国家自然科学基金(30770993)
- 作品数：23 被引量：81H指数：6
- 相关作者：刘云鹏曲秀娟侯科佐张晔刘静更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第一医院中国医科大学辽宁省肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省科技厅科技攻关项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- β-榄香烯对肾细胞癌的抗肿瘤作用及机制研究被引量：9
- 2012年
- 目的:探讨β-榄香烯对肾细胞癌786-0细胞的抗肿瘤作用及机制。方法:浓度为50,100,150,200和250μg/mlβ-榄香烯作用于肾癌786-0细胞24、48和72h,MTT法检测细胞活力。50,150μg/mlβ-榄香烯作用于786-0细胞24h,流式细胞术碘化丙啶(PI)染色检测细胞凋亡和周期分布,免疫印迹法检测PARP裂解和凋亡相关蛋白的表达。结果:β-榄香烯对肾癌786-0细胞的抑制作用随着浓度和时间的增加而增强。流式细胞术结果提示β-榄香烯可诱导细胞凋亡,而对细胞周期分布无明显影响。β-榄香烯可裂解PARP,并下调抗凋亡蛋白Bcl-2和Survivin的表达。结论:β-榄香烯可能通过诱导细胞凋亡发挥对肾癌786-0细胞的抗肿瘤作用。
- 詹运洪王科峰刘静曲秀娟刘云鹏侯科佐吴斌
- 关键词：Β-榄香烯肾细胞癌凋亡
- 抑制JNK通路对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡影响的研究被引量：6
- 2011年
- 目的:研究JNK信号传导通路对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的影响。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞活力;蛋白质印迹法检测细胞内磷酸化JNK及总JNK的表达水平;流式细胞术碘化丙啶(PI)染色检测细胞凋亡及细胞周期分布。为研究JNK通路活性对TRAIL抗肿瘤作用的影响,将实验分为空白对照组、TRAIL单药组(100μg/L)、JNK抑制剂组(SP600125,20μmol/L)和联合用药组(SP600125+TRAIL)。结果:采用25、50、100和200μg/LTRAIL作用于MGC803细胞24 h,细胞活力仅轻度下降。进一步研究发现,TRAIL作用后细胞内磷酸化JNK水平明显升高,提示JNK信号通路被活化。同TRAIL单药组相比,联合用药组的细胞活力明显降低〔(53.5±3.2)%vs(88.3±1.1)%,P<0.05〕,细胞凋亡明显增加〔(21.3±5.1)%vs(5.7±0.1)%,P<0.05〕,G2/M期细胞比例明显升高〔(38.0±6.0)%vs(25.7±2.9)%,P<0.05〕。结论:抑制JNK通路能明显增强TRAIL对MGC803细胞的抗肿瘤作用,其机制可能与诱导细胞凋亡及G2/M期阻滞有关。
- 刘静曲秀娟刘云鹏徐玲侯科佐张晔
- 关键词：胃肿瘤JNKTRAIL细胞凋亡
- LY294002与化疗药物联用对白血病K562细胞多药耐药的逆转作用
- 2008年
- 背景与目的:传统逆转白血病多药耐药的药物由于不良反应大而限制了其在临床中的应用,进一步研究白血病多药耐药产生机制和有效逆转靶点成为攻克白血病多药耐药的关键。为此,本研究探讨LY294002[磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3-K/Akt)通路抑制剂]对人类白血病K562细胞多药耐药的逆转作用。方法:锥虫蓝拒染法测定细胞生长增殖。Western印迹检测K562/S和K562/D细胞中P-gp及p-Akt的表达。流式细胞术检测细胞内药物积聚。结果:K562/D细胞对柔红霉素(DNR)、多柔比星(ADR)、长春新碱(VCR)、依托泊苷(vP16)交叉耐药,相对其亲本细胞的耐药倍数分别为65、52、134和50。DNR诱导了K562/D细胞的P-gp、p-Akt过度表达。LY294002使K562/D细胞内药物积聚增加,部分逆转了K562/D细胞对DNR、ADR、VCR、VP16的耐药性(相对耐药倍数降至23、21、63和29),而对敏感细胞K562/S的耐药性无影响。结论:LY294002部分逆转K562/ D细胞的多药耐药,可能于DNR诱导K562/D细胞的P-gp、p-Akt过度表达而LY294002抑制PI3-K/Akt信号转导通路有关。
- 张晔曲秀娟刘云鹏荆薇侯科佐滕月娥张敬东
- 关键词：白血病多药耐药
- 奥沙利铂通过上调死亡受体表达增强TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的实验研究被引量：2
