天津市科技支撑计划(09ZCKFSH01000)
- 作品数：1 被引量：6H指数：1
- 相关作者：王敏刘扬吕彤吴洽庆任杰更多>>
- 相关机构：天津科技大学中国科学院天津工业生物技术研究所更多>>
- 发文基金：天津市科技支撑计划中国科学院知识创新工程重要方向项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 烯酮还原酶基因的克隆与优化表达被引量：6
- 2011年
- 烯酮/酯还原酶可以专一性地还原烯酮/酯中的碳碳双键,并引入两个手性中心,是手性化合物生物催化合成的重要酶类之一;在使用烯酮/酯还原酶进行全细胞手性分子生物催化合成中,其他还原酶的存在常导致副反应的产生.为研究烯酮/酯还原酶的理化性质、底物的专一性、产物的手性特点等,需要经过纯化的烯酮/酯还原酶.为此,根据烯酮还原酶(Enoate reductase,ERs,EC 1.3.1.31)的基因序列设计引物,以丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)ATCC824基因组DNA为模板,通过PCR扩增技术得到了目标酶的基因,目的片段全长为1 995 bp,共编码664个氨基酸,相对分子质量为73×103.将烯酮还原酶基因连接到pET-32a(+)上,构建表达质粒pET-32a(+)-ERs,并成功在Escherichia coli Rosetta(DE3)pLysS中表达.在摇床上优化的表达条件为:诱导温度为18℃,诱导起始时菌体D600 nm为0.6～0.8,转速为100 r/min,诱导剂IPTG浓度为0.1 mmol/L,诱导培养时间为12 h,表达的烯酮还原酶大部分以可溶性形式存在于菌体内.
- 吕彤刘扬赵青任杰王敏吴洽庆朱敦明
- 关键词：丙酮丁醇梭菌
