国家自然科学基金(81072845)
- 作品数：13 被引量：58H指数：6
- 相关作者：谢学军张梅徐秒宋明霞陈璐更多>>
- 相关机构：成都中医药大学广州中医药大学广州中医药大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金中山市科技局资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 丹参脂溶性成分对大鼠视网膜Müller细胞的毒性作用研究被引量：6
- 2013年
- 目的研究丹参脂溶性成分对大鼠视网膜Müller细胞的毒性作用。方法以不同浓度的丹参脂溶性成分及丹参酮ⅡA对照品分别干预体外纯化培养的大鼠视网膜Müller细胞48 h,采用CCK-8法检测其细胞增殖抑制率。结果测得丹参脂溶性成分及丹参酮ⅡA对照品对大鼠视网膜Müller细胞增殖均有一定抑制作用,且具有剂量依赖性。CCK-8法测得丹参脂溶性成分及丹参酮ⅡA对照品的IC50分别为2.181、6.176μg·mL-1,给药20μg·mL-1时,测得细胞增殖抑制率分别为75.8%、58.7%。结论丹参脂溶性成分及丹参酮ⅡA对照品对大鼠视网膜Müller细胞均有一定毒性,所测IC50值为进一步筛选研究丹参脂溶性成分治疗糖尿病性视网膜病变作用机制的有效浓度提供了一定的实验依据。
- 徐秒张梅姚红娥陈璐谢学军
- 关键词：视网膜MÜLLER细胞细胞毒性糖尿病性视网膜病变
- 体外培养视网膜细胞高糖损伤模型的研究进展被引量：2
- 2011年
- 尽管体内实验更接近真实状态,但体内实验影响因素较多,受多种因素干扰。建立合理的体外培养视网膜细胞高糖损伤模型,对进一步深入研究糖尿病视网膜病变的病理特性、药物作用机制和功能重建具有重要的作用。本文拟对体外培养的视网膜血管内皮细胞、视网膜色素上皮细胞、视网膜Müller细胞以及视网膜神经节细胞高糖损伤模型的建立进行综述。
- 米珍谢学军曹兴伟陈娟
- 关键词：视网膜血管内皮细胞视网膜色素上皮细胞视网膜MÜLLER细胞葡萄糖浓度体外模型
- 人参皂苷对糖基化终末产物条件下视网膜Müller细胞活力的影响被引量：8
- 2014年
- 目的:探讨人参皂苷对糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)条件下视网膜Müller细胞活力的影响。方法:以改良酶消化法培养SD大鼠视网膜Müller细胞,将纯化培养的视网膜Müller细胞分别置于低剂量AGEs(终质量浓度为75 mg·L-1)及高剂量AGEs(终质量浓度为150 mg·L-1)下进行培养,并分别以人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1及人参皂苷提取物干预。在干预24,48,72 h后以酶联免疫吸附法测定各组细胞外液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的漏出量,以推测Müller细胞活力。结果:低AGEs组24,48 h的LDH漏出量较正常对照组均无明显差异,但72 h的LDH漏出量较正常对照组增多(P<0.05);高AGEs组各时段LDH漏出量均较正常对照组以及低AGEs组增多(P<0.05);人参皂苷Rg1,Re,Rb1及人参皂苷提取物均能减少低AGEs组48,72 h的LDH漏出量(P<0.05),减少高AGEs组各时段的LDH漏出量(P<0.05)。结论:AGEs能明显增加视网膜Müller细胞膜的通透性,降低细胞活力,并且与干预的时间、浓度有关;人参皂苷Rg1,Re,Rb1及人参皂苷提取物能降低本实验中AGEs条件下Müller细胞膜的通透性、提高Müller细胞膜稳定性,增强细胞活力,尤其以人参皂苷提取物效果显著。
- 姚红娥张梅徐秒陈璐谢学军
- 关键词：人参皂苷糖基化终末产物视网膜MÜLLER细胞乳酸脱氢酶
- 人参须根中皂苷类成分提取工艺的研究被引量：3
- 2014年
