广东省自然科学基金(001122)
- 作品数：15 被引量：48H指数：4
- 相关作者：王伟民林健徐如祥戴学军姜晓丹更多>>
- 相关机构：广州军区广州总医院南方医科大学中国人民解放军第一军医大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金中国博士后科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 手术治疗不伴面部血管瘤的Sturge-Weber综合征1例被引量：1
- 2009年
- 目的总结不伴面部血管瘤的致癎性Sturge-Weber综合征的诊治经验。方法报告1例女性病人,9岁,表现为药物难治性癫癎1年,发作形式为微笑-意识丧失-倒地抽搐,不伴面部和全身血管瘤。MRI显示:左侧顶枕交界区皮质病变,T1W呈等信号,增强后病变沿脑回强化;PET显示:病变及周围葡萄糖代谢降低,病变呈"电车轨道样"钙化。在神经导航和术中皮质脑电图(ECoG)监测下行左侧顶枕叶致癎灶切除术。结果病理报告为软脑膜血管瘤。随访11个月,病人无癫癎发作,无严重手术并发症发生。结论应加强对不伴面部血管痣性Sturge-Weber综合征的认识。手术切除致癎灶是治疗致癎性Sturge-Weber综合征的有效方法。
- 王伟王伟民刘一兵白红民郭晓绯刘严
- 关键词：神经外科手术
- 慢病毒在大鼠胶质瘤细胞基因转导中的应用被引量：3
- 2007年
- 目的应用慢病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因转导大鼠9L胶质瘤细胞。方法构建慢病毒表达质粒pLenti6/V5-TK并以PCR、酶切及测序等方法鉴定。利用ViraPowerTM慢病毒表达系统,将重组质粒与包装混合物(Packaging Mix)共同转染293T细胞生产假病毒颗粒,转染48 h后收集培养上清,用其感染大鼠9L胶质瘤细胞,以抗稻瘟菌素(BSD)筛选出9L-TK细胞。RT-PCR、Western blot方法检测TK基因在9L-TK细胞中的表达。用MTT方法测试更昔洛韦(GCV)对体外培养的9L-TK细胞杀伤效果。结果构建的重组质粒pLenti6/V5-TK经PCR、酶切及测序鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒滴度达2.7×105转导单位(TU)/ml。经BDS筛选获得的9L-TK细胞RT-PCR及Western blot结果显示TK基因表达阳性,且GCV对该细胞作用敏感。结论成功利用慢病毒实现了TK基因转导大鼠9L胶质瘤细胞。
- 林健戴学军王伟民袁振华王红梅何新舟刘茜曹晖蒋立新
- 关键词：慢病毒载体质粒单纯疱疹病毒胸苷激酶基因神经胶质瘤
- 白细胞介素12基因修饰大鼠胶质瘤9L/rIL-12细胞的建立被引量：3
- 2007年
- 目的构建大鼠白细胞介素12(rIL-12)基因真核表达载体质粒,建立rIL-12基因修饰并稳定表达的大鼠胶质瘤9L/rIL-12细胞。方法用Trizol提取大鼠腹腔巨噬细胞总RNA,RT-PCR方法分别获取rp40和rp35cDNA,依次克隆入pcDNA3.1(-)/myc-HisA质粒中,以IRES连接双亚基,构建成双顺反子真核表达载体质粒pcDNA3.1/rIL-12。将构建的重组质粒转染大鼠胶质瘤9L细胞,G418筛选单克隆细胞株,ELISA法检测其培养上清rIL-12(p70)蛋白含量,同时抽提细胞RNA,RT-PCR方法检测rp40、rp35基因在9L/rIL-12细胞中的表达。结果所得rp40cDNA序列与GeneBankNM022611及AF133197、rp35cDNA序列与GeneBankNM053390及AF177031均一致,构建的质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确。质粒转染9L细胞后,获得2个rIL-12基因稳定、高效表达的9L/rIL-12单克隆细胞株,其培养上清rIL-12(p70)蛋白含量分别为139.0、162.1pg/ml,RT-PCR结果显示细胞中rIL-12基因表达呈阳性。结论成功构建了rIL-12真核表达质粒pcDNA3.1/rIL-12,并建立了9L/rIL-12细胞株,为rIL-12基因修饰的胶质瘤疫苗研究打下了基础。
