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“九五”国家科技攻关计划(G99B8-1-1)

作品数:5 被引量:29H指数:4
相关作者:李一经刘宝全唐丽杰贾永清王君伟更多>>
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发文基金:“九五”国家科技攻关计划更多>>
相关领域:农业科学更多>>

文献类型

  • 5篇中文期刊文章

领域

  • 5篇农业科学

主题

  • 5篇克隆
  • 5篇病毒
  • 3篇猪传染性胃肠...
  • 3篇胃肠炎
  • 3篇胃肠炎病毒
  • 3篇肠炎
  • 3篇肠炎病毒
  • 3篇传染
  • 3篇传染性
  • 3篇传染性胃肠炎
  • 3篇传染性胃肠炎...
  • 2篇蛋白基因
  • 2篇衣壳
  • 2篇核衣壳
  • 1篇印迹
  • 1篇原核表达
  • 1篇中国分离株
  • 1篇同源性
  • 1篇同源性比较
  • 1篇猪传染性胃肠...

机构

  • 5篇东北农业大学

作者

  • 5篇李一经
  • 3篇刘宝全
  • 2篇唐丽杰
  • 2篇王君伟
  • 2篇贾永清
  • 2篇师东方
  • 1篇李广兴
  • 1篇任晓峰
  • 1篇徐宏军
  • 1篇陈淑红
  • 1篇王荣军

传媒

  • 2篇中国兽医杂志
  • 2篇畜牧兽医学报
  • 1篇中国兽医科技

年份

  • 1篇2005
  • 1篇2003
  • 3篇2002
5 条 记 录,以下是 1-5
排序方式:
猪轮状病毒中国分离株JL94 VP7基因的克隆与序列分析被引量:4
2003年
用 MA10 4细胞培养增殖了轮状病毒地方分离株 JL94。利用一对根据 Genebank中已发表的轮状病毒 VP7基因c DNA序列而设计并合成的引物 ,通过反转录—聚合酶链反应 (RT- PCR)从 JL94毒株扩增出 VP7基因全长 c DNA。将其插入p MD18- T载体中 ,构建了重组质粒 p MD18- T- JL 94 / VP7,并对其进行了 Hind ,Hind 和 Bam H 的单、双酶切初步鉴定及其核苷酸序列测定 ,证明克隆的 p MD18- T- JL94 / VP7为轮状病毒的 VP7基因。通过核苷酸序列比较 ,JL94 / VP7与 A群猪轮状病毒 C134/ VP7、OSU / VP7、ICB2 185 / VP7、YM/ VP7核苷酸序列同源性分别为 87%、99%、74 %和 83%。
师东方李一经贾永清王君伟刘宝全徐宏军陈淑红
关键词:轮状病毒中国分离株VP7基因克隆
猪流行性腹泻病毒LJB/03株的分离及膜蛋白基因的原核表达被引量:6
2005年
A strain of virus was isolated from faeces of diarrhea piglet using the Vero cells,and was identified as PEDV by RT-nested PCR,then was named as LJB/03.The 854 bp M gene of LJB/03 was amplified by RT-PCR,then was directly inserted into pMD18-T,and sequenced.The 854bp PM gene was sub-cloned into a prokaryotic expression vector pGEX-6P-1.A positive colony pGEX-6P-PM was translated into BL21(DE3)plysS.High-level expression of recombinant fusion protein was obtained after induced by IPTG.43 ku fusion protein was tested by SDS-PAGE and can be recognized by the positive serum of PEDV by Western-blot.Through gel thin layer scanning analysis,the amount of target protein is over 33.7%.So the recombinant M protein can be a valuable diagnosis or therapeutic agent for the diseases.
吴凌李一经
关键词:猪流行性腹泻病毒M基因克隆原核表达免疫印迹
猪传染性胃肠炎病毒核衣壳N蛋白基因的克隆与鉴定被引量:7
2002年
根据文献已发表的猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)cDNA基因序列 ,设计和合成 1对引物 ,以TGEVTH 98强毒株基因组mRNA为模板 ,通过RTPCR技术扩增其N基因 ;将RTPCR产物按正确的阅读框架 (ORF)定向克隆到载体pProEXHTb上 ,重组质粒PHN转化进大肠埃希氏菌DH5α株 ,通过酶切分析及序列测定表明已成功获得了TGEVN基因的无性繁殖体系。TH 98强毒株的N基因与Purdue 115株、FS772 / 70株、TO14株、96193 3株及TFⅠ株的核苷酸序列的同源性分别为 99%、97%、97%、95 %和 96% ,氨基酸序列的同源性分别为 99%、97%、98%、96%和 97%。
唐丽杰师东方李一经王荣军
关键词:传染性胃肠炎病毒N基因克隆核衣壳
猪传染性胃肠炎病毒核衣壳(N)蛋白基因的克隆与表达被引量:8
2002年
以猪传染性胃肠炎病毒亚基因组mRNA为模板根据文献设计一对引物 ,通过RT -RCR技术 ,扩增其核衣壳(N)蛋白基因的cDNA ;将其按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pProEXHTb中特异酶切位点 ;将重组质粒PHN转化进大肠杆菌TG1株 ,在浓度为 1 0mMIPTG和 37℃条件下诱导 ,PHN基因融合蛋白获得了表达 ;经SDS -PAGE ,Western blot试验 ,确定其表达的融合蛋白产物大小为预期的 47kD。试验结果证明 。
唐丽杰李一经贾永清王君伟刘宝全
关键词:传染性胃肠炎病毒核衣壳克隆蛋白基因基因表达
猪传染性胃肠炎病毒TH-98株S基因的克隆与同源性比较被引量:6
2002年
用猪睾丸 (Swine testicle,ST)细胞繁殖并扩增猪传染性胃肠炎病毒国内分离株 TH- 98,根据 Gen Bank中已发表的TGEV S基因 c DNA序列 ,利用 Oligo4.1程序软件设计并合成两对引物 ,进行逆转录聚合酶链式反应 (RT- PCR) ,扩增出2 .3kb和 2 .1kb两个片段 ,分别命名为 Sa与 Sb,先后插入到 p UC18质粒载体上的 Eco RI和 Pst I多克隆位点上 ,构建了重组质粒 p UC- S。根据 TGEV S基因位点和 p UC18的物理图谱 ,用相应的限制性内切酶进行酶切及套式 PCR方法进行鉴定、分析 ,证明克隆的 p UC- S为 TGEV S基因。同时对 p U C- S进行序列测定分析 ,并与来自美国、英国和日本的五个毒株进行核苷酸及编码氨基酸同源性比较 ,证明了
任晓峰李一经李广兴刘宝全
关键词:猪传染性胃肠炎病毒TH-98株S基因克隆同源性比较
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