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国家自然科学基金(30471300): 作品数：6 被引量：21H指数：3; 相关作者：吕敏娜吴彩艳孙铭飞蔡建平戚南山更多>>; 相关机构：广东省农业科学院广州英赛特生物技术有限公司南京农业大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金广东省农科院院长基金广东省自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

顶复门原虫与细菌Ⅱ型丙二酰单酰辅酶A:ACP转酰基酶研究进展被引量：3: 2011年; 大部分顶复门原虫与人畜重要寄生虫病密切相关。近年来,由于各类药物在寄生虫与细菌病防治中的广泛应用,甚至是滥用,造成了这类寄生虫与细菌的严重抗药性,急需一些新型抗感染性药物的出现。由于在一些顶复门原虫与细菌中广泛存在的Ⅱ型脂肪酸代谢途径在其脊椎动物宿主中并不存在,而丙二酰单酰辅酶A:ACP转酰基酶(malonyl-CoA:ACP transacylase,MCAT)是由mcat基因编码的一种巯基酶,负责在起始步骤把丙二酰基团从丙二酰单酰CoA上的硫酯连接部位转移到ACP的磷酸泛酰巯基乙胺臂上而形成丙二酰单酰ACP,对于顶复门原虫和细菌的脂肪酸合成代谢至关重要,成为研究开发药物的理想靶位。文章对ACP转酰基酶的研究进展进行了综述。; 孙铭飞廖申权吴彩艳戚南山吕敏娜袁健丰于劲术蔡建平; 关键词：细菌

顶复门原虫糖酵解代谢及其关键酶:己糖激酶的研究进展被引量：5: 2011年; 顶复门原虫是包括刚地弓形虫、疟原虫及球虫等在内的一大类寄生性原虫的总称,引起重要的人畜寄生虫病。由于药物的长期使用,对于原有的药物产生了明显的抗药性,急需新型抗寄生虫药物的出现。顶复门原虫不能利用脂肪和蛋白质作为能量来源,只能依赖己糖激酶(Hex-okinase,HK)参与的糖酵解途径提供ATP。顶复门原虫HK的基因序列、结构特征与植物等一些低等生物更为接近,而明显区别于脊椎动物和大多数的真核生物,成为研究开发药物的理想靶位。本文对顶复门原虫糖酵解途径及其关键酶进行了综述。; 孙铭飞吴彩艳戚南山廖申权吕敏娜蔡建平; 关键词：糖酵解己糖激酶

柔嫩艾美耳球虫裂殖子全长cDNA文库的构建及应用被引量：2: 2012年; 为克隆柔嫩艾美耳球虫裂殖子阶段的功能基因的全长序列,利用SMART技术,采用Clontech公司的Creator TMSMARTTMcDNA Library Construction Kit构建了鸡球虫裂殖子的全长cDNA文库。用试剂盒提取mRNA后,以cDNA合成试剂盒合成cDNA。连接至pDNR-LIB载体,用电转化法将重组质粒转化到E.coli DH10B内得到原始文库,扩增后保存于-80℃冰箱内;最后以文库为模板,分别以研究室已成功克隆序列(EtSAG2、EtMIC-2、EtMCAT)及Sanger的部分EST序列(Contig1218)设计引物,进行PCR扩增并测序检验文库的实用性。经测定,构建的初级cDNA文库约含有8.72×107个重组子,插入的片段多在1kb～3kb之间,平均插入片段长度约1.8kb,扩增后文库保存的滴度为2.4×104 cfu/mL;通过文库的PCR扩增,不仅可以成功扩增出研究室已成功克隆的序列(EtSAG2、EtMIC-2),并成功获得EtMCAT和EST序列(Contig1218)的全长cDNA序列,经比对分析Contig1218所编码的蛋白为组织蛋白酶B样半胱氨酸蛋白酶(Cathepsin B)。结果表明,已成功构建了柔嫩艾美耳球虫裂殖子高质量的全长cDNA文库,从而为筛选鸡球虫的功能基因全长序列奠定了基础。; 王园园陈佳覃宗华吴彩艳廖申权戚南山吕敏娜孙铭飞蔡建平; 关键词：柔嫩艾美耳球虫裂殖子 CDNA文库 SMART技术

