国家自然科学基金(31260594)
- 作品数：23 被引量：60H指数：5
- 相关作者：严玉霖高洪赵汝崔艳艳刘超英更多>>
- 相关机构：云南农业大学中国科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省现代农业生猪产业技术体系建设项目云南省教育厅科学研究基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 云南省3市猪蓝耳病血清学调查被引量：2
- 2016年
- 为了明确云南楚雄市、曲靖市和玉溪市猪蓝耳病即猪繁殖与呼吸障碍综合征（PRRS）的感染情况,从楚雄市、曲靖市和玉溪市的免疫猪群中随机采取血清进行血清学调查,了解PRRS的免疫情况,为做好相关防控措施提供一定的数据支持,从而保证该地区养猪业的健康发展。
- 曾梦颖闫晓霞刘欢欢严玉霖
- 关键词：血清学调查免疫猪抗体阳性率疫苗免疫效果免疫预防免疫操作
- 云南省楚雄地区散养户猪伪狂犬病野毒感染的血清学调查被引量：6
- 2015年
- 为了解云南省楚雄地区散养户猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染的情况,试验从楚雄地区9个散养户随机采集154份血清样本,并应用间接ELISA方法对血清样本进行PRVg E抗体检测。结果表明:在154份猪血清中,抗PRV g E抗体的阳性率为25.32%。说明楚雄地区散养户PRV野毒株感染率偏高。
- 吴程华高洪严玉霖赵汝刘欢欢董骎谭瑞杨培昌
- 关键词：散养户血清学调查
- 泛素基因沉默对TLR4/NF-κB信号通路中关键分子表达的影响被引量：1
- 2019年
- 为了探讨泛素(ubiquitin,简称Ub)对TLR4/NF-κB信号通路中关键分子表达的影响,通过脂质体将短发夹RNA(shRNA)质粒转染猪小肠上皮细胞,使其泛素基因沉默,于转染后6、12、24、48 h收集细胞及其上清。应用荧光定量PCR检测细胞内TLR4/NF-κB信号通路中关键分子TLR4、NF-κB、MyD88、IκB-α的mRNA表达水平,应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测NF-κB、IκB-α及炎性因子TNF-α、IL-1含量的变化。结果显示,shRNA质粒有效地抑制了泛素基因的表达,转染shRNA质粒后,TLR4/NF-κB信号通路中TLR4、NF-κB、MyD88和IκB-α的mRNA表达量及NF-κB、IκB-α、TNF-α和IL-1含量均普遍呈下降的趋势,说明泛素在炎性因子的释放中起着至关重要的作用,泛素基因的沉默能够抑制该通路的活化。
- 刘超英董骎高洪严玉霖富国文单春兰
- 关键词：泛素基因沉默信号通路炎性因子
- pEGFP-N1/Ub载体的构建及鉴定
- 引言泛素(Ubiquitin,Ub)是泛素-蛋白酶体途径的重要组成部分,具有标记待降解蛋白质的作用,具有高度保守性,泛素能与蛋白质形成牢固的共价键,蛋白质一旦被它标记上就会被送到细胞内的'垃圾处理厂'—26S蛋白酶体处进...
- 王微娜牛鑫谢丽君严玉霖高洪
- 内毒素致肝损伤中c-myc、Livin基因的表达及阳离子A的保护效应
- 内毒素不仅干扰细胞能量代谢和细胞内信号转导,更重要的是能够与单核巨噬细胞中受体结合,诱导细胞合成和释放炎症介质和多种细胞因子,可对肝脏细胞造成极大损伤。已有研究表明,肝细胞凋亡是机体内毒素血症所共有的特征症状,也是多数疾...
- 敖平星孔令青高洪
- 关键词：内毒素C-MYC基因LIVIN基因
- 文献传递
- 云南撒坝猪源大肠杆菌优势血清型强毒力岛的检测及其致病性被引量：5
- 2019年
- 为研究撒坝猪大肠杆菌强毒力岛(HPI)的致病性,对撒坝猪致病性大肠杆菌进行了分离和血清型鉴定,获取优势血清型,采用PCR检测HPI,进行同源性比较,并通过耐药性试验和致病性试验对分离菌株与HPI的相关性进行分析。结果显示:分离得到101株大肠杆菌,确定血清型84株,其中O3、O4、O24为优势血清型;HPI阳性率为88.64%,与GenBank登录的参考序列同源性比较大于99.3%;氨基糖苷类药物耐药性试验结果显示分离菌株普遍耐药,而HPI阳性株耐药性强,并检出含aac(3)-Ⅱa基因12株,含有aac(6′)-Ⅰb基因21株;致病性试验表明含irp2的菌株致病性强,而具有fyuA-irp2基因簇的菌株致病性更强。结果表明:HPI对大肠杆菌的毒力有增强作用。
- 刘超英蒋欢单春兰高洪严玉霖富国文赵汝
- 关键词：大肠杆菌血清型
- CSFV与PRRSV双重RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：1
- 2019年
- 为建立能同时检测猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的RT-PCR方法,根据CSFV和PRRSV的保守区域各设计1对特异性引物,预期扩增片段大小分别为356和546 bp,通过对反应条件的优化及特异性、灵敏性和重复性试验,建立了CSFV和PRRSV的双重RT-PCR方法。结果显示:该方法能特异检测CSFV和PRRSV的cDNA最低量分别为0.96、1.48 ng,而对猪伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒(PCV)检测结果均为阴性;利用建立的双重RT-PCR对云南省部分地区送检的174份疑似CSFV及PRRSV感染的病料进行检测显示,CSFV感染率为24.14%,PRRSV感染率为47.70%,CSFV与PRRSV的混合感染率为16.67%,检测结果与单一RT-PCR结果相一致,且具有良好的可重复性;利用免疫组织化学方法对部分检测结果加以验证,验证结果与检测结果均一致。本研究成功建立了CSFV和PRRSV双重RT-PCR检测方法,为二者的快速检测和分子流行病学调查提供了一种有效手段。