- 2010年
- 目的:研究奥沙利铂对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的影响,探讨死亡受体5(DR5)在TRAIL诱导细胞凋亡中的作用。方法:采用MTT法测定细胞活力、采用流式细胞仪检测细胞凋亡,采用Western blot检测DR5蛋白表达。结果:100ng/ml的TRAIL导致轻度的增殖抑制,诱导不超过5%的细胞凋亡;TRAIL(100ng/ml)联合奥沙利铂(23.44μg/ml)引起明显的细胞增殖抑制和细胞凋亡(P<0.05),TRAIL没有明显改变死亡受体5(DR5)的表达,而23.44μg/ml奥沙利铂作用胃癌细胞24小时后,明显上调了DR5的表达。结论:奥沙利铂通过上调DR5的表达增强TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡。
- 徐玲刘静刘云鹏曲秀娟张晔侯科佐姜又红
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体奥沙利铂胃癌凋亡死亡受体
- PI3-K抑制剂LY294002逆转P-gp介导的白血病和胃癌细胞耐药被引量：8
- 2009年
- 背景与目的:磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B[phosphatidylinositol-3-kinase(PI3-K)/protein kinase B(Akt),PI3-K/Akt]通路是调控细胞生存的重要信号转导通路之一。本研究旨在探讨PI3-K抑制剂LY294002对P-gp过表达的人类白血病K562/DNR和胃癌SGC7901/ADR细胞多药耐药性的逆转作用。方法:将细胞分为单纯药物组和LY294002预处理组,单纯药物组分别以柔红霉素(daunorubicin,DNR)、阿霉素(adriamycin,ADR)、长春新碱(vincristine,VCR)和依托泊甙(etoposide,VP-16)处理,LY294002预处理组在加药前以LY294002进行预处理。用台盼蓝拒染法及MTT法检测药物敏感性及LY294002对细胞耐药性的影响。Western blot检测K562/DNR和SGC7901/ADR细胞中P-gp及p-Akt的表达。流式细胞术检测细胞内药物浓度。结果:2.5μmol/LLY294002预处理显著降低DNR、ADR、VCR和VP-16对K562/DNR细胞的IC50,相对逆转效率分别为72.4%、64.9%、60.4%和52.8%。此外,LY294002部分逆转SGC7901/ADR对ADR的耐药性,相对逆转效率为31.0%。LY294002预处理可部分抑制p-Akt和P-gp的表达,随着处理时间的延长,K562/DNR、SGC7901/ADR细胞内DNR、ADR的蓄积效应有增强的趋势。结论:LY294002通过抑制PI3-K/Akt信号转导通路,部分逆转P-gp介导的白血病和胃癌细胞的多药耐药。
- 张晔曲秀娟刘云鹏杨向红侯科佐滕月娥张敬东
- 关键词：白血病多药耐药
- NF-κB通路在TNF-α诱导胃癌细胞凋亡中的作用被引量：2
- 2010年
- 目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对胃癌细胞凋亡的诱导作用,以及核因子κB(NF-κB)通路活性对TNF-α诱导凋亡的影响。方法不同浓度TNF-α处理人胃癌细胞株SGC7901细胞24h,采用MTT方法检测细胞活力;流式细胞术碘化丙锭(PI)染色分析细胞凋亡;Westernblot检测蛋白表达;采用Lipofectamine2000试剂行瞬时转染,实验组转染突变型NF-κB抑制蛋白(IκB)的cDNA,对照组转染空载体。结果 100,1000及10000U/ml的TNF-α作用SGC7901细胞24h后,细胞存活率分别为(99.2±0.6)%,(92.0±2.7)%和(97.9±2.2)%。TNF-α可快速活化NF-κB通路。以转染突变型IκB的cDNA阻断NF-κB通路活化,可明显增强细胞对TNF-α诱导凋亡的敏感性。结论 NF-κB通路参与人胃癌细胞对TNF-α诱导凋亡的耐药,抑制NF-κB通路可明显增强细胞对TNF-α的敏感性,逆转耐药。
- 刘静徐玲刘云鹏曲秀娟张晔侯科佐
- 关键词：肿瘤坏死因子Α核因子ΚB胃癌凋亡
- 紫杉醇提高胃癌MGC803细胞对TRAIL的敏感性被引量：3
- 2011年