- 目的:研究人参须根中皂苷类成分的最佳提取工艺。方法:比较了乙醇回流提取法和超声波提取法提取人参皂苷的差异。在此实验基础上,通过单因素实验和正交实验,筛选出超声波法从人参须根中提取皂苷类成分的最优提取工艺。结果:人参须根中皂苷类成分的最优提取条件为50%乙醇,提取2次,每次40min,提取温度40℃,料液比为1:20。结论:该提取方法操作简单,有效成分的提取率高。
- 姚红娥张梅徐秒陈璐谢学军
- 关键词：人参皂苷
- 人参须根中皂苷类成分的指纹图谱研究被引量：4
- 2014年
- 目的:采用高效液相色谱法研究不同产地人参须根中皂苷类成分的指纹图谱。方法:PhenomenexC18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相:A为乙腈,B为水,梯度洗脱,柱温:35℃,检测波长:203nm。结果:人参须根中皂苷类成分指纹图谱检出13个共有峰,但各批药材相同成分的含量差异较大,其精密度、稳定性、重复性均良好。结论:该方法可为人参须根的质量控制提供参考,同时为课题后期研究奠定基础。
- 姚红娥张梅徐秒陈璐谢学军
- 关键词：人参皂苷高效液相色谱法指纹图谱
- 丹参脂溶性成分对AGEs条件下视网膜Müller细胞HIF-1及谷氨酰胺合成酶表达的影响被引量：9
- 2017年
- 目的:研究丹参脂溶性成分对体外纯化培养的大鼠视网膜Müller细胞在糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)条件下乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的漏出量、低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)及谷氨酰胺合成酶表达的影响。方法:以5μg/ml的丹参脂溶性成分及5μg/ml丹参酮IIA分别干预视网膜Müller细胞,以ELISA法分别测定在正常及高、低浓度AGEs(150μg/ml、75μg/ml)条件下LDH漏出量以及HIF-1、谷氨酰胺合成酶的表达情况。结果:在正常及AGEs条件下,各组Müller细胞LDH的漏出量48 h较24 h明显减少,72 h较48 h明显增多,丹参脂溶性成分及丹参酮IIA组LDH漏出量较空白对照组小;在AGEs条件下,空白对照组HIF-1表达量较正常条件下显著增高;谷氨酰胺合成酶的表达量显著低于正常条件。丹参酮IIA、丹参脂溶性成分组与空白对照组相比,均能显著抑制HIF-1表达,增加谷氨酰胺合成酶的表达。结论:各实验组Müller细胞活力均呈现先升高、后降低,在48 h时Müller细胞膜活力最高。因此选择48 h作为最佳干预时间。AGEs能明显提高大鼠视网膜Müller细胞HIF-1的表达,抑制谷氨酰胺合成酶的表达。丹参脂溶性成分及丹参酮IIA均能抑制AGEs条件下大鼠视网膜Müller细胞HIF-1的表达,增强谷氨酰胺合成酶的表达,从而降低血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的生成量以及谷氨酸(Glutamate,Glu)的浓度,研究结果为进一步探讨丹参脂溶性成分治疗糖尿病性视网膜病变作用机制提供了一定的实验依据。
- 刘美琳徐秒董佳悦张梅谢学军
- 关键词：丹参脂溶性成分糖基化终末产物视网膜MÜLLER细胞谷氨酰胺合成酶
- 补肾活血中药血清对缺氧条件下纯化培养视网膜神经节细胞的保护作用及其机制被引量：6
- 2014年
- 背景 糖尿病视网膜病变（DR）的早期损害是高糖和缺氧导致的视网膜神经细胞的结构和功能性损伤.研究表明含补肾活血中药的血清能减轻缺氧和高糖状态下神经兴奋性毒性物质谷氨酸的毒性作用,但是否可提高神经兴奋抑制性物质甘氨酸的释放,从而对视网膜神经细胞发挥保护作用尚不清楚. 目的 探讨补肾活血中药血清对体外缺氧条件下纯化培养的视网膜神经节细胞（RGCs）的保护作用. 方法 采用中药或生理盐水对SD大鼠每日灌胃1次,7d后腹主动脉取血离心过滤提取正常大鼠血清和含补肾活血中药的大鼠血清.体外两步法纯化培养SD乳鼠的RGCs,用免疫荧光染色法对培养的RGCs进行鉴定.