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国家自然科学基金(30370783): 作品数：12 被引量：24H指数：3; 相关作者：傅松滨白静李璞张春玉冯源熙更多>>; 相关机构：哈尔滨医科大学黑龙江省生物医药工程重点实验室中国医学科学院肿瘤医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目国家教育部博士点基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

Isolation of double minuts by two dimensional pulse field gel electrophoresis: Gene amplification is one of the most common phenomena associated with tumorigenesis and neoplasia.As a main f...; 岳志超傅松滨; 文献传递

原子力显微镜在双微体研究中的方法学探讨: 2005年; 目的探讨影响原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)观察双微体(double minute chromosomes,DMs)的各种因素,包括原子力显微镜成像模式的选择,以及样品制备过程中各种条件的优化。方法培养耐氨甲喋呤(MTX)300μmol/L的小鼠成纤维细胞系3T3R500,收获中期染色体后制片,胃蛋白酶消化标本,梯度酒精脱水,最后用原子力显微镜观察染色体中期分裂相。结果优化条件后,在原子力显微镜下很容易找到分裂相。图像扫描显示,染色体在分散程度和清晰度上都有很大提高,双微体的成像质量也有极大的改善。结论优化染色体制片条件及选择恰当的原子力显微镜成像模式可获得高质量的DMs图片。; 张良玉邓新宇傅松滨; 关键词：原子力显微镜染色体双微体 AFM DMS 分辨率

基因扩增机制的研究进展被引量：3: 2005年; 基因扩增在很多恶性肿瘤发生发展中起重要作用。它是肿瘤细胞获得无限制生长及耐药的主要机制。基因扩增在细胞遗传学上主要表现为双微体(doubleminutes,DMs)和均质染色区(homoge-neouslystainingregions,HSR),了解基因扩增的机制可以为肿瘤治疗提供新的有效的途径。本文综述了基因扩增始动的机制,影响扩增的因素及基因扩增在细胞遗传学上的变化。; 张良玉张钰张小玲傅松滨; 关键词：基因扩增双微体肿瘤细胞肿瘤治疗

卵巢癌中TGF-β/Smads信号通路的功能研究被引量：4: 2004年; 为探讨卵巢癌细胞中TGF β的信号传导情况及TGF β/Smads信号通路各组分在卵巢癌发生中的作用 ,采用MTT和活细胞计数方法研究了TGF β1对卵巢癌细胞系HO 8910、HO 8910PM及SKOV3的生长抑制作用 ;并应用RT PCR、荧光免疫组化等方法研究了TGF β/Smads传导通路中各组分的表达和定位以及TGF β1刺激前后Smad7和P Smad2定位及表达的变化。结果显示 ,TGF β1对细胞系SKOV3没有生长抑制作用 ,而SKOV3细胞表达了TGF β/Smads信号通路中的所有已知成分。且 3种卵巢癌细胞在TGF β1刺激后Smad7mRNA瞬时表达增加 ,Smad7蛋白表达亦增加并由胞核转位到胞浆 ,P Smad2由胞浆转位到胞核。结果表明TGF β/Smads信号传导通路在卵巢癌细胞HO 8910、HO 8910PM和SKOV3中是完整的 ,SKOV3细胞逃逸TGF β介导的生长抑制作用可能是由于TGF; 张云艳李雪隋丽华王琦李璞傅松滨; 关键词：SMADS 卵巢癌

应用着丝粒探针检测40例卵巢癌患者8号染色体数目的异常增多: 2007年; 目的确定卵巢癌中8号染色体数目异常改变的频率,分析此改变与卵巢癌临床参数之间的相关性。方法应用着丝粒探针通过荧光原位杂交技术对40例卵巢癌标本进行8号染色体数目检测。结果40例卵巢癌患者中23例(57。5%)出现8号染色体数目增多,其中8号染色体数目变化与各临床参数之间存在相关性,但无统计学意义。结论8号染色体数目数目异常增多是卵巢癌特征性遗传改变,有可能成为卵巢癌分子诊断的标志物。; 姬宏飞李宁吴令英王明荣金焰白静傅松滨; 关键词：荧光原位杂交 8号染色体卵巢癌