- 林健戴学军王伟民张宏斌武婕冼江詹纯列王捷
- 关键词：白细胞介素12质粒神经胶质瘤
- C6大鼠胶质瘤模型及其在脑胶质瘤治疗研究中应用的缺陷被引量：22
- 2003年
- C6细胞是大鼠经化学致癌剂N-亚硝基甲脲体内诱发产生的脑胶质瘤细胞,具有较典型的人脑胶质瘤组织学特点。大鼠脑内立体定向接种C6细胞建立的动物模型,因成瘤高、动物手术死亡率低,所以广泛应用于脑胶质瘤治疗的研究中。国外研究发现,来源于非纯种大鼠的C6细胞具有很强的免疫原性:其主要组织相容性基因复合体中存在与大鼠呈异源性的基因;C6细胞接种于大鼠体内引发强烈的免疫排斥反应可使肿瘤不能持续生长甚至自行消退,因此混淆了治疗所产生的效应,尤其当用于免疫和基因免疫治疗的研究时,存在较大缺陷。
- 林健王伟民徐如祥
- 关键词：C6细胞脑胶质瘤动物模型
- 肿瘤免疫基因治疗策略的临床应用及评价
- 2010年
- 戴学军王伟民
- 关键词：免疫基因治疗肿瘤基因转导目的基因
- 9L/Fischer344与C6/Wistar两种大鼠脑胶质瘤模型的比较研究被引量：6
- 2005年
- 目的探讨9L/Fischer344和C6/Wistar两种大鼠脑胶质瘤模型的对比研究。方法采用立体定向技术,大鼠脑内接种定量的肿瘤细胞建立模型,比较两种模型大鼠脑内肿瘤生长情况;采用免疫组织化学方法,比较两种模型脑内肿瘤局部细胞免疫反应情况。结果(1)9L/Fischer344大鼠脑内有肿瘤持续生长,而C6/Wistar大鼠脑内早期可见肿瘤生长,但肿瘤局部有大量淋巴细胞浸润,肿瘤周边血管呈现“淋巴细胞血管套”现象,后期脑内肿瘤逐渐消退、消失,仅见残留轨迹和含褐色素沉着的吞噬细胞;(2)9L/Fischer344肿瘤局部可见CD68阳性细胞,未见CD4、CD8阳性细胞,而C6/Wistar肿瘤局部CD68阳性细胞数量明显较9L模型多(P<0.01),并可见CD4、CD8阳性的淋巴细胞。结论9L/Fischer344模型稳定性高,重复性好,肿瘤局部T淋巴细胞浸润极少,是一种较为理想的脑胶质瘤免疫治疗研究的动物模型;C6/Wistar模型脑内肿瘤不能持续生长,脑内肿瘤可自发性消退,肿瘤局部T淋巴细胞浸润明显,存在较强的细胞免疫反应,可能是肿瘤的消退的原因,该模型不适合用于胶质瘤治疗,尤其是免疫治疗的实验研究。
- 林健王伟民徐如祥姜晓丹
- 关键词：神经胶质瘤C6细胞
- 9L/F344与C6/Wistar大鼠脑胶质瘤模型局部细胞免疫反应的比较研究被引量：2
- 2004年
- 目的对9L/F344和C6/Wistar两种大鼠脑胶质瘤模型肿瘤局部细胞免疫反应情况进行比较研究。方法采用立体定向技术建立两种大鼠脑胶质瘤模型。定期处死大鼠取脑,常规石蜡切片,苏木精-伊红染色行肿瘤组织病理学观察;冰冻切片,行免疫组织化学染色,观察大鼠脑内肿瘤淋巴细胞浸润情况。结果两种模型脑内肿瘤组织病理学均具有恶性脑胶质瘤的特点。C6/Wistar模型肿瘤周边和瘤内可见大量单个核细胞浸润,肿瘤周边血管呈现“淋巴细胞血管套”现象。肿瘤局部CD68、CD4、CD8阳性的淋巴细胞在C6/Wistar模型中多见;9L/F344模型中可见CD68阳性细胞,但数量较C6模型中为少,P<0.01,且未见CD4、CD8阳性细胞。结论9L/F344模型肿瘤局部T淋巴细胞浸润少。C6/Wistar模型肿瘤周边及瘤内淋巴细胞浸润明显,存在强烈的细胞免疫反应,不适用于胶质瘤免疫治疗的实验研究。
- 林健王伟民徐如祥王卓才田野
- 关键词：脑胶质瘤淋巴细胞
- 9L-rIL12-TK大鼠胶质瘤基因免疫疫苗的安全可控性体内实验研究
- 2009年
