天津市科技计划(09JCZDJC17600)
- 作品数：9 被引量：43H指数：4
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- 相关机构：天津医科大学总医院天津医科大学更多>>
- 发文基金：天津市科技计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金更多>>
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- miRNA-21与肿瘤相关研究新进展被引量：15
- 2011年
- 小RNA(microRNA,miRNA)是近年发现的一类内源性非编码单链RNA,在转录后水平对基因表达发挥负调控作用,参与细胞生长、发育、凋亡等重要生物过程。研究发现miRNA-21在肿瘤的发生发展过程中扮演着非常重要的角色,在不同类型肿瘤中的表达均出现明显上升,与肿瘤细胞的增殖、侵袭、血管的生成和抗药性等生物学行为相关。本文将从miRNA-21的表达与定位、对靶基因的调控以及对miRNA-21的转录调控等方面进行综述。
- 杨旸康春生
- 关键词：MIRNA-21肿瘤信号通路转录
- 反义miR-21通过RECK抑制胶质瘤细胞侵袭性生长的体内外研究被引量：4
- 2011年
- 目的 探讨胶质瘤细胞LN229中RECK作为miR-21的调控靶点,在胶质瘤侵袭性生长中的作用.方法 将反义miR-21（AS-miR-21）寡核苷酸转染至人脑胶质瘤细胞LN229中.Real-time PCR检测LN229细胞中miR-21的表达量.荧光素酶实验检测miR-21对RECK的调控关系.Transwell实验评价LN229细胞侵袭能力的变化,应用Western blot检测细胞内MMP2/9和RECK蛋白水平的变化,ELISA实验检测培养基中活性MMP2/9的表达量,动物实验评价体内条件下肿瘤侵袭性的变化.结果 Real-time PCR显示转染组中miR-21的表达量与对照组相比下调60%.荧光素酶实验证明RECK是miR-21的靶点.Transwell实验证实胶质瘤细胞侵袭能力下降,Western blot和ELISA实验证实MMP2/9表达降低,动物实验及免疫荧光反映肿瘤侵袭性生长受抑制.结论 反义miR-21通过上调RECK的表达而抑制恶性胶质瘤细胞的侵袭性生长.
- 兰凤鸣岳晓韩磊杨旸史振东张安玲任玉浦佩玉康春生
- 关键词：神经胶质瘤MIR-21RECK
- RNA干扰技术联合抑制AKT1和COX-2表达对U251胶质瘤细胞增殖的影响
- 2010年
- 目的 探讨应用RNA干扰（RNAi）技术抑制U251恶性胶质瘤细胞株AKT1和COX-2表达后,在体外对U251细胞增殖的抑制作用.方法 构建靶向AKT1和COX-2的RNAi重组腺病毒表达载体（rAd-A＋C）转染至U251细胞.应用Realtime PCR检测AKT1和COX-2 mRNA水平的变化;应用Western blot检测AKT1和COX-2蛋白水平的变化,并对肿瘤细胞中相关功能蛋白的表达进行分析;应用MTr法和流式细胞术评价肿瘤细胞的增殖活性.结果 rAd-A＋C可显著抑制U251细胞AKT1和COX-2的表达;与对照组和无义序列处理组（rAd-HK）比较,Western blot分析结果显示下游相关因子PCNA、Cyclin D1表达下降,而p53表达上调;细胞周期分析结果表明rAd-A＋C处理组进入S期的细胞数较对照组减少了7.0%～7.8%,出现G0/G1期阻滞;MTT法分析显示rAd-A＋C处理组细胞生长抑制率＞58%.结论 靶向AKT1和COX-2的RNAi技术可显著抑制U251细胞AKT1和COX-2表达,在体外对U251细胞增殖活性产生明显抑制作用.因此,RNAi重组腺病毒表达载体介导的基因治疗可成为胶质瘤靶向治疗的新策略.
