国家自然科学基金(30370795)
- 作品数：11 被引量：20H指数：3
- 相关作者：何淑雅李斌元马云闵凌峰李洁更多>>
- 相关机构：南华大学长治医学院更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 壮族人群脆性X综合征中不稳定遗传序列的研究被引量：1
- 2005年
- 目的研究湖南省壮族人群FraX中不稳定DNA序列的多态性,建立一种快速筛查FraX中FMR-1动态突变的方法,为提高遗传咨询和诊断水平奠定基础。方法采用经典的PCR-Southernblot法对156例X染色体FRAXA位点(CGG)n重复序列拷贝数进行测定并与PCR-序列分析胶银染法进行比较。结果(CGG)n重复序列范围为6～57,高峰为29;发现一男性携带者,CGG重复数为57;PCR-序列分析银染法结果与PCR-Southernblot法结果完全一致,从PCR扩增到产物检测只需4,5h即可完成。结论壮族人群(CGG)n频率分布高峰为29,其次为27,30;PCR-序列分析胶银染法快速、直接、简便、实用,适合脆性X综合征的大规模群体筛查。
- 马云何淑雅李斌元刘四春王桂良闵凌峰
- 关键词：脆性X综合征三核苷酸重复基因诊断
- Battenin相互作用蛋白的筛选与初步鉴定被引量：3
- 2005年
- 目的寻找Battenin相互作用蛋白的筛选方法,并对筛选出的Battenin相互作用蛋白进行初步鉴定。方法将编码Battenin相互作用蛋白肽段的cDNA序列与plexA质粒的DNA结合结构域基因重组作为诱饵,应用MATCHMAKERLexA酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选与Battenin相互作用蛋白再发生相互作用的蛋白质的cDNA,并进行生物信息学分析。结果从胎脑cDNA文库中筛选得到7个阳性克隆,其中一个基因与人TEGT基因有99%的同源性,TEGT编码蛋白为Bax抑制子1。结论Battenin相互作用蛋白与Bax抑制子1或类似物相互作用,Bax抑制子1具有反式调控因子特性,二者都可能参与基因表达调控。
- 李斌元王桂良马云肖卫纯李洁孙春莉闵凌峰虞佳Nanbert Zhong何淑雅
- 关键词：分子生物学蛋白质相互作用酵母双杂交
- 酵母三杂交系统的研究进展被引量：1
- 2006年
- 蛋白质与RNA分子之间的相互作用为生命活动的重要基础。由于蛋白质和RNA分子结合方式的复杂性,局限了蛋白质和RNA相互作用的研究。随着酵母三杂交系统的出现,蛋白质-RNA相互作用的研究也将步入一个新的时期。本文着重介绍了酵母三杂交系统的原理、应用、局限性及其改进,假阳性结果的对策,并展望了该系统进一步的发展。
- 闵凌峰何淑雅
- 关键词：酵母三杂交系统
- FXR2酵母双杂交饵载体的构建及酵母菌转化被引量：1
- 2005年
- 目的构建FXR2酵母双杂交系统的“饵”质粒,并转化酵母菌,为筛选FXR2P互作蛋白作基础。方法提取pMD18-T-FXR2,酶切后将FXR2基因连接到MATCHMAKERLexATwo-HybridSystem中的plexA质粒上,得到“诱饵”(Bait)-plexA-FXR2,导入大肠杆菌扩增,筛选阳性克隆并提取重组Bait质粒,再转入酵母菌EGY48(p8op-lacZ)。结果通过遗传学方法筛选得到构建成功的plexA-FXR2;通过营养缺陷筛选,证明Bait重组质粒转入酵母菌中。结论成功构建Bait质粒并使酵母菌转化。
- 李斌元何淑雅王桂良马云孙春莉肖卫纯李洁闵凌峰彭丹妮Nanbert Zhong
- 关键词：脆性X综合征酵母双杂交
- 利用酵母双杂交系统筛选与FXR1P相互作用的蛋白被引量：3
- 2009年
- 目的筛选FXR1P相互作用蛋白,探讨FXR1P生物学功能。方法应用酵母双杂交技术,构建诱饵表达载体pGBKT7/FXR1,转化酵母菌AH109,与转化了人胎脑cDNA文库的酵母菌Y187交配筛选阳性克隆并测序。结果重组表达载体pGBKT7/FXR1构建成功;从人胎脑cDNA文库中筛选出5个与FXR1P结合的蛋白基因,分别与5种已知的编码蛋白基因序列同源:胞苷一磷酸-N-乙酰神经氨酸合成酶(CMAS)、铁蛋白重链多肽1(FTH1)、高尔基体自身抗原golgina亚类4(GOLGA4)、17-β羟类固醇脱氢酶1(HSD17B1)、绒毛膜生长催乳激素1(CSH1)。结论为进一步研究FXR1P的功能及脆性X综合征发病机制提供新的线索。
