重庆市自然科学基金(9266)
- 作品数：11 被引量：41H指数：5
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- 甘蓝自交不亲和决定因子的体外表达和相互作用的检测被引量：9
- 2009年
- S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)分别为甘蓝自交不亲和(self-incom patibility,SI)信号传导的雌雄决定因子。为了深入研究两者的作用机理和进行人工调控,本研究以结球甘蓝ZQ为材料,利用pET.NusA融合蛋白表达系统,将包含SRK胞外域和跨膜域的mSRK蛋白和SCR蛋白在大肠杆菌BL21中融合表达,经SDS-PAGE电泳检测表达出融合蛋白大小分别约为116kD和74kD。进一步将两融合蛋白进行体外相互作用的检测,结果表明mSRK与SCR蛋白能够相互结合形成稳定的复合体,这为下一步实现SRK-SCR复合体聚合与解离的人为调控提供了技术平台。
- 杨洋高启国宋明牛义汤青林朱利泉王小佳
- 关键词：结球甘蓝自交不亲和
- 甘蓝染色体及伸长DNA纤维制备技术的研究被引量：2
- 2009年
- 以甘蓝根尖、花药、黄化苗等为材料,初步建立了甘蓝有丝分裂前中期染色体、减数分裂粗线期染色体以及伸长DNA纤维等3种具有不同空间分辨率的靶DNA载体的制备技术.结果表明:通过变温处理可以有效提高前中期染色体分裂相比率;采用0.002 mol/L 8-羟基喹啉20℃预处理1 h、2%纤维素酶和2%果胶酶混合液37℃酶解约2 h、0.075 mol/L氯化钾25℃低渗30 min,制备的前中期染色体效果最佳;2%纤维素酶和2%果胶酶混合液37℃酶解约3 h,可获得伸展良好、背景干净的粗线期染色体;分子梳理法与移动界面法相比,前者制备的伸长DNA纤维效果较好.此方法的建立为荧光原位杂交技术在甘蓝相关研究领域的应用打下了坚实的基础.
- 荣小营朱利泉王永王小佳
- 关键词：甘蓝染色体制片
- 甘蓝自交不亲和基因MLPK与SSP的FISH定位被引量：6
- 2009年
- 利用FISH技术,对自交不亲和基因MLPK与SSP在甘蓝有丝分裂前中期染色体、减数分裂早粗线期染色体以及伸长DNA纤维等3种分辨率水平的靶DNA载体上进行物理定位。结果表明,在有丝分裂前中期,MLPK探针信号位于一对近中着丝粒同源染色体的短臂中部,距着丝粒的百分距离约为53.41±3.16;SSP探针信号位于一对具有随体的近端着丝粒同源染色体的长臂端部,距着丝粒的百分距离约为78.36±4.26。综合3种载体上的FISH结果表明,MLPK与SSP在甘蓝染色体组中可能都只有一个同源序列座位,具有在单倍体基因组中的单拷贝性。重复FISH杂交表明,MLPK与5SrDNA位于同一对染色体。依据Armstrong的核型分析标准,初步判断MLPK与SSP可能分别位于甘蓝的2号和7号染色体,与S位点不存在连锁关系。另从比较基因组学角度对定位结果进行了讨论。
- 荣小营朱利泉王永高启国陈晓丹杨洋王小佳
- 关键词：甘蓝荧光原位杂交自交不亲和性
- 甘蓝2号染色体的高分辨率5S rDNA荧光原位杂交被引量：3
- 2009年
- 【目的】羽衣甘蓝5SrDNA的染色体定位和拷贝数分析,为进一步利用FISH进行2号染色体基因定位和细胞遗传图谱构建奠定基础。【方法】以羽衣甘蓝为材料,采用荧光原位杂交技术将DIG标记的5SrDNA探针定位于不同分辨率的绒毡层细胞中期染色体、粗线期染色体以及伸长DNA纤维上。【结果】在中期染色体和粗线期染色体上,都同时获得3个杂交信号位点(a、b、c),且位于2号染色体的长臂近着丝粒区域,其信号强度为b>a>c;而在伸长DNA纤维上,出现了3种不同长度的念珠状长链(a、b、c),其物理大小分别为257、359和134kb,这3种长链分别与3个信号位点形成一一对应关系。【结论】在羽衣甘蓝2号染色体上存在3个串联重复位点,粗略估算出3个5SrDNA位点的拷贝数分别为510、712和266。
- 王永朱利泉荣小营陈晓丹唐章林王小佳
- 关键词：羽衣甘蓝RDNA荧光原位杂交
- 芸薹属A基因组DNA封阻下的C染色体组核型分析
- 为了探索一种高效可靠的芸薹属植物核型分析方法,本文以甘蓝和白菜为实验材料,分别提取甘蓝基因组 DNA 用地高辛标记为探针,提取白菜基因组 DNA 作为封阻剂,对甘蓝有丝分裂中期染色体进行原位杂交,每对同源染色体上显示出了...
