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国家大学生创新性实验计划(2010A72110)
作品数:
2
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相关作者:
徐慧英
马淑梅
刘晓冬
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乏氧诱导因子1α在电离辐射诱导人乳腺癌细胞自噬性死亡中的作用
被引量:2
2012年
目的探讨乏氧诱导因子1α(HIF-101)在辐射诱导人乳腺癌MCF.7细胞自噬性死亡中的作用。方法将人乳腺癌MCF-7细胞分为对照组(常氧组,21%氧气)、照射组(8Gyx射线)、乏氧组(150μmol/LCoCl2)、乏氧加照射组(150μmol/LCoCl2+8Gy)。150μmol/LCoCl2处理细胞模拟乏氧条件。Westernblot法检测HIF-1α及MAPLC3蛋白表达;MDC及Hoeehst染色方法分别用于检测细胞自噬和凋亡变化情况;克隆形成方法检测细胞辐射敏感性。构建携带人靶向HIF-1α—siRNA的反转录病毒载体,建立MCF-7HIF-1仪Ri沉默细胞模型,将细胞分为对照组(常氧组)、照射组(8Gy)、乏氧组(CoCl:处理)、乏氧加照射组(CoCl2+8Gy),检测细胞辐射敏感性、自噬及凋亡情况。结果与对照组和照射组相比,HIF-1蛋白在乏氧组和乏氧加照射组表达明显增加,分别为0、0、1.00和1.89。与对照组相比,MAPLC3蛋白在照射组、乏氧组、乏氧加照射组的表达均明显上调,LC3II/LC31比值分别为1.15、1.73、2.38和3.60。细胞辐射敏感性顺次降低,常氧+三甲基腺嘌呤(3MA)组〉常氧组〉乏氧+3MA组〉乏氧组。成功构建HIF—let沉默模型(pSUPER-HIF-1仪Ri)与空载体对照模型(pSUPER),并检测了2种细胞的辐射敏感性。与常氧组相比,乏氧组MCF-7-pSUPER细胞存活分数显著增加(t=3.080、6.946、6.658、6.380,P〈0.05),辐射敏感性降低。而MCF-7-pSUPER—HIF-1αRi细胞,常氧与乏氧条件下细胞存活分数无明显改变。不同处理组(照射组、乏氧组和乏氧加照射组)的MCF-7-pSUPER-HIF-1aRi细胞与MCF-7-pSUPER细胞相比较,自噬百分率分别降低21.1%、25.5%和15.5%(t=-4.635、-4.738、-6.354,P〈0.05),但凋亡百分率差异无统计学意义。结论在人乳腺癌MCF-7细胞中HIF-1α可增加辐射诱导的自噬,同时降低辐射敏感性,对细胞凋�
徐慧英
刘晓冬
董永强
李文娜
李彩虹
刘兵
马淑梅
关键词:
自噬
X射线
乏氧
乏氧诱导因子1Α
脱氧胞苷激酶Ser-74位点在辐射诱导的乳腺癌细胞死亡中的作用
2012年
目的研究脱氧胞苷激酶(dCK)S74位点在辐射诱导乳腺癌细胞MCF-7死亡中的作用。方法采用脂质体转染方法在MCF-7中分别构建dCK—Vector(空载体)、dCK—WT(野生型)、dCK-S74A(非磷酸化型)及dCK-S74E(过磷酸化型)4种细胞模型,均分别予以0,2,4,6和8GyX射线照射。实时定量PCR(QPCR)及Westernblot验证细胞模型,CCK-8法和集落形成实验检测细胞存活率,单丹磺酰尸胺(MDC)检测自噬发生率,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果成功构建4种细胞模型;CCK_8结果显示,与0Gy组相比,MCF-7和dCK—Vector经8Gy照射后存活率下降(t=14.469和9.357,P〈0.05),dCK-WT、dCK-S74E和dCK-S74A没有改变(P〉0.05);与dCK-Vector比较,dCK-wT和dCK.$74E照射后的总死亡率降低(X2=3.857~3.971和3.857—3.859,P〈0.05),dCK-S74A则没有变化(P〉0.05);与各自0Gy组比较,MCF7、dCK—Vector和dCK-S74A照射后凋亡发生率升高(t=-4.531、-3.688和-7.076,P〈0.05),而dCK—wT和dCK-S74E使照射诱导的凋亡率逆转了66%和68%;dCK—wT和dCK-S74E照射后自噬率分别增加22%和26%(f=-9.051和-8.411,P〈0.01),dCK-S74A、MCF-7和dCK—Vector照射后的自噬率没有明显变化(P〉0.05)。结论riCK-WT和dCK-S74E使电离辐射诱导的凋亡率增加发生逆转,同时使自噬率增加,总死亡率降低,提示dCK在Ser.74的磷酸化与乳腺癌细胞MCF-7的辐射敏感性有关。
梁楠
信瑞
徐慧英
刘晓冬
高冰
侯威
张雪鹤
马淑梅
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电离辐射
自噬
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