广东省科技计划工业攻关项目(2011B080701004)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 相关作者：赵林李黄金周联吴梅芝蔡金艳更多>>
- 相关机构：广东药学院广州中医药大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- EGFR二聚化B细胞表位抗原肽基因克隆、表达与纯化被引量：1
- 2011年
- 目的利用基因工程手段建立表皮生长因子受体(EGFR)二聚化B细胞表位抗原肽MVF-ER的高效制备方法。方法采用重叠延伸PCR扩增MVF-ER后克隆于表达载体pET32a,于大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,产物采用肠激酶酶切和镍离子螯合亲和层析法纯化。结果通过10对引物5步重叠延伸得到273 bp的扩增产物,目的基因与硫氧环蛋白(Trx)融合后可高效表达,经酶切和层析后得到纯度为95%的抗原肽。结论成功建立抗原肽"MVF-ER"的高效制备方法,为进一步研究EGFR过表达恶性肿瘤的治疗性疫苗打下了坚实基础。
- 朱磊吴梅芝赵林黄绮玲梁梅李黄金
- 关键词：表皮生长因子受体二聚化B细胞表位抗原肽
- 一步阳离子柱层析高效纯化溶菌酶及其溶菌活性被引量：3
- 2013年
- 目的:研究利用离子交换层析从鸡蛋清中快速高效地纯化溶菌酶的方法。方法:蛋清稀释后先利用等电点沉淀去除卵清蛋白、类卵黏蛋白等部分杂质,之后利用快流速羧甲基-琼脂糖凝胶柱层析进行纯化,收集洗脱峰样品进行冷冻干燥;以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测溶菌酶纯度,以溶壁浊度法检测酶活力。结果:在等电点除杂后,经一步阳离子柱纯化,溶菌酶的纯度达到95%以上,比活力达到17600U/mg,收率达到4.2mg(溶菌酶)/m(l蛋清)。结论:所建立的一步阳离子柱层析法可高效快速地从鸡蛋清中纯化溶菌酶。
- 赵林蔡金艳周林李黄金周联
- 关键词：蛋清纯化溶菌酶
- 靶向EGFR二聚化界面的肿瘤多肽疫苗P64k-EGFR^(262-328)的构建及免疫原性分析被引量：2
- 2013年
- 目的构建靶向EGFR二聚化界面的肿瘤多肽疫苗P64k-EGFR262-328并分析其免疫原性。方法采用重叠延伸PCR来扩增P64k-EGFR262-328融合基因,克隆至pMD18-T,经测序鉴定后与pET-21b构建重组表达载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。目的蛋白经IPTG诱导表达后用Source Q阴离子层析和Ni-NTA亲和层析纯化,纯化的融合蛋白乳化后免疫BALB/c小鼠分析其免疫原性。结果获得了2 031 bp的融合基因,IPTG诱导后获得了相对分子质量(Mr)70 000大小的目的蛋白,经两步柱层析后,融合蛋白达到了95%以上的纯度,并在小鼠体内产生了高达1∶16 000以上的抗体滴度。结论成功制备了肿瘤多肽疫苗P64k-EGFR262-328。
- 赵林吴梅芝陈展歌李黄金周联
- 关键词：EGFR肿瘤疫苗免疫原性