- 目的:研究紫杉醇对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的影响,探讨死亡受体5(DR5)在TRAIL诱导细胞凋亡中的作用。方法:采用MTT法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,western blot检测蛋白表达。结果:在MGC803细胞中,100ng/ml的TRAIL导致轻度的增殖抑制和细胞凋亡,TRAIL(100ng/ml)联合紫杉醇(3.41g/ml)引起明显的增殖抑制和细胞凋亡(P<0.05)。TRAIL单药没有改变死亡受体5(DR5)的表达,而3.41g/ml紫杉醇作用MGC803细胞后明显上调了DR5的表达。结论:紫杉醇通过上调DR5的表达增强TRAIL诱导的胃癌MGC803细胞凋亡。
- 徐玲曲秀娟刘云鹏刘静侯科佐张晔
- 关键词：TRAIL紫杉醇胃癌凋亡死亡受体
- 3种胃癌细胞株中GSTP1基因表达及其启动子区甲基化状态的研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究候选基因GSTP1在胃癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,初步探讨胃癌细胞株GSTP1基因表达水平与其启动子区甲基化的相关性。方法采用RT-PCR和Western blot技术分别检测GSTP1在人胃癌细胞株MGC803、BGC823和SGC7901中的mRNA和蛋白表达水平。甲基化特异性PCR(MSP)法检测启动子区域甲基化状态。分别用不同浓度的去甲基化药物5-氮杂胞苷处理GSTP1基因启动子区高甲基化状态细胞后,再检测GSTP1基因蛋白表达水平。结果人胃癌细胞株BGC823和SGC7901中GSTP1 mRNA和蛋白呈阳性表达,MGC803中mRNA和蛋白呈阴性表达;BGC823和SGC7901细胞GSTP1基因启动子区域未发生甲基化,而MGC803细胞启动子区呈高甲基化状态;经5-氮杂胞苷药物干预后,MGC803细胞的GSTP1蛋白表达明显增强。结论胃癌MGC803细胞株中GSTP1基因表达沉默与启动子区高甲基化状态有关。
- 张晔曲秀娟刘云鹏荆薇杨向红侯科佐滕月娥
- 关键词：GSTP1基因DNA甲基化胃癌5-氮杂胞苷
- ERK信号传导通路在β-榄香烯诱导肾癌细胞凋亡中作用的研究被引量：6
- 2012年
- 目的:探讨ERK信号传导通路在β-榄香烯诱导肾癌细胞凋亡中的作用。方法:以人肾透明细胞癌786-0细胞为研究对象,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞活力;流式细胞术碘化丙啶(PI)染色检测细胞凋亡;蛋白印迹法检测细胞内磷酸化ERK及总ERK的表达水平。为研究ERK通路活性对β-榄香烯抗肿瘤作用的影响,将实验分为空白对照组,β-榄香烯单药组(160μg/mL)、ERK抑制剂组(PD98059,20μmol/L)和联合用药组(PD98059+β-榄香烯)。结果:40、80、160及320μg/mL的β-榄香烯作用于786-0细胞24h,细胞生存率逐渐下降,分别为(83.20±4.63)%、(74.29±3.50)%、(49.75±3.08)%和(16.99±4.73)%,相邻浓度间P均<0.05。随着浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加。进一步研究发现,β-榄香烯可明显抑制细胞内磷酸化ERK的水平。同β-榄香烯单药组相比,联合用药组的细胞活力明显降低,差异有统计学意义〔(52.73±6.36)%vs(39.24±3.24)%〕,P<0.05。结论:β-榄香烯可能通过抑制ERK通路活性发挥对肾癌细胞的抗肿瘤作用。
- 詹运洪孙明刘静刘云鹏曲秀娟侯科佐吴斌
- 关键词：肾细胞癌ERKΒ-榄香烯凋亡
- 胃癌组织Akt和p-Akt蛋白及耐药相关蛋白表达临床意义的研究被引量：3
- 2009年
- 目的:检测胃癌组织Akt和p-Akt蛋白与胃癌生物学行为的相关性,及其与耐药相关蛋白P-gp和Gst-pi表达的相互关系。方法:将124例胃癌标本和16例正常胃黏膜标本制作成组织芯片,应用免疫组织化学SP法检测Akt、p-Akt、P-gp及Gst-pi蛋白的表达。同时利用蛋白质印迹法检测Akt、p-Akt、P-gp及Gst-pi在胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR及其亲本细胞中的表达。结果:Akt和p-Akt在胃癌组织中的阳性表达率分别为82.3%和71.0%,显著高于正常胃黏膜,且两者表达均与胃癌的TNM分期有关(P<0.05)。p-Akt和P-gp表达成正相关,与Gst-pi表达无关,而Akt与P-gp、Gst-pi表达均无关。蛋白质印迹法结果提示,p-Akt在SGC7901/ADR中的表达显著高于其亲本细胞,而Akt在胃癌耐药和亲本细胞中的表达差异无统计学意义。结论:p-Akt过度表达可能参与P-gp介导的多药耐药,为临床采用Akt抑制剂以增加胃癌细胞的化疗敏感性提供了依据。
- 张晔曲秀娟刘云鹏荆薇杨向红侯科佐滕月娥张敬东
- 关键词：组织芯片AKTP-AKT多药耐药相关蛋白质类
