结直肠癌无创筛查技术研究进展被引量：4: 2017年; 结直肠癌和高危腺瘤的早期诊断及治疗,能够大大降低其死亡率。因而,在临床普及结直肠癌筛查有助于遏制该疾病的危害。目前,结肠镜检查是结直肠癌诊断的金标准,但该方法需要肠道准备,且具有侵入性,易造成肠道穿孔等缺点,导致患者依从性差,不利于其作为大规模筛查技术推广实施。近年来非侵入性的结直肠癌诊断方法发展迅速,这类方法主要通过检测粪便或血液样本中与结直肠癌发生相关的生物标志物,为结直肠癌的无创筛查提供了可能。但由于粪便、血液样本的成分复杂,对其中生物标志物的检测技术仍然在不断研究和完善中。本文分别从基于粪便样本和血液样本的检测技术两方面入手,探讨了近年来结直肠癌无创筛查技术的研究进展。; 曹祖聪刘云龙邹秉杰王韵淞周国华; 关键词：结直肠癌早期筛查非侵入性粪便血液

焦磷酸测序中PCR引物与测序引物的设计被引量：8: 2013年; 利用焦磷酸测序技术进行核酸序列测定时,测序信号过低或非特异性信号过高均会导致测序失败。因此,PCR引物与测序引物的设计十分重要。本研究以rs8175347为例,通过设计具有不同多聚酶亲和指数(PPI)的PCR引物,并运用焦磷酸测序测定其扩增产物,考察了PPI值对扩增效率以及测序信号的影响;以rs914232、rs671位点为例,对比不同测序方向以及dNTP的推注顺序,考察了两者对测序结果的影响。结果表明,提高PCR引物的PPI值有助于增强扩增效率与测序结果的信号峰强度,测序方向和dNTP推注顺序的不合理选择会严重干扰部分SNP测序结果的判断。因此,在设计PCR引物时,应将多聚酶亲和指数理论与传统基于解链温度值的引物设计思路相结合,为焦磷酸测序提供高质量的测序模板;在进行定量测序时,还要综合考虑待测位点(SNP)两侧的序列,选择合适的测序方向以及dNTP的推注顺序,使测序结果更加准确。; 叶卉刘云龙邹秉杰武海萍周国华; 关键词：焦磷酸测序 PCR引物

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国家自然科学基金(21275161)