- 陈晓丹王永卢军朱利泉王小佳
- 关键词：甘蓝基因组原位杂交核型分析
- 甘蓝自交不亲和信号传导中THL1和SRK相互作用的体外检测被引量：5
- 2008年
- 在甘蓝自交不亲和信号传导中SRK和THL1之间可能存在相互作用。为进一步证实该相互作用,以甘蓝E1为材料,采用RT-PCR技术扩增了THL1和SRK激酶结构域(记为SRKE1)编码序列,构建了THL1原核表达质粒pET43.1-THL1,SRKE1原核表达质粒pET431-SRKE1和真核表达质粒pPIC9K-SRKE1,分别在宿主菌大肠杆菌BL21和毕赤酵母GS115中进行表达。THL1融合蛋白经胰岛素检测,表明表达的THL1有氧化还原活性。建立了体外检测蛋白质相互作用的新方法,并用该方法对THL1与SRKE1的相互作用进行了检测,结果表明THL1可与SRKE1相互作用并形成稳定的复合体,这为深入分析THL1与SRK相互作用机理提供了理论和技术基础。
- 高启国宋明牛义杨昆朱利泉王小佳
- 甘蓝自交不亲和信号传导元件ARC1的体外表达及其与SRK相互作用验证被引量：3
- 2009年
- 在甘蓝自交不亲和信号传导中ARC1和上游因子SRK之间可能存在相互作用。为进一步证实该相互作用,以甘蓝E1为材料,采用RT-PCR技术扩增ARC1的编码序列,构建ARC1原核表达质粒pET43.1a-ARC1,转化宿主菌大肠杆菌BL21,通过SDS-PAGE检测该蛋白的表达。利用免疫共沉淀原理及pET43.1a-ARC1融合蛋白序列中的6×His标签与Ni+结合的特点建立了体外检测蛋白质相互作用的新方法,并用该方法对ARC1与SRK的相互作用进行了检测。结果表明,在体外ARC1能与SRK相互作用并形成复合体,这为深入分析ARC1与SRK相互作用机理以及探讨ARC1与下游传导元件的相互作用提供了理论和技术基础。
- 牛义王志敏高启国宋明王小佳朱利泉
- 关键词：甘蓝信号传导
- 甘蓝THL1真核表达载体构建及其蛋白质结构预测被引量：1
- 2008年
- THL1是参与甘蓝自交不亲和性信号传导的重要调控因子之一.实验从"E"甘蓝柱头组织中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增THL1编码序列,将其末端加"A"后与pMD18-T载体连接,转化E.coli DH5α.选阳性克隆提取质粒,经EcoRⅠ/NotⅠ双酶切后,将目的片段亚克隆至真核表达载体pPIC9K,再转化至E.coli DH5α.经菌落PCR鉴定、酶切鉴定和生物信息学分析表明,THL1正确插入了载体pPIC9K.首次成功构建了真核表达载体pPIC9K-THL1,并进行了THL1蛋白质结构预测,这为深入研究THL1在甘蓝自交不亲和性信号传导中的作用奠定了基础.
- 孟繁敏高启国朱利泉王小佳
- 关键词：自交不亲和性蛋白质结构
- 1种新的DAHPS酶活性测定方法的探索被引量：1
- 2006年
- 探索并首次建立了采用糖脎硫酸显色法测定3-脱氧-D-阿拉伯-庚酮糖酸7-磷酸合酶(DAHPS)酶活性的方法,即赤藓糖-4-磷酸与苯肼反应生成糖脎,而糖脎在加入硫酸显色后,在418 nm处有特征峰,其浓度和吸收值有良好的线性关系,表观摩尔消光系数ε为2.25×104L/mol/cm,最小检出限为0.60 nmol。通过实验证明,此法是1种操作简便、结果准确的DAHPS酶活性测定方法,可用于粗酶液活性的测定。
- 王永朱利泉李加纳
- 关键词：显色法比活力
- 甘蓝MLPK基因的克隆与序列分析被引量：10
- 2006年
- 采用PCR、RT-PCR以及其他分子生物学方法,以甘蓝基因组DNA和柱头cDNA为模板对MLPK基因进行扩增克隆,首次得到长度分别为1 615 bp和1 294 bp的基因片段。序列分析表明,甘蓝MLPK与芜菁MLPK的cDNA序列相似性达98%,前者的内含子数为4个,比后者少了3个;同时,在前者内含子中发现了不同于典型的GU-AG规则的新的序列,即第34、个内含子5′端碱基是TA、CG,3′端碱基为CAGG、GT,推测甘蓝MLPK的mRNA具有独特的剪切机制。这为甘蓝自交不亲和分子机理研究提供了新内容。
- 赵永斌朱利泉王小佳
- 关键词：自交不亲和信号传导内含子剪切