- 目的评估9L-rIL12-TK脑胶质瘤基因免疫活细胞疫苗在体内的安全可控性。方法将40只裸鼠随机分成3组,分别于右侧腋部皮下接种9L-rIL12-TK细胞(n=14)、9L-TK细胞(n=14)和9L细胞(n=12),7d后将各组裸鼠分成两亚组,实验组(n=8,8,6)给予更昔洛韦(GCV)干预实验,对照组(均n=6)给予生理盐水注射,连续7d;观察裸鼠瘤体生长情况和生存时间,60d后取瘤结节及全身脏器行组织学检查(苏木精-伊红染色)。结果①给予GCV干预后7d,9L-rIL12-TK实验组及9L-TK实验组裸鼠瘤体平均体积较相应对照组及9L组显著性缩小(均P<0.05)。60d时,8只9L-rIL12-TK实验组裸鼠瘤体均完全消退,且均无复发;8只9L-TK实验组裸鼠中,瘤体完全消退3只,瘤体缩小后再次增大5只;余亚组瘤体均呈增大趋势。②GCV干预后,9L-rIL12-TK实验组和9L-TK实验组与相应对照组比较,生存时间明显延长(P<0.05)。③9L-rIL12-TK实验组和9L-TK实验组无瘤裸鼠接种部位无异型性肿瘤细胞,余裸鼠瘤体内均见异型性肿瘤细胞;所有裸鼠相关脏器病理学检查均未见肿瘤远处转移征象。结论9L-rIL12-TK大鼠胶质瘤细胞基因免疫疫苗在裸鼠体内可得到安全有效的控制,使制备免疫原性强且安全有效的胶质瘤基因免疫活细胞疫苗策略成为可能;其基因免疫治疗效应有待进一步研究。
- 王建业戴学军林健王伟民
- 关键词：白细胞介素12胸苷激酶神经胶质瘤更昔洛韦
- 同源基因型9L/Fischer344大鼠脑胶质细胞瘤模型的建立被引量：2
- 2005年
- 目的建立稳定的同源基因型9L/Fischer344大鼠脑胶质细胞瘤模型。方法采用立体定向技术,于Fischer344大鼠右侧尾状核区,接种定量的9L细胞;连续观察大鼠的生存状态、生存时间;大鼠死亡后,脑标本制片,行肿瘤组织病理学观察,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和S-100蛋白免疫组织化学检测。结果①在接种后45d观察期内,大鼠全部死亡。脑内分别接种5.0×102、1.0×105和1.0×1069L细胞的三组大鼠的中位生存时间分别为38、24、15d。②接种1.0×1059L细胞的大鼠,于接种后10、14、20dMRI增强扫描,脑内接种部位均见肿瘤,并呈持续生长。③组织病理学观察,肿瘤界线较明显,但无包膜,肿瘤细胞向周边脑组织内浸润,新生血管丰富,多见出血、坏死等特点。肿瘤细胞免疫组织化学GFAP和S-100蛋白染色阴性。结论同源基因型9L/Fischer344大鼠脑胶质细胞瘤模型成功建立,该模型稳定可靠,大鼠脑内肿瘤持续生长,符合恶性胶质肉瘤生物学特性。
- 林健王伟民徐如祥
- 关键词：动物模型
- 9L/F344大鼠脑胶质瘤模型的建立被引量：12
- 2003年
- 目的建立稳定的9L/F344大鼠脑胶质瘤模型。方法15只近交系雄性F344大鼠,采用立体定向技术,在大鼠右侧额叶尾状核接种1×105个9L细胞,观察大鼠生存状态;接种后第10、20天行MRI检查,观测颅内肿瘤生长情况。大鼠死亡后,取脑制作病理切片,行HE染色后观察肿瘤组织形态,采用免疫组织化学方法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和S-100蛋白。结果大鼠接种肿瘤细胞后30d内全部死亡,平均生存时间(24.4±3.3)d。接种后10d,MRI增强扫描即可见肿瘤生成;接种后20d,MRI检查可见接种侧脑组织大片水肿,增强扫描肿瘤显像清晰。脑内均见肿瘤形成,未见肿瘤颅外生长;肿瘤周边界线较明显,但未见包膜;瘤内新生血管丰富,可见出血、坏死;肿瘤免疫组织化学GFAP和S-100蛋白染色阴性。结论该方法建立的大鼠脑胶质瘤模型稳定可靠,符合恶性胶质肉瘤生物学特性。该模型是理想的脑胶质瘤实验研究材料。
- 林健王伟民冼江杨太成詹纯列王卓才田野吴迪徐如祥
- 关键词：脑胶质瘤免疫组织化学肿瘤
