国家自然科学基金(31100220)
- 作品数：9 被引量：119H指数：5
- 相关作者：魏建和张争徐艳红梁良杨欣更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院山东中医药大学江西中医药大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 白木香3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因AsHMGR2的克隆及表达分析被引量：16
- 2013年
- 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)是萜类合成甲羟戊酸(MVA)途径中的第一个关键限速酶。本研究根据课题组白木香转录组数据库中的HMGR2部分转录本序列设计引物,利用RT-PCR和RACE技术克隆HMGR2基因的全长cDNA序列,并对其进行生物信息学分析;利用荧光定量PCR检测AsHMGR2基因在不同组织和不同伤害处理下的表达差异。克隆得到的白木香AsHMGR2基因开放阅读框为1749bp,编码582个氨基酸,GenBank登录号为KC140287。组织表达分析的结果显示,AsHMGR2基因主要在根和茎尖中表达,其次是主干,叶中的表达量最低;该基因同时受物理伤害和结香液处理的诱导,分别在6h和8h达到最高表达水平。本研究通过AsHMGR2基因的全长cDNA克隆和表达特性分析,为后续深入研究其在沉香倍半萜合成途径的功能奠定了基础。
- 徐艳红杨欣张争梁良魏建和
- 关键词：白木香
- 白木香3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶(AsHMGS)基因的克隆与表达分析被引量：12
- 2014年
- 以白木香(Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg)茎cDNA为模板,采用反转录PCR及RACE技术分离得到HMGS基因cDNA全长。序列分析表明该基因序列全长1 831 bp,共编码465个氨基酸,推导的蛋白质分子量为51.4 kD,理论等电点6.25,命名为AsHMGS。推导的AsHMGS蛋白质序列具有植物HMGS酶的典型结构,并预测出HMGS酶的活性中心。系统进化树分析表明,AsHMGS蛋白与拟南芥、琴叶拟南芥、芥菜的相应蛋白相似度最高,其次为人参、喜树和野茶树。荧光定量PCR结果显示,茉莉酸甲酯能诱导白木香AsHMGS的表达。
- 刘娟徐艳红杨勇梁良高志晖杨云张争隋春魏建和
- 关键词：白木香
- 茉莉酸甲酯诱导的白木香cDNA文库的构建及初步鉴定被引量：3
- 2014年
- 目的通过构建茉莉酸甲酯（MeJA）处理的白木香cDNA文库，为揭示伤害诱导沉香倍半萜合成的分子机制奠定基础。方法以MeJA处理的白木香愈伤组织为材料，以改造的pGADT为载体，利用SMART技术构建白木香全长cDNA文库。结果构建的文库原始滴度为8．99×10^6pfu／mL，阳性克隆子的比例为97％，插入片段的大小在500-3000bp，平均大于1000bp。结论构建的文库无论从库容量、克隆效率，还是全长率方面评价，均达到了高质量文库的要求。
- 徐艳红杨欣梁良高志晖张争魏建和
- 关键词：白木香茉莉酸甲酯CDNA文库愈伤组织
- 沉香结香方法的历史记载、现代研究及通体结香技术被引量：59
- 2013年
- 沉香为传统名贵中药,临床使用广泛,具有行气止痛、温中止呕、纳气平喘的功效,同时沉香也是一种名贵香料。沉香属植物中国沉香的唯一来源植物是白木香Aquilaria sinensis。自然条件下,健康白木香树并不产生沉香,只有受到外界伤害或真菌侵染时才能合成、积累沉香树脂。结香过程往往需要十几年、几十年甚至上百年时间,因此天然沉香远远不能满足市场需求。通过对沉香结香方法的历史记载以及现代结香方法作一综述,以期为大规模生产沉香提供依据和参考。
- 黄俊卿魏建和张争杨云刘洋洋孟慧张兴丽张金莲
- 关键词：白木香
- 白木香JAZ1基因全长cDNA克隆及其在愈伤组织中的伤害诱导表达分析被引量：3
- 2019年
- 目的克隆国产沉香基原植物白木香Aquilaria sinensis茉莉酸(JA)信号途径核心抑制蛋白基因(jasmonate-zim-domain protein,JAZ),为深入研究其在沉香倍半萜合成途径中的功能奠定基础。方法以白木香总RNA为模板,采用RACE法和RT-PCR方法,克隆JAZ基因cDNA全长,并进行生物信息学的分析;采用实时荧光定量(qR T-PCR)方法分析经茉莉酸甲酯(MeJA)和机械伤害处理的白木香愈伤组织中JAZ基因的表达模式。结果获得白木香JAZ基因全长cDNA,命名为AsJAZ1,GenBank登录号为KP677281。序列分析表明,该基因的序列全长为1507 bp,包含一个990bp的开放阅读框,编码330个氨基酸,蛋白质相对分子质量为34280,等电点为6.89。qRT-PCR结果显示,经MeJA处理0.5h后AsJAZ1基因相对表达量最高,约是对照组(未经MeJA处理的白木香愈伤组织)的27倍,随后显著下降;经机械处理2h后AsJAZ1基因相对表达量最高,约是对照组(未经机械处理的白木香愈伤组织)的17倍,随后又快速降低,到24h基本恢复正常。结论获得AsJAZ1基因全长cDNA序列,该基因对伤害诱导极敏感,且能在伤害早期响应。