不同表达条件对Eimeria tenella丙二酰单酰辅酶A:ACP转移酶活性的影响被引量：7: 2010年; 为探讨不同原核表达载体、不同表达温度对重组表达Eimeria tenella丙二酸单酰辅酶A:ACP转移酶活性的影响,以生物信息学技术预测的E.tenellaⅡ型脂肪酸合成代谢途径中的丙二酰单酰辅酶A:ACP转移酶(Et-MCAT)编码序列为基础,分别设计引物扩增完整ORF,采取截除信号肽而保留转导肽以及切除信号肽和转导肽的不同策略,选择pMAL-c2x、pET-32a(+)和pProExHTa3种不同表达载体分别构建重组表达质粒,转化大肠杆菌Rosseta(DE3)后,在不同条件下诱导表达,利用酮戊二酸脱氢酶(KDH)偶联系统测定表达产物的酶活性,以评价不同表达策略对表达效果和表达产物活性的影响。表达水平和酶活性分析结果显示,惟切除信号肽和转导肽后的功能蛋白编码区能表达,Rosseta(DE3)/pMAL-c2x-mcat体系的可溶性表达量高于Rosseta(DE3)/pET-32a(+)-mcat,但二者表达产物的酶活性相似,且均随着诱导温度的降低其可溶性蛋白表达量增加。但Rosseta(DE3)/pProExHTa-mcat体系仅能表达不溶性蛋白,且复性后无酶活性,改变诱导温度对表达效果无明显影响。结果表明不同表达载体和诱导温度对大肠杆菌所表达EtMCAT的活性及其表达形式有显著影响,其中融合标签和表达温度可能是主要的影响因素,包涵体表达的重组酶即使复性处理仍难达到酶活性分析的要求。; 孙铭飞覃宗华谢明权袁建丰吕敏娜余劲术吴彩艳蔡建平; 关键词：柔嫩艾美耳球虫酶活性

柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原-1(AMA1)免疫保护性研究: 为研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)免疫相关因子AMA1在预防鸡球虫病中的免疫保护性,以及新型佐剂QCDC(Quil A,胆固醇,双十八烷基二甲基溴化铵,聚羧乙烯组成)对.AMA1的免疫效果的影响。用将...; 王园园戚南山蔡建平吴彩艳廖申权吕敏娜仝宗喜孙铭飞; 文献传递

柔嫩艾美尔球虫Ⅱ型丙二酰单酰辅酶A：ACP转移酶(EtMAT)不同表达载体的构建及其优化表达策略: 利用生物信息学技术预测了柔嫩艾美尔球虫Ⅱ型丙二酰单酰辅酶A:ACP转移酶基因序列,分别设计引物扩增完整ORF,去除信号肽而保留转导肽以及去除信号肽和转导肽的功能区域序列片段;选取pMAL-c2x、pET-32a(+)和p...; 孙铭飞覃宗华谢明权吕敏娜于劲术吴彩艳蔡建平; 关键词：E.TENELLA 酶活性水溶性; 文献传递

Functional Replacement of the FabD Protein of Escherichia coli Fatty Acid Synthesis by Eimeria tenella MCAT Homologue: TypeⅡfatty acid biosynthetic system is an essential process for bacteria,apicomplexans and some plants surviva...; Sun Ming-fei~(1,2),Zhu Guan~3,Qin Zong-hua~(1,2),Yuan Jian-feng~(1,2),Yu Jin-shu~(1,2),Lv Min-na~(1,2), Wu Cai-yan~(1,2),Xie Ming-quan~(1,2),Cai Jian-ping~(1,2) (1.Institute of Veterinary Medicine,Guangdong Academy of Agricultural Sciences,Guangzhou,510640; 文献传递

柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白EtRON2基因的克隆及序列分析被引量：6: 2011年; 预测并克隆柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2(EtRON2)基因,分析其结构特点及与顶复门其他虫属间的差异。本研究利用生物信息学和比较基因组学技术注释拼接得到柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)棒状体颈部蛋白2(EtRON2)的基因序列,用RT-PCR方法扩增出Etron2全长ORF;以E.tenella子孢子的基因组DNA为模板,用PCR方法成功扩增出Etron2ORF片段的gDNA序列片段。生物信息学分析结果显示,Etron2ORF片段的gDNA含有11个内含子,ORF全长为4 020bp,编码一段全长为1 339个氨基酸的多肽片段,与其他物种RON2的氨基酸序列相似性为15%～41%;Etron2基因在顶复门原虫中相对保守,与犬新孢子虫及弓形虫相似性最高,亲缘关系最近,Etron2的成功克隆填补了柔嫩艾美耳球虫在此方面研究的空白,为进一步研究其功能打下了基础。; 戚南山孙铭飞廖申权吴彩艳吕敏娜袁建丰余劲术蔡建平李祥瑞; 关键词：柔嫩艾美耳球虫基因克隆

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆和表达: 2012年; 通过RT-PCR方法克隆出GD株Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-1)的结构蛋白VP1基因片段,VP1基因片段和原核表达载体pMAL-C2X均以EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后构建获得重组质粒pMAL-C2X-VP1,经限制性酶切和序列测序证明,目的基因正确插入表达载体,转入E.coli BL21(DE3),构建重组表达菌E.coliBL21/pMAL-C2X-VP1,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测结果表明,DHV-1的结构蛋白VP1能在E.coliBL21(DE3)中表达,获得可溶性重组蛋白,表达产物的分子质量约为69ku。; 吕敏娜戚南山覃宗华廖申权余劲术袁建丰吴彩艳孙铭飞; 关键词：VP1基因

用SMART技术构建柔嫩艾美耳球虫裂殖子cDNA文库: 为克隆柔嫩艾美耳球虫裂殖子阶段的功能基因的全长序列,利用SMART(Switchingmechanism at 5’end ofRNA transcript)技术,采用Clontech公司的CreatorTM SMART...; 戚南山覃宗华吴彩艳廖申权吕敏娜蔡建平孙铭飞; 文献传递

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