人卵巢癌细胞及小鼠MTX抗性细胞中DMs大小的测定: 2006年; 目的测定肿瘤细胞及耐药性细胞中双微体(double minutes,DMs)的大小。方法应用PFGE(Pulsed field gradient gel electrophoresis)与Southern印迹杂交技术,对人卵巢癌细胞UACC-1598及氨甲蝶呤(Methotrexate,MTX)抗性的小鼠胚胎成纤维细胞中DMs的大小进行检测。结果发现UACC- 1598细胞中存在2．8Mb、2．1Mb及1．4Mb的DMs群体,提示多拷贝的扩增基因及其邻近的染色体区域经染色体断裂、易位及重排形成较大的DMs。同时,用浓度逐渐增高的MTX对小鼠胚胎成纤维细胞进行体外诱导,分离出富含DMs的不同MTX抗性程度的细胞群体。在MTX抗性细胞中检测到2．5Mb及1．4Mb的DMs群体,MTX100细胞中以1．4Mb的DMs群体为主,而MTX500细胞中以2．5Mb的DMs群体为主。结论MTX细胞中产生的扩增子结构在演化过程中趋向于寡聚化或多聚化形成较大片段的DMs。; 张钰邓新宇白静李璞傅松滨; 关键词：基因扩增双微体 PFGE

小鼠H_2B-GFP真核表达载体的构建与鉴定被引量：4: 2006年; 目的构建小鼠H2B-绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体,为动态观察小鼠细胞中染色体的形态变化,从而进一步研究小鼠耐药细胞中双微体(DMs)的形成机制提供有效的分子工具。方法利用RT-PCR的方法获得小鼠H2B cDNA,以羧基端插入pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO载体上,构建H2B-GFP真核表达载体,经菌液PCR、酶切及DNA测序鉴定插入片段大小、方向及序列的正确性,提取质粒转染小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3进行鉴定。结果经菌液PCR、酶切和测序,证明小鼠H2B-GFP真核表达载体含有大小、方向及序列正确的H2B cDNA片段,转染NIH3T3后在细胞核中表达。结论成功构建了同时携带有G418筛选位点及多酶切位点的小鼠H2B-GFP真核表达载体,为其在小鼠体外培养细胞中的表达奠定了基础。; 孙文靖马琳琳韩菲菲任聪傅松滨; 关键词：绿色荧光蛋白真核表达载体小鼠

亚甲基四氢叶酸还原酶在小鼠耐氨甲蝶呤细胞中的表达: 2007年; 目的在RNA水平研究小鼠耐氨甲蝶呤细胞中亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）的表达情况。方法采用RT-PCR的方法，对小鼠氨甲蝶呤（MTX）抗性细胞系中MTHFR的表达进行分析。结果在NIH3T3、3T3R500、MTX100、M3T200中MTHFR的表达量基本相同，而在MTX300中MTHFR的表达量明显下降。结论在RNA水平，耐药细胞耐药浓度的改变可导致MTHFR表达改变。; 李丁刘明睿王哲赵育桢白静傅松滨; 关键词：MTHFR MTX

运用蛋白质组学技术研究与氨甲蝶呤耐药性相关的蛋白质(英文)被引量：1: 2006年; 氨甲蝶呤(MTX)是一种重要的常用化疗药物,然而由于肿瘤细胞对其耐药性的增强而经常导致其疗效大大降低。为了寻找并鉴定与MTX耐药性相关的蛋白质从而为进一步阐明MTX的耐药机制提供线索,培养来源于小鼠NIH3T3的小鼠胚胎成纤维细胞系3T3R500与其耐300 mmol/L MTX的细胞系MTX300,提取上述两种细胞系的总蛋白质,双向凝胶电泳分离蛋白质组成分,扫描并通过软件分析考马斯亮蓝染色的2-DE凝胶,选取表达差异最显著的点,胶内酶切后MALDI-TOF-MS进行肽指纹图谱(PMF)鉴定。图像分析显示,实验组和对照组的蛋白质组图谱之间,一些蛋白质点的表达有明显的变化。通过MALDI-TOF-MS和数据库查询,成功鉴定了耐药后表达变化最显著的蛋白质点为二氢叶酸还原酶(DHFR),并通过Western blot验证了该结果,提示DHFR在MTX耐药机制中发挥重要作用。; 冯源熙白静张春玉傅松滨; 关键词：蛋白质组氨甲蝶呤耐药性双向凝胶电泳 MALDI-TOF-MS PMF

Molecular structure and differential expression of genes of double minute chromosomes in UACC-1598 and cooperation of target genes in ovarian cancer: Double minute chromosomes(DMs)are extrachromosomal elements(EEs),which are considered as the cytogenetic hallm...; 范义辉傅松滨; 关键词：METHYLATION; 文献传递

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