国家高技术研究发展计划(2006AA10A212)
- 作品数：91 被引量：405H指数：10
- 相关作者：李增智黄勃关雄张杰宋福平更多>>
- 相关机构：福建农林大学安徽农业大学中国农业科学院植物保护研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 球孢白僵菌羧基转运蛋白基因RNA干扰的沉默效应被引量：3
- 2010年
- 羧基转运蛋白基因是近年来分离出的新基因,在虫生真菌中可能与穿透昆虫体壁时的能量代谢有关。构建了针对该基因的双链RNA干扰载体,采用芽生孢子转化法将载体质粒转入球孢白僵菌,并通过RT-PCR检测转化前后BbJEN1的表达情况。RT-PCR检测结果显示,球孢白僵菌转化子BbJEN1基因的表达水平显著下降,表明干扰载体具有明显的沉默效应。在两种培养基上,转化子与原始菌株的生长速度和产孢量差异均不显著,而分生孢子萌发则显著滞后于原始菌株。使用马尾松毛虫幼虫对转化子和原始菌株进行生物测定,原始菌株的半致死浓度、半致死剂量和半致死时间分别为2.79×106个孢子/mL、84.12个孢子/mm2和6.49d,而转化子的半致死浓度、半致死剂量和半致死时间则分别增加到1.27×107个孢子/mL、382.92个孢子/mm2和8.09d,毒力显著下降。由此表明BbJEN1基因与球孢白僵菌分生孢子发芽以及毒力均有关。
- 陈珊珊郝蕾蕾周娜李增智
- 关键词：马尾松毛虫基因沉默毒力
- 蛋白质工程在苏云金芽胞杆菌Cry毒素改良中的应用被引量：2
- 2010年
- Bt微生物制剂和转基因抗虫作物已经在全球范围内取得了巨大成功,但是Cry蛋白存在杀虫谱窄、毒力有限以及害虫对Bt毒素的抗性风险上升等诸多问题,将严重制约Bt在未来农业生产中进一步发挥巨大作用。利用理性设计、非理性设计等蛋白质工程技术对Bt Cry蛋白进行改造是解决这些问题的新途径。通过总结蛋白质工程在Cry毒素改良中的应用情况,分析了存在的问题,并对未来发展动向进行了展望。
- 刘明束长龙高继国张杰
- 关键词：蛋白质工程苏云金芽胞杆菌
- 蜡状芽胞杆菌群16S rDNA分析被引量：3
- 2008年
- 蜡状芽胞杆菌群主要包括炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)、蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus)、苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)。GenBank已有这个群的8个菌株完成了全基因组序列测定。对这8株蜡状芽胞杆菌群菌株中98条16S rDNA的序列进行相互BLAST比较,发现在同一基因组内各个16S rDNA拷贝全局相似度最低为96.47%,在不同基因组间16S rDNA局部片段比对最小相似度达到99.72%,对应片段长度也有1 417 bp。这点充分说明,该群的细菌完全共用同一种16S rDNA,根据16S rDNA给细菌分类的特点,它们应该属于同一个种。在亲缘关系上,枯草芽胞杆菌离蜡状芽胞杆菌群最近。
- 邹寰喻子牛孙明
- 关键词：蜡状芽胞杆菌群RDNA
- 苏云金芽胞杆菌重组工程菌研究进展
- 2008年
- 作为一种重要的生防微生物，苏云金芽胞杆菌任实际应用中还存在不少问题，本文回顾了苏云金芽胞杆菌重组工程菌的研究历史，总结了工程菌构建方法技术，许结合国内外动态对工程菌的产业化未来前景进行了展望。
- 刘晶晶张杰黄大昉
- 关键词：苏云金芽胞杆菌
- 苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白Cry1Ba结构域Ⅱ中Loops结构与功能关系研究被引量：6
- 2008年
- 为了明确杀虫晶体蛋白中各个Loop的结构与功能的关系,以及Loop突变对Cry1Ba蛋白杀虫活性的影响,首先通过三维结构模拟以及同源序列分析的方法,找到Cry1Ba蛋白三个结构域及三个Loop相对应的氨基酸片段;然后通过重叠引物PCR将编码Cry1Ba蛋白结构域Ⅱ中的三个Loop进行了相应的突变,共获得了5个突变体M1(Loop1:340WSNTR344—缺失(Cry1A))、M2(Loop2:402Y—G)、M3(Loop2:400GIYLEP405—PSAV(Cry3A))、M4(400GIYLEPIH407—ILGS(Cry1A))、M5(Loop3:472LQSRV476—AGAVYTL(Cry1A))。将这些突变体在大肠杆菌BL21中进行了诱导表达,提取蛋白,分别对小菜蛾进行了生物活性测定。生测结果表明,Loop1的缺失突变M1的毒力,与Cry1Ba(LC500.96μg/mL)相比,显著降低,LC50为35.51μg/mL;在Loop2的突变中,单个氨基酸的突变M2(Y/G)的毒力略有下降(LC50为1.31μg/mL);而另两种突变(M3和M4)对小菜蛾的毒力明显下降,LC50值分别为11.56μg/mL、34.81μg/mL;Loop3的突变M5对小菜蛾的毒力略有提高(LC500.81μg/mL),但差异不显著。对Cry1Ba蛋白突变前后结构与功能之间关系的分析结果表明,Loop区突变对Cry1Ba蛋白的结构和功能影响非常显著;Loop1和Loop2在决定Cry1Ba对小菜蛾的毒性方面起着重要作用。