- 韩磊张安玲岳晓杨旸王广秀贾志凡浦佩玉康春生
- 关键词：神经胶质瘤AKT1RNA干扰增殖活性
- 脑胶质瘤PI3K信号通路的研究进展被引量：3
- 2010年
- 脑胶质瘤是最常见的颅内原发性肿瘤,因多数呈浸润性生长,治疗效果不佳,寻找有效的治疗手段势在必行。目前研究表明,胶质瘤的恶性进展涉及信号转导通路的异常,这为开辟新的治疗手段提供了新思路。现已初步证实,磷酸磷脂酰肌醇-3-羟基激酶信号转导通路异常与胶质瘤的发生、发展关系最为密切,故本文着重对该通路的相关内容作简要介绍。
- 韩磊浦佩玉康春生
- 关键词：胶质瘤信号转导通路
- RNA干扰敲低Dicer对胶质瘤细胞恶性表型的影响被引量：4
- 2011年
- 目的 观察应用RNA干扰（RNAi）技术敲低Dicer酶后,在体外对U251人胶质瘤细胞生物学特征的影响.方法 构建针对Dicer基因的小分子干扰RNA重组腺病毒表达载体（rAd-Dicer）转染至U251细胞.应用RT-PCR检测Dicer mRNA水平的变化,应用免疫荧光和Western blot方法检测Dicer基因在蛋白水平的变化,并对肿瘤细胞中相关功能蛋白的表达进行分析比较.应用MTT法、流式细胞术和Transwell方法评价肿瘤细胞转染前后生物学行为的变化.结果 rAd-Dicer可显著抑制U251细胞Dicer基因的表达;与正常对照组（control）和阴性对照组（rAd-HK）比较,Western blot分析结果显示p-AKT,MMP2/9,PCNA,Cyclin a,VEGF,CD34功能蛋白在rAd-Dicer转染组细胞中表达明显上调;细胞周期结果表明rAd-Dicer转染组进入S期的细胞数增加了 14.1%～15.3%,MTT和Transwell实验结果显示rAd-Dicer转染组细胞增殖速率和体外侵袭能力显著增强.结论 敲低Dicer酶表达后,U251细胞表型具有更为恶性转化的倾向,由此初步推测全面抑制细胞microRNAs表达有可能促进肿瘤生成.
- 韩磊张安玲岳晓许鹏杨旸王广秀贾志凡浦佩玉康春生
- 关键词：神经胶质瘤DICERRNA干扰生物学表型
- PI3K／AKT信号通过介导β-catenin通路的活性影响胶质瘤细胞的生长被引量：8
- 2012年
- 目的探讨P13K／AKT信号阻断后抑制胶质瘤细胞株LN229生长的分子机制。方法将溶解于DMSO的P13K抑制剂LY294002加到LN229细胞中，并设立对照组。应用Westernblot检测P—AKT的表达，MTT、细胞周期实验评价LY294002处理后细胞生长情况的变化，Transewell实验检测胶质瘤细胞侵袭能力的改变。TOP—FOP实验检测Wnt通路的活性，Westernblot检测加入LY294002后Wnt通路中重要蛋白的表达。结果Westernblot显示LY294002处理组P—AKT表达与对照组和DMSO组比较明显降低。MTT和Transewell实验证实加入LY294002后细胞的增殖侵袭能力降低，细胞周期实验显示G0／G1期比值增大，S期缩短。TOP—FOP实验说明LY294002处理组Wnt通路的活性较其他两组显著下降，Westernblot证明LN229细胞LY294002处理组中GSK3β、p-β-catenin表达升高，c—Myc、CyclinDl等β—catenin下游基因表达降低。结论PDK抑制剂LY294002可通过影响Wnt／β-catenin通路的活性而降低胶质瘤细胞的恶性表型。
- 兰凤鸣岳晓韩磊史振东杨旸邹建张安玲王广秀贾志凡浦佩玉康春生
- 关键词：PI3K抑制剂LY294002P-AKT
- β-catenin／Tcf-4转录调控AKT2基因表达促进人脑胶质瘤细胞恶性转化的研究被引量：1
- 2012年