将RGCs置于96孔培养板中培养72 h后分为正常对照组（20％正常SD大鼠血清培养）、缺氧组（1.0 mmol/L连二亚硫酸钠培养）、正常中药干预组（20％ SD大鼠含药血清培养）、缺氧中药干预组（1.0 mmol/L连二亚硫酸钠＋20％SD大鼠含药血清干预）.于培养后24、48、72 h用L-8800型全自动氨基酸分析仪测定各组细胞外液中谷氨酸及甘氨酸的质量浓度,用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒测定各组细胞培养上清液LDH的漏出量.结果 培养的细胞荧光染色阳性.细胞培养24 h,正常对照组谷氨酸、甘氨酸质量浓度和LDH的含量分别为（0.080 5±0.001 0）mg/L、（0.055 4±0.001 5） mg/L及（1 626.03±122.10） μmol/（min·L）,而缺氧组为（0.022 5±0.001 1）mg/L、（0.014 6±0.001 1）mg/L及（1 458.68±94.23） μmol/（min·L）,均明显低于正常对照组,差异均有统计学意义（q=-3.53,P=0.00；q=-2.45,P=0.00；q=-2.98,P=0.02）.细胞培养48 h,缺氧组的LDH含量及甘氨酸质量浓度均明显高于正常对照组,差异均有统计学意义（q=2.55,P=0.01；q=4.48,P=0.00）；细胞培养72 h,缺氧组谷氨酸和甘氨酸质量浓度均明显高于正常对照组,差异均有统计学意义（q=2.45,P=0.00；q=3.72,
- 万李谢学军马荣
- 关键词：中药补肾活血视网膜神经节细胞缺氧
- 高糖及糖基化终末产物对视网膜Müller细胞缺氧诱导因子-1α介导缺氧信号通路的影响被引量：11
- 2013年
- 目的探讨高糖以及糖基化终末产物(advanced glycationend products,AGEs)对体外培养的视网膜Müller细胞低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1α介导缺氧信号通路的影响。方法采用改进的酶消化法培养新生5-7 d SD大鼠视网膜Müller细胞,纯化培养至第2代后,以2×106mL-1密度接种于48孔培养板中,根据培养液中葡萄糖及AGEs含量不同,分为正常组、模拟高糖组(葡萄糖终浓度为50 mmol·L-1)、低AGEs及高AGEs组(培养液AGEs终浓度分别为50 mg·L-1、100 mg·L-1),每组设6个复孔,干预48 h后,以ELISA法测定细胞培养上清液中HIF-1α、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达量以及脯氨酸羟化酶(proline hydroxylase domain,PHD)1、2、3的活性;以RT-PCR测定Müller细胞HIF-1αmRNA及VEGF mRNA相对内参的表达量。结果高AGEs组HIF-1α蛋白表达量为(3.248±0.404)μg·L-1,明显高于正常组的(2.577±0.158)μg·L-1及高糖组的(2.600±0.131)μg·L-1,差异均有统计学意义(均为P<0.05);低AGEs组HIF-1αmRNA相对表达量为3.205±0.865,明显高于高糖组的2.438±0.444及高AGEs组的1.935±0.191,差异均有统计学意义(均为P<0.05);正常组VEGF蛋白含量和VEGF mRNA的相对表达量分别为(532.249±19.922)μg·L-1和1.348±0.314,均低于高糖组的(566.661±24.979)μg·L-1和2.265±0.677、低AGEs组的(590.565±29.725)μg·L-1和2.001±0.574及高AGEs组的(593.646±16.339)μg·L-1和2.063±0.759,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。