- 王广君张杰孙东辉宋福平黄大昉
- 关键词：苏云金芽胞杆菌LOOP基因突变
- 高产几丁质酶玫烟色棒束孢菌株筛选及发酵条件优化
- 2013年
- 通过测定几丁质酶活力的方法对来源于不同寄主和采集地的16株玫烟色棒束孢进行筛选,获得活性较高菌株RCEF3304,并对高活力菌株RCEF3304产几丁质酶的pH值、装液量、接种量和温度等发酵条件进行优化研究。结果表明高酶活菌株产酶最适条件:胶体几丁质2%,NaNO33%,Mg2+0.05%,培养基初始pH值6.0,接种量12%,100 mL装液量为10 mL,温度25℃和培养时间36 h;最适发酵工艺条件下,几丁质酶酶活OD值达到0.486,比优化前发酵水平提高了128%。
- 汤强张爽刘玉军李增智黄勃
- 关键词：几丁质酶菌株筛选发酵条件
- 用gfp基因标记法研究金龟子绿僵菌在玉米根际的定殖动态被引量：7
- 2009年
- 利用草胺磷抗性基因bar为筛选标记,将绿色荧光蛋白基因(gfp)转入载体pbarGPE1,得到了组成性表达载体pGPE-GFP,并转入金龟子绿僵菌RCEF3377,获成功表达。用含有gfp基因的金龟子绿僵菌孢子粉配制种衣剂,对玉米种子包衣。于玉米苗期对根际定殖情况进行定期取样观测。结果表明,与非根际土壤相比,在根际土壤中被标记的绿僵菌带菌量不仅最大,而且在播种后10d数量达最大,20～30d内数量即不再显著变动。相比之下,非根际土壤中的带菌量不仅极显著少于根际土壤,且随时间的延长明显降低;在表层土中的带菌量很低,亦随时间的延长显著降低。表明应用该种衣剂剂型,金龟子绿僵菌孢子在玉米根际有较高活力和定殖效果。
- 杨震元赵军郝蕾蕾黄德见黄勃李增智
- 关键词：绿色荧光蛋白基因种衣剂金龟子绿僵菌
- 球孢白僵菌单孢子分离株在继代培养过程中菌落局变的遗传分析被引量：13
- 2010年
- 研究了球孢白僵菌Beauveria bassiana单孢株继代过程中的菌落局变现象,并通过AFLP分析了角变子与原菌株间在分子水平上的差异。结果表明,野生型出发菌株Bb13的单孢分离株13S5和13S8在继代培养过程中均发生生长速率加快和产孢量下降现象。13S5在前5代,13S8在前6代产孢量有所下降但不显著,至第10代时产孢量比第1代分别下降了81.7%和69.0%。菌株角变现象在继代培养5-6代后表现明显,而13S8角变子出现的频率更高。AFLP指纹图谱分析表明,用20个引物组扩增出的98个位点中,两个角变子与野生型菌株间有12条差异条带,变异率达12.2%。由此证明单孢子分离株在继代培养中发生菌落局变后遗传物质已产生了变异。
- 徐金柱黄勃李增智
- 关键词：球孢白僵菌AFLP产孢量
- 污水、污泥中苏云金杆菌的分离及其基因型鉴定被引量：11
- 2010年
- 从40个样品中分离到112株芽孢菌,其中有2株为Bt,占1.8%;从城市污水和啤酒厂生物处理系统中分别分离到1株Bt:采用cry1-cry11、cyt、vip3A、aiiA和inhA引物对BRC-WLY1和BRC-WLY2进行PCR扩增,发现2株Bt含有cry1(cry1Ag、cry1Ba、cry1Gb、cry1La)、cry2Ac、vip3A、aiiA杀虫基因,其中BRC-WLY1还含有inhA基因.
- 吴丽云何金清周勇陈国荣张琳张永嵘吴松清关雄
- 关键词：苏云金芽孢杆菌基因鉴定
- 实时荧光定量PCR检测球孢白僵菌热休克蛋白基因hsp70在几种胁迫条件下的表达被引量：9
- 2009年
- 本研究运用Realtime-PCR技术,对球孢白僵菌Beauveria bassiana hsp70基因在不同胁迫条件下的表达情况进行了检测。从mRNA转录水平探讨了不同胁迫条件对球孢白僵菌hsp70基因表达的影响。结果表明:38℃高温胁迫下,30min时表达量达到最高峰,为对照样品的10.18倍。随后表达量开始下降,至180min时,其表达量降为最低,为对照样品的2.85倍;4℃低温胁迫下,2h检测到hsp70的表达量下降至最低点,为对照样品的0.25倍。随后表达量开始回升,至10h表达量始终维持在对照样品的1.4-1.5倍左右;紫外胁迫下(波长253.7nm),3min后hsp70的表达量快速上升至最高峰,为对照样品的2.33倍。随后表达量迅速下降,至60min表达量始终维持在对照样品的0.2倍左右。因此推测,hsp70基因在球孢白僵菌抵抗高温、低温和紫外三种胁迫方面都可能具有重要作用。同时研究结果也表明,球孢白僵菌hsp70基因启动子在逆境下可引导基因高效表达,因而在抗逆工程菌株构建方面可能具有重要的应用价值。
- 谢翎陈红梅汤强蒲顺昌李增智黄勃
- 关键词：昆虫病原真菌TAQMAN探针