- 目的探究胶质瘤中β—catenin／Tcf-4转录调控AKT2基因以促进其恶性表型转化的机制。方法CHIP—PCR及荧光素酶实验确立AKT2启动子区的Tcf-4结合位点及活性。阿司匹林（ASA）阻断13-catenin／Tcf-4转录复合物活性及恢复AKT2基因的表达后，流式细胞术检测细胞周期，AnnexinV检测凋亡及Transwell实验检测侵袭能力。结果CHIP—PCR表明，AKT2基因启动子区存在两个Tcf-4结合位点-349／-343bp（位点1）和-3491／-3497bp（位点2）。荧光素酶实验结果显示位点2的活性比位点1的强。抑制β—catenin／Tcf-4转录活性后，细胞周期阻滞于G0／G1期，侵袭能力下降；恢复AKT2的表达后，细胞S期比例增加，侵袭能力增强。结论β—catenin／Tcf-4可以直接转录调控AKT2来促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭。
- 邹健张安玲王坤黄凯史振东韩磊浦佩玉康春生
- 关键词：AKT2神经胶质瘤转录调控
- 不同AKT1与AKT2表达状态的胶质瘤的生存分析被引量：1
- 2012年
- 目的 探讨AKT1与AKT2在脑胶质瘤中的表达及与患者生存期的相关性.方法 免疫荧光法检测手术切除的50例胶质瘤组织标本中AKT1及AKT2的表达水平,确定两者表达的相关性并与生存期进行相关性分析.结果 Log - rank单因素检验,年龄≥50岁、KPS评分＜ 80分和WHO Ⅲ～Ⅳ级患者的生存期显著缩短.胶质瘤组织中AKT1及AKT2在WHOⅢ～Ⅳ级的表达率显著高于WHO Ⅰ～Ⅱ级,两者表达存在正相关,且与患者的生存期呈负相关.结论 AKT1与AKT2的表达状态对预测患者的生存期具有一定的临床价值.
- 史振东周旋韩磊张安玲兰凤鸣浦佩玉康春生
- 关键词：神经胶质瘤AKT1AKT2
- RNA干扰联合抑制PI3KP85和AKT1表达对U251胶质瘤细胞侵袭的影响被引量：7
- 2010年
- 目的 探讨应用RNA干涉（RNAi）技术抑制U251恶性胶质瘤细胞丝/苏氨酸蛋向激酶1（AKT1）和3-羧基磷脂酰肌醇激酶的85000催化亚基（P13KP85）表达后对U251胶质瘤细胞侵袭的抑制作用.方法 实验设正常对照组（未做任何处理）;阴性对照组（rAd-HK组）：用无义序列重组腺病毒感染U251胶质瘤细胞;基凶治疗组（rAd-A＋P组）：用靶向AKT1和P13KP85的重组腺病毒感染U251胶质瘤细胞.应用实时PCR检测AKT1和P13KP85 mRNA水平的变化;应用Western blot方法 检测AKT1和P13KP85蛋白水平的变化,并对肿瘤细胞中相关功能蛋白的表达进行分析;应用酶联免疫分析法（ELISA）检测细胞外基质金属蛋白酶2（MMP2）和基质金属蛋白酶9（MMP9）浓度的变化;应用划痕和Transwell实验评价肿瘤细胞侵袭能力的变化.结果tAd-A＋P 可显著抑制U251胶质瘤细胞AKT1和P13KP85的表达.与正常对照组和rAd-HK组比较.rAd-A＋P组MMP2、MMP9表达下降,而基质金属蛋白酶抑制因子（TMP2）表达上调,差异有统计学意义（P〈0.05）.划痕和Transwell实验显示rAd-A＋P组细胞体外侵袭能力明显减弱.结论 靶向AKT1和P13KP85的RNAi技术可以显著抑制U251胶质瘤细胞AKT1和PDKP85表达,对U251胶质瘤细胞的侵袭能力产生明显抑制作用.
- 韩磊张安玲岳晓杨旸王广秀贾志凡浦佩玉康春生
- 关键词：神经胶质瘤肿瘤浸润RNA干扰
- 胶质瘤细胞中β-catenin/Tcf-4转录调控AKT1的实验研究
- 目的研究胶质瘤中β-catenin/Tcf-4复合物与AKT1的转录调控关系。方法通过阿司匹林和Tcf-4 RNA干扰分别敲低β-catenin和Tcf-4活性,蛋白印迹分析其下游基因Fra-1的表达,同时研究AKT1的...
- 黄凯邹健岳晓史振东杨旸张安玲韩磊浦佩玉康春生
- 关键词：胶质瘤Β-CATENIN
- 文献传递