正常组PHD1活性为(99.969±11.066)μg·L-1,高于高糖组的(80.987±5.910)μg·L-1、低AGEs组的(88.809±6.303)μg·L-1及高AGEs组的(75.519±4.914)μg·L-1,而低AGEs组PHD1活性高于高AGEs组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);PHD2活性正常组为(131.266±2.614)μg·L-1,低于低AGEs组的(142.896±8.323)μg·L-1及高AGEs组的(149.998±15.013)μg·L-1,差异均有统计学意义(均为P<0.05);PHD3在各组之间差异均无统计学意义(P=0.066)。结论 AGEs比高
- 宋明霞谢学军万李方杨张梅
- 关键词：糖基化终末产物视网膜MÜLLER细胞低氧诱导因子-1Α
- 人参皂苷提取物对大鼠视网膜Müller细胞的影响被引量：7
- 2014年
- 目的研究人参皂苷对体外纯化培养大鼠视网膜Müller细胞的影响,为人参治疗糖尿病性视网膜病变(DR)的物质基础研究筛选合适的浓度。方法用不同浓度的人参皂苷提取物及人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品分别干预体外纯化培养的大鼠视网膜Müller细胞48 h,MTT法检测细胞增殖抑制率。结果测得人参皂苷提取物及人参皂苷Re、Rg1、Rb1对照品的IC50分别为0.618,0.489,0.653,0.553 mg/ml,给药浓度为1 mg/ml时,测得最高细胞增殖抑制率分别为56.8%,71.0%,59.4%,68.0%。结论人参皂苷提取物及人参皂苷Re、Rg1、Rb1对照品对大鼠视网膜Müller细胞均有一定抑制作用,且具有剂量依赖性,所测IC50值为进一步研究人参皂苷提取物治疗DR作用机制的有效浓度提供依据。
- 姚红娥张梅徐秒陈璐谢学军
- 关键词：人参皂苷细胞培养
- 补肾活血中药复方对AGEs及缺氧状态下体外纯化培养视网膜Müller细胞活力的影响被引量：2
- 2016年
- 目的观察补肾活血中药对体外晚期糖基化终末产物(AGEs)及缺氧条件下视网膜Müller细胞活力的影响。方法采用SD大鼠制备补肾活血中药含药血清和空白血清,以终浓度为1 mmol/L的连二亚硫酸钠制作细胞缺氧环境,以终浓度50 mg/L的AGEs作为低AGEs条件,终浓度100 mg/L的AGEs作为高AGEs条件,将体外纯化培养的P2代视网膜Müller细胞分为6组,分别置于加入空白血清、中药含药血清、空白血清+低AGEs+连二亚硫酸钠、空白血清+高AGEs+连二亚硫酸钠、中药含药血清+低AGEs+连二亚硫酸钠、中药含药血清+高AGEs+连二亚硫酸钠的DMEM培养基中,培养48 h后检测各组乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,比较差异。结果 (1)低AGEs+缺氧组较正常对照组LDH值有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);高AGEs+缺氧组较正常对照组LDH值明显升高,其差异有统计学意义(P<0.05)。(2)正常中药干预组LDH数值与正常对照组接近,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)两组不同剂量AGEs+缺氧中药干预组LDH漏出量均较对应的低、高AGEs+缺氧组明显降低,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AGEs及缺氧条件可导致体外纯化培养的大鼠视网膜Müller细胞细胞膜稳定性下降,通透性增加,细胞活力降低,补肾活血中药含药血清可提高AGEs及缺氧条件下视网膜Müller细胞活力,这可能是补肾活血中药防治糖尿病性视网膜病变(DR)的机制之一。
- 秦伟谢学军李志英杨宇琦宋明霞曹新伟马殿伟荣素然陈一兵王雪菁
- 关键词：补肾活血MULLER细胞糖基化终末产物缺氧