- 苏娇何淑雅李斌元马云喻长顺
- 关键词：酵母双杂交脆性X综合征蛋白相互作用
- FTH1真核表达载体的构建与鉴定
- 2011年
- 目的构建携带人铁蛋白重链多肽1(FTH1)基因的真核表达载体pCMV-Myc-FTH1,为研究FXR1P与FTH1体内相互作用奠定基础。方法以人胎脑cDNA文库为模板进行聚合酶链反应(PCR)特异扩增FTH1基因片段,将扩增片段经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后克隆到同样经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切的pCMV-Myc载体,酶切鉴定阳性克隆并进一步测序鉴定。结果成功构建了pCMV-Myc-FTH1重组真核表达载体。结论 pCMV-Myc-FT1重组真核表达载体的构建为进一步在细胞内鉴定FXR1P与FTH1相互作用奠定了基础,对研究FXR1在脆性X综合征中的作用机理提供了依据。
- 董晓何淑雅李斌元王三虎自映萍马云
- 关键词：脆性X综合征真核表达载体
- 脆性X相关蛋白Ⅰ结构及功能研究进展
- 2011年
- 脆性X相关蛋白Ⅰ(FXR1P)是脆性X蛋白家族成员,与脆性X智力低下蛋白(FMRP)的氨基酸序列60%以上相似。FXR1P分子中存在KH-Ⅰ结构域、RGG结构域、Agenet结构域、NLS、NES信号、NoS等结构;FXR1P可作为转录调节因子参与特定mRNA的转录与翻译。研究表明,FXR1P可以参与miRNA调控途径,实现对靶mRNA的调节。从结构和功能方面对FXR1P研究进展作一综述。
- 符向辉何淑雅李斌元董晓马云
- FXR基因家族被引量：3
- 2007年
- FXR基因家族是与脆性X综合征发病相关的一个基因家族。有3个家族成员。在进化上高度保守，氨基酸序列高度相似，有共同的功能结构域：两个KH结构域、RGG盒、NES和NLS。能够与RNA和多聚核糖体结合。通过NES和NLS携带其mRNA在细胞核和细胞质之间穿梭。不同的蛋白亚型其组织分布各异。该家族成员在大脑和神经发育过程中发挥重要作用，影响认知过程和智力发育。
- 苏娇何淑雅
- 关键词：脆性X综合征FMR1
- FMR-1基因中CGG重复序列扩增条件的优化被引量：1
- 2007年
- 目的:优化PCR扩增条件,建立一种有效检测脆性X综合征的方法。方法:在常规PCR的基础上,采用耐高温酶替代法、碱基替代法,同时加入有机溶剂DMSO等,对表型正常的人群进行FMR1基因CGG重复序列检测。结果:改良PCR法可以提高G C富集区扩增效率,并取得了较好的效果。结论:建立了一种扩增FMR-1基因中CGG重复序列的可行方法。
- 马云何淑雅Nanbert Zhong李斌元喻长顺苏娇
- 关键词：FMR-1基因PCR
- 酵母双杂交系统筛选CLN8P相互作用蛋白被引量：5
- 2006年
- 目的应用酵母双杂交系统筛选CLN8P相互作用蛋白质,通过对相互作用蛋白质的筛选及研究,探讨CLN8的功能,为CLN8和NCLs疾病群的发病机制研究提供线索,并为疾病的蛋白质相互作用网络提供资料。方法应用酵母双杂交技术,以pLexA-CLN8为诱饵质粒筛选人胎脑cDNA文库,得到Leu+LacZ+阳性克隆,进一步进行验证,并对验证后的阳性克隆的外源性片段进行测序及同源性分析。结果从人胎脑cDNA文库中筛选得到60个Leu+LacZ+阳性克隆;将获得的具有外源性片段的文库质粒与诱饵质粒一对一重新转入酵母体内对相互作用进行验证,共获得阳性克隆22个;对验证后阳性克隆测序并进行同源性分析,共获得不同的候选基因序列5个。结论应用酵母双杂交系统,共筛选得到5个不同的基因,其编码蛋白与CLN8P有相互作用,可能与NCLs发病机制相关。
- 何淑雅肖卫纯李洁李斌元孙春莉闵凌峰ZHONG Nanbert
- 关键词：酵母双杂交技术蛋白质相互作用