- 杨伟单春兰李林高洪严玉霖赵汝敖平星高利波刘超英富国文高斌景麟稀茶金龙王浩
- 关键词：猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒双重RT-PCR
- 撒坝猪源大肠杆菌高致病性毒力岛诱导病理损伤的超微结构特征被引量：1
- 2021年
- 为探究撒坝猪源大肠杆菌(E.coli)高致病性毒力岛(HPI)诱导小鼠病理损伤的超微结构特征,本研究将实验室保存的E.coli HPI阳性株(HPI^(+))和E.coli HPI基因缺失株(ΔHPI)进行复苏和培养,分别用E.coli HPI^(+)、E.coli^(Δ)HPI菌株以腹腔接种的方式感染昆明小鼠,检测菌株的半数致死量(50%lethal dose,LD50),通过HE染色和透射电镜观察并分析菌株对小鼠病理损伤的超微结构特征,利用免疫组织化学标记白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)阳性细胞在被感染小鼠肝脏和肾脏组织中的分布,以反映E.coli HPI+及E.coliΔHPI菌株所引起炎症水平的差异。结果显示,E.coli HPI^(+)和E.coli^(Δ)HPI菌株的半数致死量分别为1×10^(7.39)和1×10^(8.62)CFU/mL;HE染色显示,E.coli感染小鼠后,可见肝脏细胞肿胀、变性,肝窦淤血,肾脏间质淤血,肾小管上皮细胞变性脱落等病理变化;超微结构变化显示,肝脏细胞的完整形态消失,胞核呈不规则形态,线粒体畸形,粗面内质网上核糖体脱落,滑面内质网增生;多数肾小管上皮细胞出现胞核固缩,部分细胞核核仁边移、体积增大,足突融合,系膜细胞间隙变宽。此外,E.coli HPI^(+)感染组小鼠于肝脏、肾脏的水肿现象较E.coli^(Δ)HPI菌株感染的小鼠更为明显。免疫组化结果显示,大肠杆菌感染小鼠后,IL-1β蛋白主要表达于肝细胞、中央静脉周围、肾间质细胞和肾小管上皮细胞,且E.coli HPI^(+)感染组的IL-1β表达量高于E.coli^(Δ)HPI感染组。综上所述,撒坝猪源E.coli HPI能够调控E.coli对小鼠的致病性,HPI的调控作用可使E.coli对小鼠肝脏、肾脏造成的病变及超微结构变化更明显,并且能够增加小鼠的炎症反应。
- 单春兰张博赵维薇王浩杨伟邓静赵汝高利波肖鹏吕龙宝高洪
- 关键词：大肠杆菌
- Red同源重组技术在大肠埃希菌基因敲除中的应用被引量：8
- 2015年
- 近年来,大肠埃希菌一直是分子生物学和基因组学的重要研究对象。20世纪80年代以来,生物学家发展了一种新型分子生物学技术-基因敲除。大肠埃希菌基因敲除技术发展迅速,各种新型技术的出现使得其基因组的改造较以往更为快速、简单,尤其是Red同源重组技术在大肠埃希菌基因敲除中的应用已经越来越成熟。本文简要综述了利用Red同源重组技术进行大肠埃希菌基因敲除的原理、策略及应用现状。
- 吴程华严玉霖高洪谭锐董骎
- 关键词：大肠埃希菌基因敲除
- 树鼩源大肠杆菌分离鉴定及耶尔森强毒力岛相关基因的检测及序列分析被引量：1
- 2022年
- 【目的】研究树鼩源大肠杆菌耶尔森强毒力岛(HPI)相关基因的携带情况及其耐药性,为树鼩的饲养管理及大肠杆菌病的防治提供一定思路。【方法】无菌采集树鼩肛拭子样品129份,采用麦康凯培养基、LB琼脂培养基、革兰氏染色和生化试验进行细菌分离鉴定,用PCR法对分离菌株进行HPI相关基因检测,经PCR鉴定后筛选HPI阳性菌株并对该菌株的主要结构基因irp2和fyuA进行相似性分析和系统发育树构建,采用纸片扩散法对分离菌株进行药敏试验。【结果】129份树鼩肛拭子样品共分离得到123株大肠杆菌,分离率为95.35%(123/129);革兰氏染色结果显示,分离菌株镜检为红色粗短杆菌;生化鉴定结果显示,分离菌株对乳糖、葡萄糖、麦芽糖、蛋白胨和甘露醇生化反应呈阳性,硫化氢和尿素酶生化反应呈阴性,均符合大肠杆菌特性;PCR产物电泳结果显示,HPI相关基因检出率为88.62%(109/123),irp2基因携带率为34.15%(42/123),fyuA基因携带率为47.97%(59/123);主要结构基因序列分析结果显示,irp2和fyuA基因与GenBank中公开发表的irp2和fyuA基因序列相似性分别达到98.6%和98.9%以上;系统发育树结果显示,分离菌株与耶尔森菌属亲缘关系较近;耐药性分析结果显示,分离菌株对阿米卡星和氟苯尼考敏感,对阿莫西林和苯唑西林耐药,耐药率分别为87.80%和81.30%。【结论】HPI相关基因在树鼩大肠杆菌中广泛分布,进一步证实HPI可发生水平转移,且主要结构基因irp2和fyuA的遗传具有较高保守性。
- 陈柄汛韩冬梅赵维薇张博邓静万全王喜肖鹏吕龙宝高洪
- 关键词：树鼩大肠杆菌