- 廖永翠章文春魏建和黄磊
- 关键词：白木香
- 濒危南药白木香悬浮细胞体系的建立被引量：3
- 2014年
- 以白木香（Aquilaria sinensis）茎尖为材料,利用诱导形成的愈伤组织构建悬浮细胞体系。结果表明,诱导愈伤组织最适培养基为MS＋2.0 mg·L^-1 NAA＋1.0 mg·L^-1 6-BA;经12次继代培养的愈伤组织生长旺盛、质地疏松适于悬浮培养;将其置于液体培养基MS＋2.0 mg·L^-1 NAA＋1.0 mg·L^-1 6-BA＋500.0 mg·L^-1 CH中震荡培养,建成悬浮细胞体系。悬浮细胞生长曲线呈S型,初期增长缓慢,4~6天为对数增长期,7~12天进入平台期,12天以后细胞生长速度及活力迅速下降;GC-MS结果显示,培养0、3、6、9、12天悬浮细胞不含沉香倍半萜,使用100μmol·L^-1 MeJA处理24 h可检测到倍半萜。本实验构建的白木香悬浮细胞体系均一稳定、细胞活力良好,可作为研究伤害诱导白木香形成倍半萜的离体体系,同时也具备离体生产沉香倍半萜的潜力。
- 刘娟韩晓敏梁良刘庆昌徐艳红杨成民张争孙晶魏建和
- 关键词：白木香愈伤组织悬浮细胞培养
- 三年生白木香机械伤害转录组学研究被引量：21
- 2012年
- 国产沉香为瑞香科(Thymelaeaceae)植物白木香(Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg)含有树脂的木材。白木香树体只有在受到伤害等胁迫,才在伤口周围的木材内产生倍半萜等沉香类物质,但是伤害如何诱导沉香倍半萜生物合成途径至今尚未揭示。为揭示伤害诱导白木香结香的分子机制,本研究应用RNA测序技术对机械伤害后的白木香木质部转录组进行测序,研究其基因表达谱,挖掘其功能基因。本研究共获得40 295条表达序列标签(express sequence tags,EST),平均长度305 bp。经序列合并拼接,获得22 095条单基因簇(unigene)。通过核苷酸和蛋白质序列等方面的同源性分析,表明其中61.6%(13 611条)与其他生物的已知基因具有不同程度的同源性。通过功能分类研究(GeneOntology)和代谢途径分析(KEGG)获得参与沉香倍半萜合成的序列26条(编码7个关键酶)。这些基因的发现为研究沉香倍半萜化合物的生物合成途径及伤害诱导沉香形成的分子机制提供了基础数据。
- 张争高志晖魏建和徐艳红李滢杨云孟慧隋春汪孟曦
- 关键词：国产沉香白木香
- 白木香AsNINJA1基因全长cDNA克隆及其在愈伤组织中的茉莉酸甲酯诱导表达被引量：3
- 2014年
- 目的克隆国产沉香基原植物白木香Aquilaria sinensis互作蛋白(jasmonate Zim-domain,JAZ)基因(NINJA),为深入研究其在沉香倍半萜合成途径中的功能奠定基础。方法以白木香总RNA为模板,采用RACE法和RT-PCR方法,克隆白木香NINJA基因cDNA全长,并进行生物信息学的分析;采用实时荧光定量(qRT-PCR)方法分析经茉莉酸甲酯(MeJA)处理的白木香愈伤组织中AsNINJA1基因的表达模式。结果获得白木香NINJA基因全长cDNA,命名为AsNINJA1。序列分析表明,该基因的序列全长为1 982 bp,包含一个1 221 bp的开放阅读框,编码406个氨基酸,蛋白质相对分子质量为43 697,等电点为6.02。qRT-PCR结果显示,经MeJA处理4 h后AsNINJA1基因相对表达量最高,是对照(未经MeJA处理的白木香愈伤组织)的近100倍,随后显著下降。结论获得AsNINJA1基因全长cDNA序列,该基因对MeJA诱导极为敏感,且能在伤害早期响应。
- 廖永翠徐艳红张争隋春梁良魏建和
- 关键词：白木香茉莉酸甲酯
- 白木香法呢基焦磷合酶基因AsFPS1的克隆及表达分析被引量：10
- 2013年
- 法呢基焦磷酸合酶(FPS)是倍半萜代谢途径中的关键限速酶之一。本研究在454高通量测序已获得的cDNA序列基础上,PCR扩增其开放阅读框并测序验证;提取三年生白木香根、茎、叶的总RNA及健康和伤害处理的愈伤组织的总RNA,以反转录成的单链cDNA为模板进行荧光定量PCR,检测AsFPS1基因的组织表达特异性及对伤害处理的反应。结果表明,扩增到的AsFPS1基因全长1 342 bp,开放阅读框1 029 bp,编码342个氨基酸。组织表达分析的结果显示,AsFPS1基因主要在根和茎中表达,叶中的表达量较低;该基因同时受物理伤害和结香液处理的诱导,分别在6,12 h达到最高表达水平。通过AsFPS1基因全长cDNA的克隆和表达分析,为后续研究其生物功能及沉香倍半萜合成机制奠定了基础。
- 杨欣魏建和刘娟徐艳红
- 关键词：白木香克隆
